【推荐2】金属硫蛋白（MT）是一类广泛存在的金属结合蛋白，某研究小组计划通过多聚酶链式反应（PCR）扩增获得目的基因，构建转基因工程菌，用于重金属废水的净化处理。PCR扩增过程示意图如下，请回答下列问题：

（1）从高表达MT蛋白的生物组织中提取mRNA，通过___________获得___________用于PCR扩增。
（2）设计一对与MT基因两端序列互补配对的引物（引物1和引物2），为方便构建重组质粒，在引物中需要增加适当的___________位点。设计引物时需要避免引物之间形成___________，而造成引物自连。
（3）图中步骤1代表高温变性，可以使双链___________，步骤2代表退火，步骤3代表延伸，这三个步骤组成一轮循环。
（4）PCR扩增时，退火温度的设定是成败的关键。退火温度过高会破坏___________的碱基配对。退火温度的设定与引物长度、碱基组成有关，长度相同但___________的引物需要设定更高的退火温度。
（5）如果PCR反应得不到任何扩增产物，则可以采取的改进措施有___________（填序号：①升高退火温度②降低退火温度③重新设计引物）。

【推荐3】植物细胞壁中含大量不能被猪消化的多聚糖类物质。研究人员通过现代生物技术培育出转多聚糖酶基因（manA）猪，主要流程如图所示，图中neo为标记基因。请回答下列问题：

(1)为筛选适合的黑曲霉菌菌株，称取了10.0g土壤样品，转入90mL无菌水中制备成菌悬液，经梯度稀释后，获得细胞密度不同的菌悬液。分别取0.1mL菌悬液涂布在固体培养基上，其中100倍稀释的菌悬液培养后平均长出了53个黑曲霉菌菌落，则该样本中，每克土壤约含有黑曲霉菌________个。
(2)图中通过PCR技术扩增manA基因需要用到引物，引物的作用是________________________。
(3)图中获取目的基因采用的限制酶是BamHI和BglⅡ，但是处理后的目的基因并不能避免自身环化，原因是________________________。处理质粒应采用的限制酶是________________。
(4)如果不构建基因表达载体，直接将目的基因导入受体细胞，通常无法得到基因表达产物，其原因是________________。
(5)相关细胞的培养过程中需要一定的气体条件，具体的条件及作用是________。

【推荐1】关于DNA粗提取的实验材料的选择，也经过了多次实验效果的比较，最终选择鸡血做实验材料的原因是什么？请回答下列问题：
⑴鸡血细胞中红细胞________，家鸡属于鸟类，新陈代谢旺盛，因而血液中______细胞数目较多，可以提供丰富的________。
⑵实验前由老师制备血细胞液供同学们做实验材料，而不用鸡全血，主要原因是________。
⑶生活在牧区的人们，采集牛、羊和马血比较方便，若他们按实验要求完成实验步骤后，结果是_______，这是因为这些动物和人一样，成熟的红细胞中____，但若改用动物肝脏做实验材料，实验能顺利进行。这是因为_______。

【推荐2】从自然菌样筛选较理想的生产菌种的一般步骤是：采集菌样→富集培养→纯种分离→性能测定。
（1）不同微生物的生存环境不同，获得理想微生物的第一步是从适合的环境采集菌样，然后再按一定的方法分离、纯化。培养分解纤维素的细菌样应从____________的环境采集。
（2）富集培养指创设仅适合待分离微生物旺盛生长的特定环境条件，同时抑制或阻止其他微生物生长，使其在群落中的数量大大增加，从而分离出所需微生物的培养方法。对纤维素分解菌的富集培养应选择_______________的培养基，此外，在筛选纤维素的分解菌的过程中则是用____________染色法，培养基中出现以纤维素分解菌为中心的_________。
（3）对分离的菌种还要做进一步的鉴定，如在鉴定分解尿素的细菌时，需在培养基中加入________指示剂，若指示剂变________色，说明有目的菌株存在。
（4）从土壤中分离出分解尿素的细菌后，如需计数，在对样品悬液进行梯度稀释时，未经振荡而直接取上层悬液进行梯度稀释，用不同稀释倍数的样液接种到平板上进行培养和计数，统计出的菌落数往往比正确操作统计出的菌落数______（填偏大、偏小或相等）。
（5）DNA的鉴定中，DNA与________试剂混合经水浴加热呈蓝色。

【推荐3】在生物技术实践过程中，往往需要注意某些实验步骤的操作，请将下列实验中的注意事项填写完整：
⑴在腐乳的制作时，用来腌制腐乳的玻璃瓶，洗刷干净后要用_________消毒；在血红蛋白的提取和分离中，若红细胞的洗涤次数过少，将无法除去_________。
⑵在提取植物细胞的DNA时，需要先用洗涤剂溶解________。在花药离体培养中剥离花药时，要彻底去除_________，因为与其相连的花药不利于愈伤组织或胚状体的形成。
⑶在“土壤中分解尿素的细菌的分离与计数”课题中，往往需要稀释土壤溶液，为了避免杂菌污染，此过程每一步都要在_________旁操作。在固定化酵母细胞中加热溶解海藻酸钠时，最好采用_________的方法。胡萝卜素提取的萃取过程应采用_________加热，因为有机溶剂都是易燃物。
⑷为避免外源DNA等因素的污染，PCR实验中使用的微量离心管、枪头、缓冲液和蒸馏水等在使用前必须进行__________。

【推荐1】[生物一选修3:现代生物科技专题]
青蒿素是最有效的抗疟药之一，但野生黄花蒿青蒿素产量低。研究人员利用基因工程技术培育出高产的转基因黄蒿。请回答下列问题：
（1）建立cDNA文库是获取基因的途径之一。与基因组文库相比，cDNA文库中的基因数目_________。
（2）青蒿素合成途径存在两种关键酶——紫穗槐二烯合酶（ADS)和青蒿酸合成酶(CYP71AV1)。研究人员从黄花蒿的cDNA文库中获取了两种关键酶的基因。在对它们进行PCR扩增时，向反应体系中加入的物质中，除了模板不同，___________也肯定不同。
（3）若要使目的基因在受体细胞中表达，需要通过质粒载体而不能直接将目的基因导入受体细胞，原因有______________、____________。检测这些酶基因是否转录采用_______技术。利用蛋白质工程获得活性更高的酶时，需根据所设计蛋白质的结构推测其____________序列，最终确定相对应的脱氧核苷酸序列并经____________获得所需的基因。
（4）有人另辟蹊径，成功培育出能生产青蒿素的转基因酵母菌。利用转基因酵母菌生产青蒿素的优势有_________________。

【推荐2】图1为培育转AFPs基因（抗冻基因）番茄的示意图，外源DNA和质粒上均标出了酶切位点及相关抗性基因，其中Ap为氨苄青霉素抗性基因，Tc为四环素抗性基因。请分析并回答下列问题：

(1)据图分析，若需使用插入灭活法筛选并鉴定重组质粒，应优先选用限制酶____________对目的基因和质粒切割。在形成的重组质粒上，能被RNA聚合酶识别且结合的部位称为____________。
(2)图2中的A链和B链来自于AFPs基因。欲利用PCR技术对AFPs基因扩增4次循环，应选取的引物是____________，需要的引物数量是___________个。在这个过程中，还需要添加___________酶。

(3)为提高导入成功率，常利用____________处理农杆菌，Ti质粒含有的____________可将目的基因整合到番茄细胞的染色体DNA上，采用___________技术将番茄细胞培育成转基因番茄。若要获得抗冻能力更强的抗冻番茄，可以对AFPs基因进行改造，最终得到相应的蛋白质，该过程需用到__________工程。检测转基因番茄是否产生抗冻蛋白，所用的方法是__________。
(4)用插入灭活法筛选出的含重组质粒的农杆菌在含氨苄青霉素培养基和含四环素培养基上的存活情况分别是___________。

【推荐3】因工程可以按照人们的意愿赋予生物新的遗传特性，创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。图甲是基因工程的基本操作流程，图乙是定量PCR技术中的一种常用探针。回答下列问题：

（1）图甲中①过程所需的酶是_________②过程所需的酶是_________
（2）图甲中③过程需要借助PCR技术，该过程在TaqDNA聚合酶的作用下，DNA的合成方向总是从子链的_________向_________延伸。若利用PCR技术扩增目的基因的过程中消耗了126个引物分子，则该过程DNA扩增了_________次。
（3）图中⑤过程是_________要检测目的基因是否成功表达，首先从转基因生物个体中提取蛋白质，用相应的抗体进行________杂交。
（4）图乙的Taq-Man探针是定量PCR技术中的一种常用探针，其5'末端连接荧光基团（R），3'末端连接淬灭剂（Q）。当探针完整时，R发出的荧光信号被Q吸收而不发荧光。在定量PCR扩增时，TaqDNA 聚合酶在子链延伸过程中遇到与模板结合的探针，将探针切断，使R远离Q。随PCR扩增次数的增加，荧光信号_________
（5）若图甲④过程为将目的基因导入植物细胞，最常用的方法是农杆菌转化法，该方法选择Ti质粒作为运载体的原因是________