为扩大可耕地面积,增加粮食产量,沿海滩涂盐碱地的开发利用备受关注。科学家应用耐盐碱基因培育出了耐盐碱水稻新品系,为解决我国粮食问题做出了重要贡献。若测得某耐盐基因(RST1)编码链首端到末端(其中一条链)的序列为5'-ATCTACGCGCTCATCCG ...(省略3n个核苷酸序列)…CGCAGCAATGAGTAGCG-3'。下图1为构建重组质粒的过程示意图, BamHⅠ、BclⅠ、SmaⅠ、Sau3AⅠ为限制酶(四种酶的识别序列详见表)。请回答下列问题:
(1)为获取更多RST1基因,可通过PCR扩增,在反应体系中加入引物的作用是_____ 。某同学设计了如下六种PCR引物,其中可选用的引物是_____ (选填序号)。
① 5'-GACTACTCGCGCATCTA-3' ② 5'-ATCTACGCGCTCATCCG-3'③ 5'-GCGATGAGTAACGACGC-3' ④ 5'-CGCTACTCATTGCTGCG-3'⑤ 5'-TAGATGCGCGAGTAGGC-3' ⑥ 5'-CGCAGCAATGAGTAGCG-3'
(2)若PCR反应未得到任何扩增产物,主要原因有_____ (选填序号)。
①退火温度过高 ②Taq酶失活 ③设计的引物过短 ④变性温度过低 ⑤模板受到污染 ⑥Mg2+浓度过低
(3)为将图中质粒A和RST1基因正确连接构建重组质粒B,设计RST1基因的引物时,在两种引物的5'端分别添加_____ 酶的识别序列,选用_____ 酶切割质粒A,酶切后的载体和目的基因片段通过_____ 酶作用后获得重组质粒。为了筛选出转入了重组质粒的受体细胞,应首先在筛选平板培养基添加_____ ,再将平板上长出的菌落通过影印接种法(盖章)接种到添加_____ 的平板培养基上继续培养观察。
(4)从平板上长出的菌落若提取重组质粒B利用Sau3AI进行酶切,最多可以得到_____ 种大小不同的DNA片段。
(5)图2是对重组质粒测序的部分序列,若目的基因与质粒正确连接(启动子顺时针转录),则图中连接处的序列正确的是( )_____ (填序列编号)。
限制酶 | BamHⅠ | BclⅠ | SmaⅠ | Sau3AⅠ |
识别序列及切割位点(5′→3′) | G↓GATCC | T↓GATCA | CCC↓GGG | ↓GATC |
(1)为获取更多RST1基因,可通过PCR扩增,在反应体系中加入引物的作用是
① 5'-GACTACTCGCGCATCTA-3' ② 5'-ATCTACGCGCTCATCCG-3'③ 5'-GCGATGAGTAACGACGC-3' ④ 5'-CGCTACTCATTGCTGCG-3'⑤ 5'-TAGATGCGCGAGTAGGC-3' ⑥ 5'-CGCAGCAATGAGTAGCG-3'
(2)若PCR反应未得到任何扩增产物,主要原因有
①退火温度过高 ②Taq酶失活 ③设计的引物过短 ④变性温度过低 ⑤模板受到污染 ⑥Mg2+浓度过低
(3)为将图中质粒A和RST1基因正确连接构建重组质粒B,设计RST1基因的引物时,在两种引物的5'端分别添加
(4)从平板上长出的菌落若提取重组质粒B利用Sau3AI进行酶切,最多可以得到
(5)图2是对重组质粒测序的部分序列,若目的基因与质粒正确连接(启动子顺时针转录),则图中连接处的序列正确的是( )
更新时间:2023/08/14 22:02:04
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【推荐1】党的二十大对保障粮食安全提出了更高要求,马铃薯块茎富含淀粉,而且其中的维生素是所有粮食中最全的,因此我国科学家对马铃薯这种重要粮食作物开展了大量研究。
(1)马铃薯因为自交不亲和,所以只能进行无性繁殖,我国科学家用基因编辑技术定点敲除二倍体马铃薯的自交不亲和基因获得了二倍体自交系的马铃薯。
①无性繁殖的优点为____________ 。
②为敲除自交不亲和基因,研究者采用了CRISPR/Cas9基因编辑技术,如图所示:该技术利用一段与目标DNA靶序列互补的向导RNA引导Cas9蛋白对特异靶向DNA进行识别和定点敲除自交不亲和基因,其中的Cas9蛋白相当于____________ 酶。若要将自交不亲和基因从目标DNA上切除下来,需要设计____________ 种不同的向导RNA。
③检测基因编辑得到的植株是否具有自交亲和性状,最简便的方法是____________ 。
(2)MAP30蛋白是一种能使Ⅰ型核酸核糖体失活的蛋白质,实验表明MAP30蛋白具有抗pvx病毒功能,为培育高效表达该基因的马铃薯新品种,科研团队利用农杆菌转化法将MAP30基因导入马铃薯细胞内,如图所示:①PCR技术扩增MAP30基因的原理为____________ 。在PCR反应体系中一般需要加入Mg2+,原因是____________ 。每次循环可以分为____________ 三步。
②选择Ti质粒作载体的原因是____________ ,构建基因表达载体时为避免反向拼接应选择____________ 识别切割质粒。
③从分子水平上,检测转基因马铃薯是否具有抗病毒的特性,可用____________ 的方法。
(1)马铃薯因为自交不亲和,所以只能进行无性繁殖,我国科学家用基因编辑技术定点敲除二倍体马铃薯的自交不亲和基因获得了二倍体自交系的马铃薯。
①无性繁殖的优点为
②为敲除自交不亲和基因,研究者采用了CRISPR/Cas9基因编辑技术,如图所示:该技术利用一段与目标DNA靶序列互补的向导RNA引导Cas9蛋白对特异靶向DNA进行识别和定点敲除自交不亲和基因,其中的Cas9蛋白相当于
③检测基因编辑得到的植株是否具有自交亲和性状,最简便的方法是
(2)MAP30蛋白是一种能使Ⅰ型核酸核糖体失活的蛋白质,实验表明MAP30蛋白具有抗pvx病毒功能,为培育高效表达该基因的马铃薯新品种,科研团队利用农杆菌转化法将MAP30基因导入马铃薯细胞内,如图所示:①PCR技术扩增MAP30基因的原理为
②选择Ti质粒作载体的原因是
③从分子水平上,检测转基因马铃薯是否具有抗病毒的特性,可用
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【推荐2】为提高青霉素的生产效率,我国某科研团队构建了一株重组产黄青霉基因工程菌并申请专利。重组产黄青霉基因工程菌的构建方法步骤如下:①制备原始产黄青霉菌的原生质体;②提取原始产黄青霉菌的基因组DNA;③构建基因敲除片段;④将步骤③构建的基因敲除片段导入步骤①制备的产黄青霉的原生质体中,得到重组产黄青霉基因工程菌。请回答下列相关问题:
(1)制备原生质体需去除原始产黄青霉菌的__________ 。
(2)鉴定DNA是否被提取出,可使用__________ 试剂,鉴定原理是__________ 。
(3)构建基因敲除片段时使用了重叠延伸PCR技术,该技术的常用过程如下:
该过程共需设计__________ 种引物,引物的作用是__________ 。
(4)已知基因导入原生质体的方法与导入大肠杆菌的方法相似,则步骤④常用方法为__________ ,培养获得的重组产黄青霉基因工程菌时,需要将培养基调至__________ (填“酸性”、“中性”或“碱性”)。
(1)制备原生质体需去除原始产黄青霉菌的
(2)鉴定DNA是否被提取出,可使用
(3)构建基因敲除片段时使用了重叠延伸PCR技术,该技术的常用过程如下:
该过程共需设计
(4)已知基因导入原生质体的方法与导入大肠杆菌的方法相似,则步骤④常用方法为
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【推荐3】CRISPR-Cas₁2a系统是第二类用于编辑哺乳动物基因组的CRISPR-Cas系统,该系统主要包含crRNA和Cas12a蛋白两部分,crRNA能特异性识别并结合特定的DNA序列,从而引导Cas12a蛋白到相应位置剪切DNA。某科研团队基于CRTSPR-Cas12a系统对宫颈癌细胞中的KIFC1基因进行敲除,来探讨KIFCI基因在宫颈癌细胞中的功能及对宫颈癌HeLa细胞增殖的影响。
(1)在CRISPR-Cas12a系统中,crRNA的序列与目的基因特定碱基序列部分结合,结合区域最多含______________ 种核苷酸;细菌细胞中的____________ 也能起到类似Cas12a蛋白的作用。若要将KIFCI基因从目标DNA上剪切下来,需要设计______________ 种crRNA。
(2)为保证目的基因与PX458质粒正确连接,在扩增目的基因时,应在引物端加入相应的限制酶序列,其中P1的碱基序列为5′-___________ -3′(写出前9个碱基)。采用PCR技术对一个DNA进行扩增时,第n次循环共需要引物______________ 个。______________ (填“E.coliDNA连接酶”或“T4DNA连接酶”)进行连接。
(4)将crRNA-Cas12a重组载体成功转染至HeLa细胞,与对照组相比,实验组中KIFCl蛋白表达量如图2所示,细胞数目的变化如图3所示,由此可得出的结论是KIFC1基因可以_________ HeLa细胞的增殖,判断依据是敲除细胞株中KIFC1蛋白表达量明显下降,证明HeLa细胞中____________ ;KIFC1敲除组细胞数目显著____________ 对照组,表明KIFC1敲除可使HeLa细胞_____________ 。
(1)在CRISPR-Cas12a系统中,crRNA的序列与目的基因特定碱基序列部分结合,结合区域最多含
(2)为保证目的基因与PX458质粒正确连接,在扩增目的基因时,应在引物端加入相应的限制酶序列,其中P1的碱基序列为5′-
(3)在目的基因与PX458质粒连接时,可用
(4)将crRNA-Cas12a重组载体成功转染至HeLa细胞,与对照组相比,实验组中KIFCl蛋白表达量如图2所示,细胞数目的变化如图3所示,由此可得出的结论是KIFC1基因可以
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【推荐1】通过转入特定基因可将体细胞诱导形成多能干细胞(iPS细胞)。iPS细胞与胚胎干细胞相似,可以产生各种类型的体细胞。下图是应用iPS细胞治疗镰刀型细胞贫血症的技术流程,请回答:
(1)通过转入特定基因将体细胞诱导形成iPS细胞可称为_____ 。过程①是体外培养由患者身体分离的体细胞,需要在培养液中加入一定量的_____ ,以防止培养过程遭受细菌微生物等的污染。
(2)过程②中,科研人员首先要利用__________ 技术,把c-Myc等四种目的基因扩增,然后将目的基因与逆转录病毒结合,然后将其导入人体的体细胞,诱导形成iPS细胞,该过程的核心是_____ 。
(3)用限制酶EcoRV单独切割该普通质粒,可产生14kB(1kB即1000个碱基对)的长链,而同时用限制酶EcoRV、Mbol联合切割同一种质粒,得到三种长度的DNA片段,见下图,其中*表示EcoRV限制酶切割的黏性末端。
若Mbol限制酶独立切割该普通质粒,则可以产生的长度为_____ 、_____ 的DNA片段。
(4)科研人员在iPS细胞中,用健康的基因取代了镰刀型细胞贫血症的致病基因,并使其定向分化成_____ ,移植入患者体内,使患者能够产生正常的红细胞。与异体移植相比,该技术的优点是_____ 。
(1)通过转入特定基因将体细胞诱导形成iPS细胞可称为
(2)过程②中,科研人员首先要利用
(3)用限制酶EcoRV单独切割该普通质粒,可产生14kB(1kB即1000个碱基对)的长链,而同时用限制酶EcoRV、Mbol联合切割同一种质粒,得到三种长度的DNA片段,见下图,其中*表示EcoRV限制酶切割的黏性末端。
若Mbol限制酶独立切割该普通质粒,则可以产生的长度为
(4)科研人员在iPS细胞中,用健康的基因取代了镰刀型细胞贫血症的致病基因,并使其定向分化成
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【推荐2】λ噬菌体有极强的侵染能力,能在细菌中快速进行DNA复制,产生子代噬菌体,最终导致细菌破裂(称为溶菌状态);或者整合到细菌基因组中潜伏起来,不产生子代噬菌体(称为溶原状态)。在转基因技术中常用λ噬菌体构建基因克隆载体,使其在受体细菌中大量扩增外源DNA,以备研究使用。相关操作如图所示,请回答。
(1)组装噬菌体时,可被噬菌体蛋白质包装的DNA长度约为36~51kb,则经人工改造的λgtl0载体可插入的外源DNA的最大长度是______ kb.人工改造载体时,为获得较大的插入能力,可删除λ噬菌体DNA组成中的_______ 序列以缩短其长度。
(2)λ噬菌体DNA上通常没有适合的标记基因,因此人工改造时需加装适合的标记基因,如上图λgtl0载体中的imm434基因。该基因编码一种阻止λ噬菌体进入溶菌状态的阻遏 物。构建基因克隆载体需用到的酶是___________ ,外源DNA的插入位置应位于imm434基因________ (之中/之外),为什么?______________________________________ 。
(3)举一例生物界中与溶原状态相似的现象。_______________________________________
(4)如图目的基因用15N标记,且在一个受体细胞的溶菌状态时释放出32个子代噬菌体中,含14N和15N的噬菌体比例是_______________ 。
(1)组装噬菌体时,可被噬菌体蛋白质包装的DNA长度约为36~51kb,则经人工改造的λgtl0载体可插入的外源DNA的最大长度是
(2)λ噬菌体DNA上通常没有适合的标记基因,因此人工改造时需加装适合的标记基因,如上图λgtl0载体中的imm434基因。该基因编码一种阻止λ噬菌体进入溶菌状态的阻遏 物。构建基因克隆载体需用到的酶是
(3)举一例生物界中与溶原状态相似的现象。
(4)如图目的基因用15N标记,且在一个受体细胞的溶菌状态时释放出32个子代噬菌体中,含14N和15N的噬菌体比例是
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【推荐3】疫苗是终结病毒肆虐的有利武器,新冠病毒COVID-19主要通过其表面棘突蛋白与人体细胞膜上的ACE2蛋白结合实现感染。分析以下三种针对新冠病毒的疫苗和 抗体研发方法,回答相关问题。
(1)腺病毒载体重组疫苗是将棘突蛋白基因重组到改造后无害的腺病毒内,导入人体,在 体内产生棘突蛋白,刺激人体产生抗体。改造后的腺病毒载体应具备的条件是________ (答出两点)。与基因工程疫苗相比,腺病毒载体重组疫苗的优点体现在__________ 。
(2)疫情早期,由于缺乏特异性治疗感染的有效手段,血浆疗法成为治疗部分重症、危重 型患者的一丝希望。但康复患者的血浆抗体存在__________ 的缺点,使单克隆抗体药物 成为重要的研发方向。研究人员从小鼠的__________ 中提取免疫的B淋巴细胞,通过生物诱导剂__________ 使其与骨髓瘤细胞融合,融合成功的杂交瘤细胞还需要进行克隆化培养和__________ ,经多次筛选,才可以获得能分泌所需抗体的细胞。
方法 | 技术路线 |
腺病毒载体重组疫苗 | 棘突蛋白基因→腺病毒基因表达载体→人体 |
基因工程疫苗 | 棘突蛋白基因→基因表达载体→大肠杆菌→棘突蛋白→ 人体 |
单克隆抗体 | 免疫小鼠的B淋巴细胞+骨髓瘤细胞→杂交瘤细胞→单克隆抗体 |
(1)腺病毒载体重组疫苗是将棘突蛋白基因重组到改造后无害的腺病毒内,导入人体,在 体内产生棘突蛋白,刺激人体产生抗体。改造后的腺病毒载体应具备的条件是
(2)疫情早期,由于缺乏特异性治疗感染的有效手段,血浆疗法成为治疗部分重症、危重 型患者的一丝希望。但康复患者的血浆抗体存在
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解题方法
【推荐1】天然玫瑰因缺少控制合成蓝色色素的基因B而不能开蓝色花。科学家从开蓝色花的矮牵牛中了基因B后,利用生物工程技术培育出了开蓝色花的玫瑰。下图为该育种过程的操作流程。注:Amp表示氨苄青霉素抗性基因,Tet表示四环素抗性基因。外源DNA插入到Amp或Tet中会导致相应的基因失活。限制酶EcoRⅠ、HindIII和BamHⅠ的识别序列及切割位点均不相同。
请回答下列问题:
(1)图中将基因B导入玫瑰细胞的方法称为__________ 。选择Ti质粒作为运载体的原因是Ti质粒上的T-DNA可转移至受体细胞,并且整合到受体细胞染色体的DNA上。
(2)在构建重组Ti质粒时,应选用图中的__________ (限制酶)。有人用该种限制酶分别切割Ti质粒和基因B后混合,加入DNA连接酶进行反应,用得到的混合物直接转化细菌甲。结果得到了四种细菌甲:未被转化的、含环状基因B的、含Ti质粒的和含重组Ti质粒的。筛选目的细菌甲时,先用含_____ 的固体培养基培养,不能生长的是__________ 的细菌甲;然后再将能生长的细菌甲接种到含_______ 的固体培养基中,目的细菌甲在此培养基中__________ (填“能”或“不能”)生长。
(3)由玫瑰韧皮部细胞形成组织乙的过程,实质是________ 的过程。
请回答下列问题:
(1)图中将基因B导入玫瑰细胞的方法称为
(2)在构建重组Ti质粒时,应选用图中的
(3)由玫瑰韧皮部细胞形成组织乙的过程,实质是
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【推荐2】柑橘是南方重要的水果,由柑橘韧皮部杆菌引起的柑橘黄龙病对柑橘产业带来了巨大的经济损失。研究人员利用基因工程技术,导入外源抗病基因以防治柑橘黄龙病。请回答问题:
(1)研究人员从NCBI数据库中获得了包含噬菌体裂解酶基因(CaLasLYS)的一段DNA序列,利用PCR技术扩增CaLasLYS需要设计引物,请写出各包含8个碱基的一对引物______ 。PCR扩增完成后可用______ (填方法名称)鉴定产物。______ ,CaLasLYS______ (选填“能”或“不能”)含有该操作所选用的限制酶的识别序列,原因是______ 。
(3)将CaLasLYS导入柑橘细胞,经植物组织培养获得组培苗,通过______ 来确定CaLasLYS是否赋予了组培苗抗柑橘黄龙病的特性。
(4)从基因工程安全性角度考虑,转基因柑橘可能存在的风险有______ (答出1点即可)。
(1)研究人员从NCBI数据库中获得了包含噬菌体裂解酶基因(CaLasLYS)的一段DNA序列,利用PCR技术扩增CaLasLYS需要设计引物,请写出各包含8个碱基的一对引物
(2)基因工程中为使获得的CaLasLYS在柑橘细胞中稳定存在,并且遗传给下一代,需要进行的操作是
(3)将CaLasLYS导入柑橘细胞,经植物组织培养获得组培苗,通过
(4)从基因工程安全性角度考虑,转基因柑橘可能存在的风险有
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【推荐3】研究者培育出了转K基因的植株。图1、图2分别表示在该培育过程中构建的含K基因的DNA片段和Ti质粒。回答下列问题:(1)图中启动子的作用是______ ,为使K基因定向连接到质粒中,应选用的限制酶组合为_______ 。
(2)扩增含K基因的DNA片段时,需要在PCR仪中加入的引物是________ 。
(3)培育转K基因植株的过程中,K基因导入植物细胞的方法是______ 法;由图可知,在培养该转基因植物时,为得到含K基因的愈伤组织,培养基中须加入_______ 进行筛选。
(2)扩增含K基因的DNA片段时,需要在PCR仪中加入的引物是
(3)培育转K基因植株的过程中,K基因导入植物细胞的方法是
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【推荐1】工程菌是指用基因工程的方法,使外源基因得到高效表达的菌类细胞株系。下图是利用大肠杆菌生产人胰岛素过程中使用的质粒及目的基因的部分结构。_________ 所占比例较高,图中胰岛素基因以_______ 链作为模板进行转录。
(2)为使胰岛素基因能够在大肠杆菌中表达出正确的蛋白质,获取目的基因时通常先_________ ,然后再通过逆转录得到胰岛素基因。
(3)设计PCR引物对胰岛素基因进行扩增时,最好在引物的5'端添加限制酶_______ 的识别序列:n次循环后,至少消耗引物_______ 个。
(4)B—半乳糖苷酶可以分解无色的X-gal产生蓝色物质使菌落呈现蓝色,否则菌落为白色。将转化后的大肠杆菌接种到添加了X-gal和________ 的培养基上,若出现白色菌落,则该菌落即为含有重组质粒的大肠杆菌菌落。
(1)质粒上ori序列为复制的起始区域,该区域的碱基中
(2)为使胰岛素基因能够在大肠杆菌中表达出正确的蛋白质,获取目的基因时通常先
(3)设计PCR引物对胰岛素基因进行扩增时,最好在引物的5'端添加限制酶
(4)B—半乳糖苷酶可以分解无色的X-gal产生蓝色物质使菌落呈现蓝色,否则菌落为白色。将转化后的大肠杆菌接种到添加了X-gal和
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【推荐2】某研究团队从沙漠野生柽柳中克隆出了一个耐盐碱基因TcSR1。该团队用限制酶切割目的基因TcSR1,用限制酶BamHⅠ切割质粒载体V3,两种限制酶的识别序列及酶切位点如图所示,经过体外重组和转化,最终获得了能够在盐碱地生长的杨树新品种。回答下列问题:
(1)使用______ 技术在体外扩增耐盐碱基因TcSR1,扩增时需要______ 种引物。基因TcSR1不直接导入杨树细胞,原因是____________ (答出两点即可)。
(2)用限制酶BalⅡ切割目的基因和用限制酶BamHⅠ切割质粒载体V3后,再用______________ 酶处理,以构建基因表达载体,该表达载体不能够被BalⅡ或BamHⅠ识别并切割,原因是_______________________ 。
(3)将目的基因导入杨树细胞,培育后筛选转化阳性的植株。若要检测杨树植株中目的基因TcSR1是否发生转录,可采用_____ 技术,需要将______________ 片段制成探针,通过检测放射性达到目的。
(4)为进一步研究转基因杨树的耐盐碱机制,还需要进一步开展研究,实验思路是通过_________ 技术获得大量转基因植物,然后________________ 。
(1)使用
(2)用限制酶BalⅡ切割目的基因和用限制酶BamHⅠ切割质粒载体V3后,再用
(3)将目的基因导入杨树细胞,培育后筛选转化阳性的植株。若要检测杨树植株中目的基因TcSR1是否发生转录,可采用
(4)为进一步研究转基因杨树的耐盐碱机制,还需要进一步开展研究,实验思路是通过
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解题方法
【推荐3】In-Fusion技术是一项新型的无缝克隆技术。技术关键是在目的基因两端构建与线性化质粒末端相同的DNA序列(即同源序列,通常为15~20bp),然后用In-Fusion酶(能识别双链线性化DNA片段5'→3'末端16个碱基,并使其降解)处理即可实现无缝连接。如图是将氨苄青霉素抗性基因(目的基因)与线性化质粒无缝连接并导入受体细胞的操作步骤。回答下列问题:(1)不同生物的基因能够拼接的理论基础是______ (至少答出两点)
(2)过程①需要用到的酶是____ 。过程③中,同源序列1与同源序列2中的碱基序列不同,这样设计的好处是_____ 。
(3)与传统构建重组质粒的方法相比,In-Fusion技术的优势有_______ 。
(4)通过检测大肠杆菌的致死率可反映其转化后的抗性效果。请利用提供的材料(导入重组质粒的大肠杆菌培养液、氨苄青霉素、固体培养基、涂布器等)设计实验,写出计算致死率的思路___ 。
(2)过程①需要用到的酶是
(3)与传统构建重组质粒的方法相比,In-Fusion技术的优势有
(4)通过检测大肠杆菌的致死率可反映其转化后的抗性效果。请利用提供的材料(导入重组质粒的大肠杆菌培养液、氨苄青霉素、固体培养基、涂布器等)设计实验,写出计算致死率的思路
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