21. 赤霉素与其受体 GID 结合后,可以促进植物茎秆伸长。蓝光能够激活蓝光受体 CRY,抑制赤霉素的作用,为探究该机理,研究者分别构建了含有 His-CRY 和 GST-GID 融合基因的表达载体,表达出相应的融合蛋白。His 和 GST 均为短肽,它们与其他蛋白形成的融合蛋白能与 His 或 GST 抗体结合,且不影响其他蛋白的结构和功能。
(1)构建含上述融合基因的表达载体。
①结合图 1 分析,欲使 His 短肽连在 CRY 的氨基酸序列前端(氨基端),则应在
_____(填“F 引物”或“R 引物”)的
______(填“5'”或“3'”)端加上 His 短肽的编码序列。
②为使融合基因能与载体相连接,还需在 F 引物和 R 引物上添加相应的酶切位点序列,该序列应该位于 His 短肽编码序列的
______(填“5'”或“3'”)端。
③用同样的方法扩增 GST-GID 融合基因,并构建相关表达载体。
(2)将两个表达载体同时导入拟南芥细胞,一段时间后裂解细胞,将含有 His 抗体的磁珠加入裂解液中,充分孵育后收集磁珠,将磁珠上的蛋白(磁珠蛋白)分离下来,进行抗原-抗体杂交,结果如图 2。
①由图可知 His-CRY 和 GST-GID 融合基因的表达情况是
________。对磁珠蛋白进行 His 抗体检测的目的是
________。
②图示结果说明,蓝光的作用机理是
_______。