研究发现，TRIM59基因在肝癌细胞中存在异常表达，可用于原发性肝癌的早期诊断。TRIM59蛋白含有R、B、C和TM四个功能区，如图1所示；科研人员采用一定的技术手段，获得了TRIM59基因的cDNA，分别构建TRIM59基因过表达及TRIM59基因敲除质粒，分别转染肝癌细胞株后，过表达及敲减细胞株的增殖情况如图2所示。

图1   TRIM59蛋白质功能区                 图2   TRIM59对肝癌细胞增殖能力的影响

(1)图2的实验结果表明____。
(2)科研人员通过PCR扩增了图1中4种不同长度的蛋白质功能区组合片段所对应的TRIM59基因片段，并插入下图3所示的带FLAG标签序列（27bp）的载体中，与FLAG标签序列形成融合基因。FLAG是一种短肽，使融合蛋白能与含有FLAG抗体的介质结合，但不影响TRIM59蛋白功能区的功能。

图3

PCR扩增4种不同长度TRIM59基因片段需要的引物有____种；为了使目的基因正确插入，除∆R对应的TRIM59基因片段以外，在目的基因上游引物的5'端应插入____（“BamHI”或“EcoRI”）的识别序列，理由是____；可利用PCR技术验证融合基因是否构建成功，其实验思路是____。
(3)体外实验发现TRIM59蛋白和PPM1B蛋白有结合现象。为了研究两蛋白在细胞内是否结合，科研人员分别将FLAG-TRIM59（FL）质粒、FLAG-TRIM59（R+B）质粒、FLAG-TRIM59（R）质粒、FLAG-TRIM59（∆R）质粒与带有GFP标签的GFP-PPM1B质粒共同转染受体细胞，以单独转染GFP-PPM1B质粒的受体细胞作为对照。分别利用FLAG抗体和GFP抗体对①至⑤实验细胞裂解液中的蛋白质进行检测，结果如图4中胶片一、二所示。再利用GFP抗体对上述FLAG抗体免疫沉淀中的蛋白质进行检测，结果如胶片三所示。

图4

图中实验结果说明____。
(4)研究发现TRIM59蛋白的R功能区具有泛素化连接酶的活性，可介导泛素化途径降解PPM1B蛋白，PPM1B能够使某种蛋白去磷酸化进而抑制癌细胞的增殖和转移，据此可推测肝癌患者中TRIM59蛋白和PPM1B蛋白的量呈____相关。