1 . 科学家利用PCR技术扩增人乳头瘤病毒HPV-16L1蛋白基因，构建了含HPV-16L蛋白基因的表达载体pBI-L1，经根瘤农杆菌介导转化，获得了转基因烟草植株。该技术利用转基因烟草作为生物反应器，生产出了纯度较高的HPV-16L1蛋白。下列说法错误的是（       ）

A．构建表达载体pBI-L1时至少需要两种限制酶以防止目的基因与质粒反向连接

B．采用根瘤农杆菌介导转化时可对烟草组织进行切割，以便于农杆菌入侵植物组织

C．为促进转基因烟草丛状苗基部细胞分裂形成愈伤组织可向培养基中适当添加赤霉素

D．可以用抗原-抗体杂交法检测再生植株是否表达出相应的HPV-16LI蛋白

3 . 骆驼蓬主要分布在干旱和半干旱地区，能防风固沙。骆驼蓬合成的多种生物碱具有抗肿瘤作用。科研人员利用骆驼蓬下胚轴进行育苗和生物碱提取，过程如下图。下列说法正确的是（　　）

A．下胚轴切段需用酒精和次氯酸钠进行灭菌处理

B．过程①和过程②分别发生了细胞的脱分化和再分化

C．由无毒下胚轴经组织培养获得的骆驼蓬无毒幼苗可抵抗病毒的侵染

D．由工厂化细胞培养提取生物碱可减少对自然资源的破坏

4 . 束顶病毒是香蕉的严重病害之一，常用感病植株的茎尖作外植体以获得脱毒苗。科研人员进行相关实验的结果如下表所示，叙述错误的是（       ）

茎尖预处理	茎尖数量	成活茎尖数	成活率（%	脱毒茎尖数	脱毒率（%）
未低温保存	32	30	93．75	8	26．67
超低温保存	60	33	55．00	20	60．61

A．获得脱毒苗利用植物细胞具有全能性的原理

B．培养基中常添加生长素、细胞分裂素等激素

C．结果显示超低温保存茎尖可以提高脱毒率

D．用光学显微镜观察病毒颗粒检测茎尖脱毒率

8 . 虾青素可由β-胡萝卜素在β-胡萝卜素酮化酶（BKT）和β-胡萝卜素羟化酶（CRTR-B）的作用下转化而来，具有抗衰老、增强免疫、保护心血管等功能，杜氏盐藻是单细胞浮游植物，生长快，易培养，能大量合成β-胡萝卜素，科研人员将BKT基因和CRTR-B 基因导入杜氏盐藻，构建杜氏盐藻细胞工厂高效生产虾青素。

(1)获取目的基因：雨生红球藻是天然虾青素重要来源，提取雨生红球藻的总 DNA为_____， 设计特异性引物扩增 BKT基因和CRTR-B 基因，此过程需要_____酶的催化。
(2)构建转化载体：“无缝克隆法”是构建重组质粒的新方法，指利用同源重组酶将末端具有 一致同源序列的线性化载体和目的基因连接形成重组质粒，图1表示利用“无缝克隆法”向质粒中插入抗除草剂基因的基本过程。
I．PCR获取抗除草剂基因过程中，为确保基因两端具有所需同源序列，需在引物的_____端添加对应的同源序列 。若要确保抗除草剂基因能够从重组质粒中切除，还 需要在基因两侧加入限制酶识别序列，则所需引物（5^，一3^，）的序列应为：_____。
A．同源序列十特异性扩增引物序列十限制酶识别序列
B．同源序列十限制酶识别序列十特异性扩增引物序列
C．特异性扩增引物序列十限制酶识别序列十同源序列
Ⅱ．科研人员利用“无缝克隆法" 同时将 BKT基因和CRTR-B 基因插入质粒，形成的重 组质粒对应部位如图2所示，推测此过程扩增 BKT基因所用的引物为_____； 扩 增CRTR-B基因所用的引物为_____；
Ⅲ．最终形成的重组质粒如图3所示，其中atpA启动子和 psbA启动子均为杜氏盐藻叶 绿体启动子，选用内源性启动子的目的是_____；
Ⅳ．与传统的酶切法构建重组质粒相比，“无缝克隆法"具备的优势有_____。
(3)准备受体细胞：选取初始杜氏盐藻涂布到杜氏盐藻固体培养基进行培养，一段时间后，挑取生长状态良好的单藻落到杜氏盐藻液体培养基中继续培养，期间可取藻液滴入_____，在显微镜下进行计数，两次培养的目的分别为_____、_____。
(4)目的基因导入及相关检测：采用基因枪法将重组质粒导入杜氏盐藻叶绿体，一段时间后，用含 _____的培养基筛选已转化的杜氏盐藻，通过相关技术检测是否成功表达_____。
(5)叶绿体转化是植物基因工程的新热点，叶绿体的诸多特点为叶绿体转化提供优势，如叶 绿体基因组小，功能清晰，使基因操作方便；叶绿体细胞具有自我复制功能，一个植物细 胞可含有多个叶绿体，每个叶绿体中含有多个基因组，可大大提高_____；另外，叶绿体基因位于细胞质中，可有效避免_____。

9 . 兰花人工种子由人工种皮、原球茎和人工胚乳构成。原球茎是由胚性细胞组成、形态类似球茎的结构，可发育成完整植株。人工胚乳可调控原球茎的休眠，并为原球茎的发育提供营养成分和激素。回答下列问题：
(1)从盆栽兰花获取茎尖，对其进行______处理后接种于培养基，茎尖通过______后生长为原球茎。原球茎在发芽培养基上可很快长出幼叶，然后在______培养基中形成完整植株。
(2)将原球茎切成小块，转入增殖培养基进行______培养，可以得到大量原球茎，实现兰花的快速繁殖。在增殖培养基中添加椰子水，原球茎会长得更饱满。不同成熟度椰子的椰子水对原球茎生长的促进效果不同，推测原因是______。
(3)在人工胚乳中添加椰子水，可延长人工种子的保存时间。为了得到理想的人工胚乳，需通过实验对人工胚乳中的 MS 培养基浓度和______进行调整。下列各项中，属于该实验无关变量的是哪几项？______（A．人工胚乳中的 MS培养基浓度   B．人工种子中的原球茎大小C．人工种子保存时间   D．人工种子保存温度和湿度）。
(4)某实验研究发现，与添加用过滤除菌法处理的椰子水（A 组）相比，人工胚乳中添加用高压蒸汽灭菌法处理的椰子水（B 组）使原球茎的休眠时间变短。研究人员推测B 组原球茎休眠时间短的原因是脱落酸被破坏。作出上述推测的依据是：椰子水中有脱落酸；______； 脱落酸不耐高温。为了验证上述推测，可增加一组实验（C 组），C组的处理是：______。

10 . 豆科牧草二倍体沙打旺（2n=16）具有耐旱、耐贫瘠、抗风沙的特点，同源四倍体紫花苜蓿（4n=32）固氮能力较强，科研人员利用体细胞杂交技术获得兼具两者优点的杂种植株，实验流程如下，请回答：

(1)通过植物体细胞杂交技术可以克服______，获得兼具两者优良性状的豆科牧草，这种牧草属于______倍体。
(2)过程I用______处理获得原生质体。已知红色荧光染料能使得植物细胞质呈现红色，绿色荧光染料能使得细胞核呈现绿色，在鉴定杂种原生质体时可用显微镜观察，当观察到______现象时，可判断该原生质体是由沙打旺和紫花苜蓿融合而成的。
(3)过程IV脱分化形成的愈伤组织的特点为______，过程V中的培养基中常添加的植物激素有______。
(4)待幼苗长出较为发达的根系后进行移栽炼苗，炼苗的目的是______。
(5)科研人员研究了不同浓度的聚乙二醇（PEG）对沙打旺和紫花苜蓿原生质体融合率的影响，实验结果如下图，异源融合率是指不同种的原生质体发生融合的概率，已知PEG浓度较高时对细胞具有毒害作用：


①诱导原生质体融合的方法除了使用聚乙二醇外还有______。
②实验结果表明诱导苜蓿与沙打旺原生质体融合的最佳PEG浓度为______，理由是______。