25. 人胰岛素基因表达的最初产物是一条肽链构成的胰岛素原,切除部分肽段(C肽段)后形成成熟的胰岛素,如图1所示。科学家据此提出了利用基因工程改造的大肠杆菌生产人胰岛素的两种方法:AB法是根据胰岛素A、B两条肽链的氨基酸序列人工合成两种DNA片段,利用工程菌分别合成两条肽链后将其混合自然形成胰岛素;BCA法是利用胰岛B细胞中的mRNA得到胰岛素基因,表达出胰岛素原后再用特定酶切掉C肽段。这两种方法使用同一种质粒作为载体。利用基因工程生产人胰岛素的关键步骤是目的基因的获取和表达载体的构建。
(1)由于密码子具有
___________性,AB法中人工合成的两种DNA片段均有多种可能的序列。获取的目的基因中不含人胰岛素基因启动子的方法是
___________(填“AB”或“BCA”或“AB和BCA”)法。
(2)图2是利用基因工程生产人胰岛素过程中使用的质粒及目的基因的部分结构。为使目的基因与载体正确连接,在设计PCR引物时可添加限制酶
___________的识别序列。通过添加保护碱基序列可以延长限制酶识别序列一端的碱基数,从而提高限制酶识别及切割的效率,保护碱基序列应添加在限制酶识别序列的
___________(填“3'”或“5'”)端。根据上述信息,从以下序列中选择出适合的上游引物(GGG是保护碱基序列):
___________。
a:5'-GTAGTCGAACAATTGGGG-3'
e:5'-CTCGAGGGGATGCCAATC-3'
b:5'-CAATTGGGGGTAGTCGAA-3'
f:5'-GGGCAATTGGTAGTCGAA-3'
c:5'-GGGCTCGAGATGCCAATC-3'
g:5'-ATGCCAATCGGGCTCGAG-3'
d:5'-ATGCCAATCCTCGAGGGG-3'
h:5'-GTAGTCGAAGGGCAATTG-3
(3)β-半乳糖苷酶可以分解无色的XgaⅠ产生蓝色物质。筛选导入重组质粒的大肠杆菌时,在添加了氨苄青霉素和X-gaⅠ的培养基上应选择白色的菌落,原因是
____________。
(4)经测算BCA法的成本显著低于AB法,根据这两种方法的差异分析可能的原因是
____________。(答1点即可)