11. 科学家将tetX基因(四环素降解酶基因)和pET28a质粒结合,导入大肠杆菌,通过发酵可生产四环素降解酶。某DNA分子上tetX基因片段附近和pET28a质粒上的限制酶酶切位点如图1所示,其中BamHI的识别序列为5'G↓GATCC3',NdeI的识别序列是5'CA↓TATG3'。图2表示利用PCR技术从某DNA中获取tetX基因的一个环节。回答下列问题:
(1)基因转录时,3'端在启动子端的单链充当模板,为保证tetX基因能用β链充当转录模板,设计引物时最好在图2所示引物I的5端方框位置添加3'
___________5'序列,经PCR扩增后,获得足量目的基因片段,再用
___________酶切割质粒和tetX基因两端,从而构建重组质粒。
(2)某同学用PCR仪扩增tetX基因时,加入(2
n-1)对引物,引物I(3'CGCGAA…AATGC5')和引物Ⅱ(5'CACTC…GCGCTT3')各半,其他条件符合要求,发现最终产物中tetX基因数量远少于2
n个,试从所用引物I和引物Ⅱ序列的角度,分析原因
___________,这种情况的存在,也是PCR产物需要利用
___________进行鉴定的原因之一。
(3)tetX基因随上述重组质粒进入大肠杆菌中稳定存在并表达的过程称为
____________。充当受体菌的大肠杆菌应
____________(“抗”或“不抗”)卡那霉素,在含卡那霉素的培养基上能形成菌落的受体菌中未必含tetX基因,原因是
__________。