原核生物和真核生物基因组中大片段DNA的定向整合拥有广阔的应用前景。但目前细菌中的定向整合系统存在诸多不足，如整合效率偏低，缺乏有效的筛选标记物，可整合的片段大小有限等。研究者在原有细菌CRISPR/Cas系统基础上尝试构建了CRISPR RNA－guided定向整合系统，以期改善上述缺陷。
(1)Cas蛋白是一种crRNA引导的内切酶，可催化________（化学键名称）水解，剪切特定双链DNA片段。crRNA是一种短链RNA，它一端可与Cas蛋白结合，另一端通过________原则与目标DNA序列结合。
(2)转座子（Tn）是一段特殊的DNA片段。转座酶A和转座酶B相互结合后可将Tn从原有的DNA链上切下，并将其整合到其他DNA片段上。为了使转座子定向整合到特定位点，将PCR扩增得到的Cas基因和转座酶A基因形成融合基因，并进一步构建下图所示的CRISPR RNA－guided定向整合系统。

为构建图示的CRISPR RNA－guided系统，需要先设计引物，通过PCR特异性扩增中的Cas基因、转座酶基因等。用于扩增Cas基因的引物需满足的条件是________。构建时，应将翻译终止序列设置在 Cas基因和转座酶A基因之后而不是设置在两者之间，目的是________。
(3)研究人员利用一定的方法将获得的CRISPR RNA－guided系统导入大肠杆菌，统计并计算转座子定向整合的效率，结果如下图所示。

①该结果表明，转座子的定向整合效率高低与转座子整合方向密切相关。为保证转座子连接方向与预期相同，构建重组质粒的过程中，对切割转座子和切割载体的限制酶的要求是________。
②该结果还可表明，CRISPR RNA－guided系统能够有效解决筛选标记物缺乏的问题，依据是________。