3 . 大肠杆菌改造
I.甲醇（分子式CH₃OH）是一种重要的有机化工原料，价格低廉，来源广泛，但不能被大肠杆菌利用。为获得能够高效利用甲醇的大肠杆菌，研究人员根据图1所示甲基芽孢杆菌中的甲醇代谢途径，对大肠杆菌进行改造。其中，F6P、FBP是各种细胞进行糖酵解过程的重要中间产物，而甲醛和H6P是甲醇代谢途径中特有的。

图1

(1)甲基芽孢杆菌甲醇代谢途径中的各种酶都具有相同的____。（多选）
A化学本质       B 活性中心       C合成场所       D 空间结构
(2)酶4发挥作用的场所是____。（单选）
A质膜       B细胞质基质       C 线粒体       D核糖体
II.对大肠杆菌的改造过程如图2，其中I~IV代表操作步骤，Amp^r表示氨苄青霉素抗性基因。在步骤IV，研究人员向大肠杆菌中引入突变的dnaQ基因（正常dnaQ基因是DNA聚合酶保真性的关键），并利用以甲醇为唯一碳源的液体培养基进行连续培养，即可实现菌株的定向进化，从而获得高效利用甲醇的大肠杆菌。

图2

(3)图2获取的目的基因应包括甲基芽孢杆菌中的____。（编号选填）
①酶1基因②酶2基因③酶3基因④酶4基因
(4)图2步骤II为____。
(5)在图2步骤I和步骤II中，应选用的工具酶分别是____。（单选）

	步骤I	步骤II
A	DNA解旋酶、限制酶	DNA连接酶
B	DNA连接酶、限制酶	耐热DNA聚合酶
C	耐热DNA聚合酶、限制酶	DNA连接酶
D	耐热DNA聚合酶、DNA连接酶	限制酶

(6)引入突变的dnaQ基因影响的是下图所示的过程____。（编号选填）

(7)以下对步骤IV中大肠杆菌定向进化过程的分析，正确的是____。（多选）
A甲醇代谢相关基因发生定向突变
B 甲醇代谢相关基因发生随机突变
C使大肠杆菌更容易在通用培养基中生长
D使大肠杆菌更容易在以甲醇为唯一碳源的培养基中生长
(8)为尽快获得甲醇利用效率更高的菌株，在配制步骤IV所需培养基时，配方中除甲醇外至少还应该有____。（编号选填）
①葡萄糖②NH₄Cl③Amp④琼脂⑤水
(9)下列实验方法①~⑧中，可用于分离纯化能高效利用甲醇菌株的是____，可用于测定甲醇代谢有关酶活性的是____，可用于追踪大肠杆菌细胞中甲醇代谢情况的是____。（编号选填）
①分光光度法②差速离心法③显微注射法④显微镜计数法
⑤平板划线法⑥凝胶电泳法⑦稀释涂布法⑧同位素标记法
(10)图2改造大肠杆菌时涉及的生物工程有____。（多选）
A发酵工程       B 细胞工程       C基因工程       D 蛋白质工程