3 . 荧光PCR法根据化学发光原理可以分为染料法和探针法。染料法中特殊染料本身不发光，但是当PCR扩增的时候，染料能够与DNA双链结合从而发光，如图1所示。探针法中除了引物外另外设置了一个探针，在探针的两端分别带上发光基团和淬灭基团，此时发光基团并不发光，但是当DNA通过引物合成的时候，探针被酶切降解释放出发光基团和淬灭基团，两种基团分开后产生荧光，如图2所示。下列说法正确的是（       ）

A．两种方法均可用于目标DNA的定量分析

B．与染料法相比，探针法的特异性更强

C．通过适当延长引物长度和降低复性温度可提高荧光PCR的特异性

D．用荧光PCR法检测人体是否感染新冠病毒前需要先进行逆转录

4 . 面对新冠疫情，我国一直坚持严格防控措施，“零容忍”彰显人民立场制度优势。坚持中高风险地区的大面积核酸检测、适龄人群接种疫苗构建免疫屏障是严格防控的主要措施。新冠病毒核酸检测常采用RT﹣PCR检测法，技术流程如下图，①②③④⑤表示相关步骤。

回答下列问题：
(1)步骤①需要的酶是________，步骤④需要的酶是________，引物A和引物B是根据________序列合成的。
(2)步骤③的目的是________，如果该步骤出现失误，对检测结果的影响是________。
(3)新冠病毒抗体检测可作为核酸检测的补充，抗体检测的原理是________。对某人进行检测时发现，其核酸检测为阴性，抗体检测呈阳性，原因可能是________。

6 . 新冠病毒的流行给人类生活造成极大的影响，接种疫苗和病毒筛查是防控新冠肺炎疫情的有效措施。常见的病毒疫苗有灭活疫苗、腺病毒疫苗、重组蛋白疫苗等。下图所示为重组蛋白新冠疫苗的技术路线，箭头表示限制酶BamH、Nhel，SphI、NcoI的酶切位点（四种酶的识别序列和切割位点详见下表）。

限制酶种类	BamHI	NheI	SphI	NcoI
识别序列和切制位点	5′-G↓CTAGC-3′	5′-G↓GATCC-3′	5′-GCATG↓C-3′	5′-C↓CATGG-3′

(1)新型冠状病毒表面抗原主要为S蛋白，是研制新冠疫苗的关键起点。在构建基因表达载体时，需要使用限制酶__________对图中的质粒进行切割。结合图示分析，S蛋白基因在受体细胞中表达的模板链是__________（填“a链”或“b链”）。
(2)S蛋白表面具有多个不同的抗原决定簇，不同的抗原决定簇能刺激机体产生不同的抗体。由同一抗原诱导产生的针对多个抗原决定簇的抗体称为多克隆抗体，多克隆抗体可直接从免疫动物的血清中分离出来。而只含有针对一个抗原决定簇的抗体称为单克隆抗体。在制备抗S蛋白的单克隆抗体和多单克隆抗体的过程，S蛋白的纯度对__________抗体的纯度影响较小，原因是__________。
(3)判断个体是否被新冠病毒感染，可采用的检测方法有核酸检测、抗体检测和抗原检测。抗原检测常采用双抗体夹心法，下图所示为抗原检测部件：金标垫中含有大量且可移动的金标抗体1，T线固定了抗体2，C线固定了抗金标抗体1的抗体，抗体1和抗体2可与同一抗原的不同抗原决定簇发生特异性结合，当金标抗体1聚集在T线和C线时则呈现红色。将待测样液滴加到样本垫处并向前（下图右侧）移动，若T线和C线的显色情况是__________，说明样液中含新冠病毒，即检测结果为阳性；若T线和C线的显色情况是________，则检测结果为阴性；若出现其它显示情况，则检测结果无效。

7 . 2020年，2019—nCoV（新型冠状病毒）肆虐全球，直至今日，疫情在很多国家仍没有得到有效控制。下图1为2019-nCoV的结构示意图，其中蛋白S（刺突糖蛋白）通过与人体黏膜细胞表面的ACE2受体结合而进入细胞，蛋白M能刺激机体产生免疫反应；图2是科研人员研制新冠病毒疫苗的一条技术路线。请据图回答有关问题。

(1)2019-nCoV能通过蛋白S感染人的黏膜细胞，却不能感染人的皮肤细胞，其根本原因是_______________。故切断病毒传播的有效途径之一是________
(2)图2中①过程为__________构建重组 DNA需要的工具酶有_______，其中的目的基因指的是___________过程③要先将大肠杆菌处理成_____________选择大肠杆菌做受体细胞的原因是_________________
(3)pVAX1是一种可以应用于人体的载体质粒，其化学本质是_____________，它在与目的基因一起构建疫苗Ⅱ时，一般需要使用两种限制性核酸内切酶切割目的基因和pVAX1，这样做的目的是：_________________________________________
(4)疫苗Ⅰ和疫苗Ⅱ同为通过基因工程获得的疫苗，它们在人体内引起的免疫效应的不同之处是：疫苗Ⅰ是注射蛋白M（蛋白细胞），可直接作为______激发人体的免疫反应并产生_______；而疫苗Ⅱ则是将构建的______疫苗注射到动物体内通过转录、翻译合成蛋白M，进而激发免疫反应。