【推荐1】肠道菌群对于人体健康的维持和疾病发生起重要的作用。人体肠道有大量的微生物，科研人员利用微生物培养技术从健康人体的粪便中分离、提取出多种微生物，经过鉴定、研究、筛选出的特定菌落正广泛应用于医药卫生、基因工程等方面的研究。
(1)大肠杆菌是生活在人肠道中的细菌，其代谢产物能与染料伊红美蓝反应，使菌落呈黑色。下面是其培养基配方：

成分	蛋白胨	乳糖	磷酸二氢钾	蒸馏水	2%的伊红水溶液	0.5%的美蓝水溶液	琼脂
含量	10g	10g	2g	1000mL	20mL	13mL	20～30g

①该培养基按功能划分，属于___培养基，若要培养乳酸杆菌，除了表中所示的碳源、氮源、水、无机盐等几类营养物质，还需要加入___，才能确保乳酸杆菌正常生长。②将某志愿者粪便经过处理后制成肠道菌群悬液，按照下图所示过程稀释涂布了5个上述培养基，每个培养基上涂布0.1mL稀释液，5个培养基上黑色菌落数分别为8、62、75、88、95，则该志愿者肠道内的大肠杆菌密度为___个/mL（假设肠道内只有大肠杆菌的代谢物能与伊红美蓝产生黑色反应）。运用这种方法统计的结果往往较实际值___，可能原因是___。

(2)人体肠道微生物限制病原体在肠道定植的能力称为定植抵抗力。科研人员对于定植抵抗力开展了相关研究：
①将10种非致病肠道微生物（B1－B10）在适宜条件下进行体外培养。加入致病微生物A1共培养2天，实验结果如下图，结果表明___。

②结合本研究及所学知识，阐述滥用抗菌药可能带来的风险___。

【推荐2】微生物连续培养时，容器中一部分旧的培养基会以一定的速度流出，同时不断有等量的新鲜培养基流入以保证微生物对营养物质的需要。研究人员将大肠杆菌JA122菌株接种到葡萄糖含量受到限制的培养基中，连续培养多代，然后取样分析其中存在的新菌株。
（1）按物理状态分，用于连续培养JA122大肠杆菌的培养基属于_____________。此种培养基通常主要用于__________。
A．细菌的分离和纯化               B．观察细菌的运动
C．细菌的鉴定和计数               D．大量繁殖细菌
（2）由于JA122大肠杆菌发生基因突变，样品中共发现CV101、CV103、CV116三种新菌株，产生三种不同类型的新菌株说明________________。这三种新菌株能在培养基中存活而不被淘汰掉是由于_______________的结果。
现将CV101和CV103两种菌种同时接种到葡萄糖含量有限的培养基中，实时检测两者细胞数量变化趋势和培养基中的有机物含量，结果如图。

（3）实验现象分析：能充分利用葡萄糖生存的菌种是______________。CV101菌种细胞数量在OA段有所下降，在A点之后才开始上升，说明______________________。
进一步研究表明，CV101可以在过滤的培养过CV103的培养基中生长，但CV103不能在过滤的培养过CV101的培养基中生长。为验证以上事实，进行以下实验：
（4）配制培养基，选用的碳源是____________。将CV101和CV103菌株分别接种到新配制的培养基中培养一段时间，并观察记录菌株的生长情况。
（5）预期实验结果：____________________________________________________________。

【推荐3】 随着能源和环境问题日益严峻，利用纤维素酶降解秸秆生产燃料乙醇，对缓解全球能源危机有着重大意义。科研人员开展筛选、诱变及选育高产纤维素酶菌株的相关研究，过程如下图。
   
(1)从物理状态来看CMC平板属于___________培养基。富集培养后的菌种常采用___________法接种于CMC平板，培养一段时间后，可根据___________初步鉴定并挑取产纤维素酶菌株XZ-33。
(2)诱变选育高产纤维素酶的菌株时，通过向培养基中加入_________ 筛选出___________与菌落直径比大的菌落。
(3)如图是筛选获得菌株UV-Co16过程中⁶⁰Co-γ辐照剂量与致死率和正突变率（符合生产需要的突变菌数占诱变后活菌数的比例）的关系。实验结果表明，用⁶⁰Co-γ射线诱变处理时合适的辐照剂量为___________。
   

【推荐1】（一）酱油的酿造主要是利用微生物的酶系的作用，对原料中的蛋白质等物质进行降解，生成特有色、香、味的过程。米曲霉是用于酱油酿造的主要菌种之一，请回答下列选育高产蛋白酶的米曲霉菌株的相关问题。
(1)制作米曲霉孢子悬浮液：选取生长良好的斜面菌种，用___________洗下斜面上的孢子，倒入含有玻璃珠的无菌三角瓶中，经___________处理分散孢子，制成孢子悬浮液。
(2)筛选目标菌种：用___________取适量孢子悬浮液，用玻璃刮刀涂布在含有___________的平板上，倒置培养一段时间。观察菌落形态特征，测量___________和透明圈直径大小，并进行计算。
(3)为选育更优良的米曲霉菌，进行诱变育种：取米曲霉菌液置于培养皿中，用紫外灯照射并搅拌，其目的是___________
(4)筛选出的优良菌株的遗传稳定性非常重要，可通过观察菌株在___________过程中酶活性是否迅速降低，判断其是否容易退化。
（二）EP是促红细胞生成素的英文简称，是一种激素样物质，可促进体内新红细胞生成。人类已可通过基因工程合成EPO基因，并采用中国仓鼠卵巢（CHO）细胞表达系统来获取产物，其过程如下。请回答下列问题：

(5)从人体组织中提取EPO的___________，通过逆转录得到DNA，再通过PCR技术获得大量EPO基因。
(6)①过程中，EP0基因两端与载体上具有相同的___________，以便被同种限制酶切割后构建基因表达载体，该载体内部需包含___________，以驱动基因的转录。
(7)采用___________技术，将重组表达载体导入小鼠受精卵中，将受精卵移入发育培养液中继续培养。
(8)当胚胎发育至囊胚时期，需进行胚胎移植，原因是___________。为获得更多转基因胚胎，在胚胎分割时需将___________均等切割，否则会影响分割后胚胎的恢复和进一步发育。此外，移植前需对已成功转入目的基因的胚胎进行___________。
(9)若想检验转基因仓鼠是否成功表达EP0，可以采用___________技术对血液来进行检测。

【推荐2】土壤中存在产PG酶（蛋白质谷氨酰胺酶，能催化蛋白质发生脱酰胺反应，增大蛋白质的溶解性）的金黄杆菌。研究人员设计了利用基因工程高效生产PG酶的方案，流程如下图1所示，相关限制性内切核酸酶的识别和切割位点如下图2所示。回答下列问题：   

(1)在实验室分离出产PG酶的金黄杆菌的原理是人为提供有利于______的生长条件，同时______其他微生物的生长。
(2)过程①应用了PCR技术，PCR技术需要设计引物，引物是指______。PCR技术发生碱基互补配对的步骤是______。
(3)完成过程②需要先将PG酶基因与pPIC9K质粒重组，这个过程称为______。据图分析，简要写出该过程的操作程序：______。
(4)该重组DNA技术的受体细胞是______，获得的受体细胞将用于发酵工程，发酵工程的中心环节是______。

【推荐3】研究人员拟从土壤样品中分离该类酵母菌，并进行大量培养。如图所示为操作流程：

(1)配制培养基时，按照培养基配方准确称量各组分，将其溶解、定容后，调节培养基的__________，及时对培养基进行分装，并进行________________灭菌。
(2)过程②梯度稀释时，先分别向A、B、C三支试管中加入9mL__________，再依次加入酵母菌培养液的上清液或稀释液1mL，摇匀。取多个稀释倍数的酵母菌培养液0.1mL分别接种到多个平板上。甲、乙研究员在10⁵稀释倍数下得到的结果:甲涂布4个平板，统计的菌落数分别是150、178、259、310；乙涂布4个平板，统计的菌落数分别是152、165、175、148，则1mL培养液中含有的酵母菌数量最可能为_____个。
(3)挑取分离平板中长出的单菌落，按步骤④所示进行划线。合理的有____（多选）
a．为保证无菌操作，接种针、接种环使用前都必须灭菌
b．划线时应避免划破培养基表面，以免不能形成正常菌落
c．挑取菌落时，应挑取多个菌落，分别测定酵母菌细胞中甲醇的含量
d．可以通过逐步提高培养基中甲醇的浓度，获得甲醇高耐受株
(4)步骤⑤中，为使酵母菌数量迅速增加，培养过程中需保证充足的营养和________供应。为监测酵母菌的活细胞密度，经等体积台盼蓝染液染色，理论上应统计______色细胞的个数。
(5)分离获得的酵母菌还需经过多级筛选才能获取到理想菌株。科研人员利用DY5、RY1、JW14三种菌株，发酵制作杨梅酒，并进行酒精耐受性检测，结果如下表和图:

菌株名称	酒精度/%	总糖/g•L-1	总酸/g•L-1
DY5	7.0	34.23	12.045
RY1	9.0	15.01	12.675
JW14	6.5	33.64	12.099
杨梅汁	—	78.80	10.737

三种菌株中，最适于杨梅果酒发酵的是__________。

【推荐1】请回答下列与酶和物质提取有关的问题：
（1)某植物富含果胶、淀粉、蛋白质和纤维素成分。在用该材料提取过果胶和淀粉后的剩渣加工饮料工艺研究中，将剩渣制成的汁液经蛋白酶和纤维素酶彻底酶解处理后，发现仍存在浑浊和沉淀问题，为了解决这一问题，可在汁液中加入果胶酶和淀粉酶 。而为了提高果胶酶的使用效率和产品纯度，一般需要将酶用______________________ 法进行固定化处理。
（2）用凝胶色谱法提取分离血红蛋白时，用生理盐水洗涤红细胞，用___________破裂红细胞使血红蛋白得以释放，如果装填的凝胶色谱柱中出现气泡，气泡会__________________，降低分离效果。
（3）某植物的花中含有油性物质A、果肉中含有物质B。物质A是易挥发、难溶于水的无色物质；物质B是易溶于有机溶剂、不溶于水、不易挥发，受潮易分解的有色物质。
①根据题干信息判断，提取物质A不确定能否利用水中蒸馏法，原因是还需要确定水中蒸馏时是否会导致原料焦糊或者____________________。
②物质B可使用______法提取，提取物质B时应选用_____（填“干燥”或“新鲜”）的果肉。
③以上两种提取得到的植物芳香油，可通过_________法进行鉴定。

【推荐2】如图1表示制备固定化酵母细胞的有关操作，图2是利用固定化酵母细胞进行酒精发酵的示意图，图3为某同学制备的凝胶珠图片。回答下列问题：

（1）酵母菌的活化是指 _____________________________。
（2）图1中X溶液为_____，其作用是使______________________。
（3）图1中制备的凝胶珠用_____洗涤后再转移到图2装置中。图2发酵过程中搅拌的目的是使_____。
（4）某同学在图1步骤结束后得到图3所示的实验结果，出现此结果的可能原因有：①_________________ ② __________________③___________________

【推荐3】酵母的蛋白质含量可达自身干重的一半，可作为饲料蛋白的来源。有些酵母可以利用工业废甲醇作为碳源进行培养，这样既可减少污染又可降低生产成本。研究人员拟从土壤样品中分离该类酵母，并进行大量培养。下图所示为操作流裎，请回答下列问题：

（1）步骤②为____________________和涂布平板，涂布平板操作中为增加实验的准确性，每支试管的样液至少涂布____________________个培养皿，该分离纯化的方法和划线分离法相比，其优点是________________________________________。
（2）下列关于④过程的叙述错误的是(                 )
A．需要通入无菌空气 B．必须以甲醇为唯一碳源
C．需用液体培养基       D．该装置可用于大肠杆菌的扩大培养
（3）在使用该类酵母分解工业废甲醇时，可将酵母细胞通过____________________法进行固定化处理并制成反应柱操作时可通过控制工业废甲醇过柱的流速来调节____________________。若反应柱流出液中有甲醇，其原因可能是_________________________________________，_______________________（答出两点即可）。

【推荐1】人类有意无意地利用微生物发酵制作果酒或其他食品，已经有几千年的历史。回答下列问题：
(1)在腐乳发酵过程，毛霉等微生物产生的蛋白酶能将豆腐中的蛋白质水解成______。通过发酵，豆腐中营养物种类______。（答“增多”或“减少”），且更易于被人体消化和吸收。随着发酵时间的延长，上述反应更加充分，最终在多种微生物的协同作用下，普通的豆腐转变成风味独特的腐乳。
(2)做酸菜鱼的“酸汤”是通过天然发酵而成的，酸汤发酵初期，亚硝酸盐的含量逐渐增加，影响亚硝酸盐含量的主要因素有______（答出两点）。
(3)从开始制作到泡菜质量最佳这段时间内，泡菜液逐渐变酸，这段时间内泡菜坛中乳酸菌和其他杂菌的消长规律是______，原因是：______。
(4)马奶中含有的糖类主要为乳糖。某些微生物可将乳糖水解为葡萄糖和半乳糖，酵母菌可利用这些单糖发酵产生酒精，从而制成马奶酒。科研人员研究野生型酵母菌和马奶酒酵母菌的发酵情况，结果分别如下图所示。


①分析图中曲线，与野生型酵母菌相比，马奶酒酵母菌在利用葡萄糖、半乳糖或产生酒精等方面的不同点为______（答出两点）。马奶酒酵母菌这种不同于野生型酵母菌的营养利用方式，使其能更好地适应富含乳糖的生活环境。
②果酒制作过程中，应该将温度控制在______；温度适宜时果酒发酵时间较短，原因是______。

【推荐2】葡萄酒是葡萄汁经酵母菌发酵而成的。酿制葡萄酒的两个简易装置如图所示。回答下列问题：

                                                    

(1)试管中的X溶液有助于维持甲装置的瓶中气压相对稳定，与乙装置相比，用甲装置酿制葡萄酒的优点是____。
(2)酿葡萄酒时，酿酒酵母的最适生长温度是____。葡萄汁装瓶时要留有约1/3的空间，这种做法的目的是____。
(3)某同学若用乙装置进行发酵，并设置两个不同处理组（乙A和乙B），乙A装置中保留一定量的氧气，乙B装置中没有氧气。在其他条件相同且适宜的情况下，测得一段时间内乙A和乙B中酒精含量的变化趋势及乙A中氧气含量的变化趋势依次是曲线图____所示。
(4)酵母细胞密度比水大，但在化学反应中它会上升到混合物的顶部，原因是____。是否有酒精产生，可用硫酸酸化的____试剂检验。

【推荐3】独流老醋是有300多年历史传承的传统名醋，酿造过程经蒸煮、酒精发酵、醋酸发酵、陈酿、淋醋等14道工序，使得老醋具有独特风味。
(1)酒精发酵阶段起主要作用的微生物是____________，醋酸发酵阶段中促使酒精转化为醋酸的反应方程式是________________________。
(2)醋酸发酵阶段，独流老醋采用独特的分层发酵法发酵30天。过程如下：

发酵过程中，翻动的目的是____________。已知乳酸含量高是独流老醋风味独特的重要成因，由此推测分层发酵的作用是________________________。
(3)甲同学为检测发酵过程中某时刻醋酸菌的数量，取不同稀释度的醋醅样品各0.1mL涂布到酵母膏培养基（适合各种菌类生存）上，在适宜条件下培养一段时间，统计得到10³、10⁴、10⁵三个稀释度的培养基上的平均菌落数依次为417个、125个、16个，对照组培养基上未出现菌落。据此估算，每克样品中的醋酸菌数约为____________个。乙同学认为上述实验设计存在缺陷，实验结果不可信，原因是____________。