【推荐1】孔雀石绿（简称MG）是广泛使用的有机染料，在自然环境中极难降解，容易引起土壤污染，进而危害人体健康。因此从土壤中分离和筛选出高效的MG降解菌有非常重要的意义。已知MG在水中溶解度低，含过量MG的固体培养基不透明。

(1)培养基的配制：MG降解菌富集培养基需含有NaH₂PO₄、KH₂PO₄、NaCl、NH₄Cl、CaCl₂、MgSO₄、水等，再加___________作为唯一碳源，该培养基为选择培养基，选择培养基配制时应__________。利用液体培养基进行培养，MG高效降解菌株增殖速度比在固体培养基中快，原因是____。培养基配制好后，需要用___________法进行灭菌处理。
(2)MG高效降解菌株的分离和纯化：图中所示的分离纯化细菌的方法是_______。某同学取三个平板，在每个平板上涂布0．2mL最终稀释后的菌液，三个平板上长出的菌落数分别为186、192、180个，初步估测A中细菌细胞数为9.3×10⁸个/mL，分析该同学将A中的菌液稀释了_______倍。
(3)MG高效降解菌株的鉴定：将纯化获得的菌种接种于含过量MG的固体培养基（其他营养成分等适宜）上，根据培养基是否出现___________，就可以鉴别出目的菌株，原因是________。

【推荐2】酱油制作在我国具有悠久的历史，其中“海盐沈荡酱油酿造技艺”被列入嘉兴市非物质文化遗产名录。制作酱油的菌种主要有米曲霉、酵母菌、乳酸菌，基本流程如图。

回答下列问题：
(1)米曲霉发酵过程中，加入的黄豆和面粉可以为米曲霉提供营养物质，黄豆中为米曲霉生长提供氮源的主要物质是_____________。从培养基的成分看，属于_____________培养基。米曲霉的代谢类型是_____________。
(2)抑制杂菌污染是保证酱油质量的重要因素。在“晒制发酵”过程中，_____________（至少答出2种）等物质可以抑制杂菌生长。
(3)菌种是影响酱油风味的关键因素，米曲霉能分泌蛋白酶、淀粉酶等多种酶类，产生风味独特的成分。若平板培养基以淀粉为唯一碳源，接种菌液并培养，平板上长出菌落后加入显色剂，则可筛选出产淀粉酶的微生物。加入的显色剂是_____________，该方法能筛选出产淀粉酶微生物的原理是_____________。根据_____________的大小，可粗略估计出菌株是否产淀粉酶及其产酶能力。若要保存优质菌种，可挑取单菌落，使用_____________法接种到斜面培养基上。

【推荐3】资料1：据史料记载，早在公元5世纪魏代古籍中，就有腐乳生产工艺的记载，到了明代我国就大量加工腐乳，而今腐乳已成长为具现代化工艺的发酵食品。清代医学家赵学敏编著的《本草纲目拾遗》中记述：“豆腐又名菽乳，以豆腐腌过酒糟或酱制者，味咸甘心。”
资料2：手机现在已经成为人们离不开的通讯和娱乐工具，据传言手机屏幕上的细菌比马桶按钮上的还要多。某生物兴趣小组为了验证这一传言是否正确，进行如图所示实验并展示调查的结果。

请回答下列问题
据资料1：
（1）腐乳制作中有多种微生物参与发酵，其中主要是___________，其生长的适宜温度为___________℃。
（2）“味咸”是因为加了盐，加盐的目的除了调味以外，还有___________和___________的作用；酒的含量一般控制在12%左右，目的是可以抑制微生物的生长，同时使腐乳___________。
（3）“甘心”是指在多种微生物的协同作用下，普通豆腐转变成风味独特的腐乳，其原因是毛霉等微生物产生的___________将豆腐中的蛋白质分解成___________，将脂肪水解为脂肪酸和甘油。
据资料2：
（4）该实验需制备培养基，培养基的营养成分一般包括水、碳源、___________等。据图，两实验组均采用___________法接种，在稀释度足够高的菌液里，聚集在一起的微生物将被分散成单个细胞，从而能在培养基表面形成单个的___________，该方法测定的活菌数比实际值偏___________，原因是___________。
（5）在接种前需要检测培养基是否被污染，对于固体培养基常采用的检测方法是，将未接种的培养基在适宜温度下放置适宜的时间，___________，则培养基未被污染；反之，则培养基被污染。

【推荐1】苯乙醇是一种具玫瑰气味的芳香醇作为香料广泛用于食品、化妆品等领域。酵母菌在酒精发酵过程中以苯丙氨酸为唯一氮源时能高效合成苯乙醇。请回答下列问题：
（1）为纯化酒精发酵液中的多种酵母菌应该用____________灭菌后的____________（填“固体”或“液体”）培养基进行接种。
（2）为筛选具有高效合成苯乙醇的酵母菌，在配制培养基时，应选择____________（填“苯丙氨酸”或“苯丙氨酸+NH₄NO₃”或“苯丙氨酸+蛋白胨”）作为氮源，不选择其他两组的原因是____________。
（3）为研究苯丙氨酸浓度对合成苯乙醇的影响，进行了相关实验，实验结果如下：
（注：苯乙醇产率是指苯乙醇的物质量浓度与苯丙氨酸的物质量浓度的百分比）

①该实验应控制在____________（填“有氧”或“无氧”）条件下进行。
②根据实验结果推测，利用筛选出的酵母菌生产苯乙醇时，应将苯丙氨酸浓度控制在____________g/L，一是因为在该浓度下____________最高，能充分利用酵母菌的合成能力；二是因为____________。

【推荐2】物质W是一种含氮有机物，会污染土壤。在培养基中达到一定量时培养基表现为不透明。某研究小组欲从土壤中筛选出能降解w的细菌（目标菌）。回答下列问题。
(1)土壤中的某些微生物可以利用空气中的氮气作为氮源。若要设计实验进一步确定甲、乙菌能否利用空气中的氮（作为氮源，请简要写出实验思路，即_________。
(2)用平板培养细菌时一般需要将平板倒置，目的是__________________。
(3)在从土壤中分离月标菌的过程中，发现培养基上甲、乙两种细菌都能生长并形成菌落（如下图所示）。如果要得到目标菌，应该选择_____________菌落进一步纯化，选择的依据是____。

(4)该小组将人工合成的一段 DNA转入大肠杆菌，使大肠杆菌产生能降解W的酶（酶E）。为了比较酶E与天然酶降解W能力的差异，该小组拟进行如下实验，请完善相关内容。
①在含有一定浓度W的圆体培养基上，A处滴加酶E的缓冲波，B处滴加含有相同浓度天然酶的缓冲液，C处滴加________，三处滴加量相同。
②一段时间后，测量透明圈的直径。若C处没有出现透叨圈，说明__________；若A、B处形成的透明圈直径大小不同，说明_______________________。

【推荐3】植物内生菌是一定阶段或全部阶段生活于健康植物组织和器官内部的真菌或细菌，普遍存在于高等植物中。
资料一：放线菌也是一种常见的内生菌，能抑制病原菌的生长。研究者利用两种不同类型的放线菌获得新型工程菌，过程如图：

(1)收集上述两种菌丝体，加入_________(填“纤维素酶”或“溶菌酶”)处理，分离原生质体，将两种原生质体悬液等量混合，加入适量促融剂处理一段时间。终止反应并洗涤后，取一定量混合液接种于___________ (填“固体”或“液体”)培养基中培养，根据菌落特征，选出性状稳定的融合菌株。
资料二：某真菌的w基因可编码一种可高效降解纤维素的酶，已知图中w基因转录方向是从左往右。为使放线菌产生该酶，以图中质粒为载体，进行转基因操作。

限制酶	BamH I	EcoR I	Mfe I	Kpn I	HindⅢ
识别序列和切割位点( 5-3’ )	G↓GATTC	G↓AATTC	C↓AATTG	GGTAC↓C	A↓AGCTT

(2)根据图表分析，在构建基因表达载体时，应使用限制酶___________切割图中质粒，使用限制酶_________切割图中含w基因的DNA片段，以获得能正确表达w基因的重组质粒。
(3)与质粒中启动子结合的酶是_______________。启动子通常具有物种特异性，在质粒中插入w基因，其上游启动子应选择__________________启动子(选填“真菌”或“放线菌”)。

【推荐1】中国科学家运用合成生物学方法构建了一株嗜盐单胞菌H，以糖蜜（甘蔗榨糖后的废弃液，含较多蔗糖）为原料，在实验室发酵生产PHA等新型高附加值可降解材料，期望提高甘蔗的整体利用价值。工艺流程如图。

回答下列问题：
(1)为提高菌株H对蔗糖的耐受能力和利用效率，可在液体培养基中将蔗糖作为____，并不断提高其浓度，经多次传代培养（指培养一段时间后，将部分培养物转入新配的培养基中继续培养）以获得目标菌株。培养过程中定期取样并用____法进行菌落计数，评估菌株增殖状况。
(2)基于菌株H嗜盐、酸碱耐受能力强等特性，研究人员设计了一种不需要灭菌的发酵系统，其培养基盐浓度设为60 g/L，pH为10，菌株H可正常持续发酵60 d以上。该系统不需要灭菌的原因是____（答出两点即可）。
(3)研究人员在工厂进行扩大培养，在适宜的营养物浓度、温度、pH条件下发酵，结果发现发酵液中菌株H细胞增殖和PHA产量均未达到预期，并产生了少量乙醇等物质，说明发酵条件中____可能是高密度培养的限制因素。
(4)菌株H还能通过分解餐厨垃圾（主要含蛋白质、淀粉、油脂等）来生产PHA，说明其能分泌____。

【推荐2】为了研究手机屏幕上的细菌数量和种类，有人做了下图所示的实验。回答下列问题：

(1)该实验需制备固体培养基，制备固体培养基的操作顺序是：计算一称量一____一____   一倒平板。为了防止培养基被杂菌污染，倒平板时应该注意： ___（写出两点）。
(2)该实验在平板培养基上的接种方法是 ___法。培养一段时间后，通过观察菌落的____等特征（写出两点），可知手机上存在多种微生物。
(3)若按图中方法取样，测定某手机屏幕上的细菌数量，从10 mL菌悬液中取出1 mL，稀释100倍，在3个平板上分别接入0.1 mL稀释液，经适当培养后，3个平板上的菌落数分别为38、40和42，则该手机屏幕的细菌数为 ___个/cm²。该方法计数的结果往往比实际结果偏 ___（填“高”或“低”），原因是___   。

【推荐3】富集培养是从微生物混合群开始，对特定菌种的数量比例不断增高而引向纯培养的一种方法。多氯联苯是一种对人体有很大危害的有机物，呈油状液体，污染土壤后，很难被清除。研究发现部分酵母菌具有分解多氯联苯的作用，如图表示用富集方法从土壤中分离能分解多氯联苯酵母菌的过程。回答下列问题：

(1)筛选分解多氯联苯的菌株时，应将土壤样品稀释液接种到以_____________为唯一碳源的培养基上进行培养。
(2)①②③步骤的目的是___________________________________。
(3)步骤④采用的接种方法是_____________；步骤④⑤的目的是_____________；若步骤⑤中平板上的菌落过于密集，则应对步骤④中加入的菌液进行_____________；步骤④⑤中，首先要对培养基进行灭菌，常用的培养基灭菌方法是_____________，无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外，还能____________。

【推荐1】沙门氏菌病是指由各种类型沙门氏菌所引起的对人类、家畜以及野生禽兽不同形式病的总称，其病原体沙门氏菌是一种常见的食源性肠道杆菌，组氨酸缺陷型沙门氏菌是由野生菌种突变形成的，自身不能合成组氨酸。将其接种在缺乏组氨酸的平板培养基上进行培养，有极少量菌落形成。2-氨基芴是一种致突变剂，突变后的沙门氏菌能自身合成组氨酸，科学家用组氨酸缺陷型沙门氏菌对2-氨基芴的致突变作用进行了研究。请回答下列问题：
(1)从分类上看，与沙门氏菌同属一类的微生物是__________（填“制作果酒的微生物”或“制作果醋的微生物”），据此推测，感染沙门氏菌常用___________（填“干扰素”或“抗生素”）治疗。
(2)研究人员首先将沾有2-氨基芴的滤纸片放到缺乏组氨酸的平板培养基中，再利用__________法将组氨酸缺陷型沙门氏菌接种并进行培养，随后根据___________计数活菌数量。在接种前，2-氨基芴和滤纸片需进行__________处理。
(3)为了保证单一变量原则，对照组培养基中，应该放置___________。缺乏组氨酸的培养基从功能上看，属于__________培养基。
(4)如果2-氨基芴有很强的致突变作用，则预期在实验组中看到的结果是__________。

【推荐2】流感、新冠等病毒都可以通过飞沫传播，佩戴口罩是预防病原体感染的有效措施。某研究小组对非灭菌的一次性口罩中的微生物进行检测，通过分析微生物的种类和数量来确定口罩的合格性。回答下列问题。
（1）从包装中取样，准确称取10g（近似10mL）样品。剪碎后加入到90ml灭菌生理盐水中，充分混匀，得到生理盐水样液。待上述生理盐水样液自然沉降后取上清液作菌落计数。取4个培养基，进行_______________法灭菌处理，待冷却后利用__________________法接种0.1ml样液，放入恒温培养箱中培养一段时间后，平板上长出的菌落数分别为31、42、356和35，根据《中华人民共和国医药行业标准》对非灭菌一次性口罩的微生物指标要求（如表），该研究小组检测的口罩_________（填是或否）合格。
口罩微生物指标

细菌菌落总数（CFU/g）	大肠杆菌	绿脓杆菌	金黄色葡萄球菌	浓血性链球菌	真菌
≤100	不得检出	不得检出	不得检出	不得检出	不得检出

（2）若要对口罩中的金黄色葡萄球菌进行检测，将样液接种到甘露醇高盐基础琼脂培养基上，将培养基____________放入恒温培养箱中培养。一段时间后，该小组将得到的菌株接种到液体培养基中并混匀，一部分进行静置培养，另一部分进行振荡培养，结果发现：振荡培养的细菌比静止培养的细菌生长速度快，说明金黄色葡萄球菌的代谢类型最可能是__________________。

【推荐3】吃腐烂的水果可能会出现头晕、恶心、呕吐或者更严重的症状，这可能与微生物代谢产生的毒素有关。某研究小组为了寻找腐烂的苹果中可安全食用的区域，开展以下探究实验。选取苹果的腐烂部位、距离腐烂部位1cm和2cm的组织做实验材料，检测不同区域中微生物的种类和数量。已知苹果的pH为3.5~4，操作流程如下图。回答下列问题：

(1)根据题意，本实验选用的接种方法是_____。
(2)制备步骤③中的培养基，配方中应含有水、氮源、无机盐、_____，接种后的平板应放在恒温培养箱中_____培养。
(3)每隔24h统计一次菌落数目，待菌落数目稳定时统计的菌落数往往比活菌的实际数目少的原因是_____。
(4)统计腐烂部位的菌落数目发现，青霉菌、曲霉菌等真菌的数量较多，细菌数目很少。细菌数目很少可能的原因_____（答出1点即可）。
(5)分析数据发现，距离腐烂部位越远，微生物的数量越少；距离腐烂部位2cm的样品中微生物数量极少。有人认为，不能仅凭这个实验就得出距离腐烂部位2cm的部分可安全食用的结论，还需要进一步补充检测_____。