【推荐1】家禽的饲料中富含谷物，纤维素是谷物的重要成分，但家禽消化道中缺少能降解纤维素的酶，阻碍了家禽对饲料的吸收与利用。研究人员利用转基因技术改造乳酸杆菌，将其添加到饲料中，以提高家禽养殖效率。枯草芽孢杆菌能分泌一种可降解纤维素的酶，这种酶由W基因编码。为在乳酸杆菌中表达W基因，需使用图1中质粒作为载体，图2为含W基因的DNA片段。回答下列问题：

(1)家禽肠道内的乳酸菌可利用葡萄糖通过细胞呼吸产生酸性物质，抑制有害细菌的生长和繁殖，维持肠道的正常功能，请写出相关的反应式：____________。
(2)利用PCR技术扩增W基因时，用到的DNA聚合酶与普通的酶相比，具有的特点是____________。扩增完成后，常采用____________法来鉴定PCR的产物。为得到含W基因的乳酸杆菌，可采用平板划线法纯化乳酸杆菌，进行划线操作要注意：____________。
(3)W基因以乙链为转录模板链，转录时mRNA自身延伸的方向为5′→3′。下表是几种限制酶的识别序列及切割位点，图1、图2标注了相关限制酶的酶切位点。为获得能正确表达W基因的重组质粒，切割质粒应选用的限制酶是________，切割含W基因的DNA片段应选用的限制酶是________。

限制酶	EcoRI	BamHI	KpnI	MfeI	HindШ
识别位点	5′G↓AATTC 3′ 3′CTTAA↓G5′	5′G↓GATCC3′ 3′CCTAG↓G5′	5′GGTAC↓C3′ 3′C↓CATGG5′	5′C↓AATTG3′ 3′GTTAA↓C5′	5′A↓AGCTT3′ 3′TTCGA↓A 5′

【推荐2】科学家研究嗜热土壤芽孢杆菌得出这种杆菌能产生β葡萄糖苷酶（BgIB），这是一种耐热纤维素酶，为了在工业生产中更好地应用，开展了以下试验，依题回答下列问题。
I.利用大肠杆菌表达BglB酶
(1)PCR扩增BgIB基因时，需要的条件有________（至少答3点）。
   
注：图中限制酶的识别序列及切割形成的黏性末端均不相同
(2)上图为质粒限制酶切图谱。BgIB基因不含图中限制酶识别序列。为使PCR扩增的BgIB基因重组进该质粒，扩增的BglB基因两端需分别引入____和______限制酶的识别序列。
(3)大肠杆菌不能降解纤维素，原因是_______，但转入上述构建好的表达载体后则获得了降解纤维素的能力，这是因为___________。
II.温度对BglB酶活性的影响
(4)据图1、2可知，80°C保温时间达到______分钟后，BglB酶会失活；为高效利用BgIB酶降解纤维素，反应温度最好控制在_______（单选）。
A.50°C                    B.60°C                      C.70°C                    D.80°C
   
注：酶的热稳定性是酶在一定温度下，保温一段时间后通过其活性的保持程度来反映的III.鉴定筛选出的大肠杆菌菌落中是否含有正确插入目的基因的重组质粒
(5)为鉴定筛选出的大肠杆菌菌落中是否含有正确插入目的基因的重组质粒，拟设计引物进行PCR鉴定。图3所示甲、乙、丙3条引物在正确重组质粒中相应位置，PCR鉴定时应选择的一对引物是___________。某学生尝试用图中另外一对引物，结果从某一菌落的质粒中扩增了400bp片段，原因是_____________________。
   

【推荐1】I．图甲是抗寨卡病毒（一种RNA病毒）单克隆抗体制备的过程图，图乙是克隆羊培育过程示意图，请据图回答下列问题：

（1）图甲中②过程常需要借助动物细胞融合技术，其生物学原理是__________________，该过程中动物细胞融合所特有的方法是使用____________诱导细胞融合。
（2）利用基因工程生产寨卡病毒的疫苗时，需要将重组DNA导入细菌细胞中，这一步骤常用的方法是______。
（3）核移植时受体应选用_______期的卵母细胞。
（4）在制备单克隆抗体的过程中，进行了两次筛选，第一次筛选是利用______培养基，只有____________细胞能长期存活；第二次筛选获得______________________________。
（5）通过上述方法得到的抗体与常规的血清抗体相比最大的优点是__________________________。
Ⅱ．黄瓜花叶病毒（CMV）是能侵染多种植物的RNA病毒，可危害番茄的正常生长并造成减产，研究人员通过农杆菌介导将该病毒外壳蛋白的cDNA导入番茄植株中，成功获得抗CMV的番茄植株。
（1）获得CMV的RNA后，需在_____________的催化下才能合成CMV外壳蛋白的cDNA。
（2）获得cDNA后，需先通过一定方法将其插入到农杆菌的________________片段中，然后将番茄子叶切段与该农杆菌共同培养，以实现对番茄细胞的转化。

【推荐2】甲型流感病毒为RNA病毒，易引起流感大规模流行。我国科学家在2017年发明了一种制备该病毒活疫苗的新方法，主要环节如下。
（1）改造病毒的部分基因，使其失去在正常宿主细胞内的增殖能力。以病毒RNA为模板，逆转录成对应DNA后，利用___________技术扩增，并将其中某些基因（不包括表面抗原基因）内个别编码氨基酸的序列替换成编码终止密码子的序列。与改造前的基因相比，改造后的基因表达时不能合成完整长度的___________，因此不能产生子代病毒。将该改造基因、表面抗原等其他基因分别构建重组质粒，并保存。
（2）构建适合改造病毒增殖的转基因宿主细胞。设计合成一种特殊tRNA的基因，其产物的反密码子能与（1）中的终止密码子配对结合，并可携带一个非天然氨基酸（Uaa）。将该基因与___________连接后导入宿主细胞。提取宿主细胞的__________进行分子杂交鉴定，筛选获得成功表达上述tRNA的转基因宿主细胞。
（3）利用转基因宿主细胞制备疫苗。将（1）中的重组质粒导入（2）中的转基因宿主细胞，并在补加__________的培养基中进行培养，则该宿主细胞能利用上述特殊tRNA，翻译出改造病毒基因的完整蛋白，产生大量子代病毒，用于制备疫苗。特殊tRNA基因转录时，识别其启动子的酶是_________。
A．病毒的DNA聚合酶
B．宿主的DNA聚合酶
C．病毒的RNA聚合酶
D．宿主的RNA聚合酶
（4）上述子代病毒不能在正常宿主细胞中增殖，没有致病性，因此不经灭活或减毒即可制成疫苗。与不具侵染性的流感病毒灭活疫苗相比，该病毒活疫苗的优势之一是可引起_________免疫，增强免疫保护效果。

【推荐1】黄萎病是一种危害棉花的常见疾病，科学工作者通过转基因技术将抗黄萎病基因——葡萄糖氧化酶基因（GO）导入棉花，获得抗黄萎病棉花。下图为构建的重组质粒的示意图，已知T－DNA上的基因在农杆菌中不能表达，而在植物细胞中能表达。回答下列问题：
（1）构建基因表达载体时，利用______酶将GO定向接入Ti质粒。Ti质粒上nptII的功能是______。
（2）在下图所示重组质粒中，目的基因的启动子和终止子应位于______（填“Bar的两端”或“GO的两端”或“Bar－GO的两端”）。启动子具有______的作用。

（3）切取经无菌培养的棉花幼苗下胚轴，直接转入含重组质粒的农杆菌培养液中侵染5~10 min后，将下胚轴放入愈伤组织诱导培养基中培养2天。成功转化的棉花细胞能在含有______的培养基中生长增殖，未成功转化的细胞不能在该培养基中生长增殖。为了检测转基因棉花是否含有葡萄糖氧化酶，可采用______法进行检测。
（4）若将目的基因导入动物细胞，一般采用的方法是__________。

【推荐2】长春新碱是一种由夹竹桃长春花属植物长春花中提取的一种生物碱，是目前常用的天然抗肿瘤药物之一。利用植物组织培养技术获得长春新碱的基本过程如图所示。请回答下列问题：
外植体愈伤组织液体培养基中悬浮振荡培养细胞悬浮培养与继代提取、检测
(1)①表示____________，形成的愈伤组织细胞特点是_____________________________。
(2)如要将外源基因通过农杆菌转化法导入长春花细胞进行遗传改造，研究人员用长春花的愈伤组织作为外植体和经筛选的农杆菌进行共培养，共培养的目的是____________，共培养后将外植体在含有抗生素的培养基中进行继代培养以筛选发生____________的细胞，此过程选用的抗生素在农杆菌中____________（“有”或“无”）相应的抗性基因。
(3)研究人员提取不同组织细胞的mRNA，再将其逆转录成cDNA进行PCR扩增，该过程需要____________酶参与。设计引物是PCR技术成功的关键步骤之一。下图为某同学设计的两组引物（只标注了部分碱基序列），请判断是否合理并说明理由____________。

【推荐3】索马甜是从非洲竹芋中提取的一种天然甜味蛋白，具有甜度高、能量低等优点。科研工作者利用基因工程技术，让索马甜基因在微生物、真菌和植物细胞中表达，取得了一定进展。回答下列问题：
(1)可以从cDNA文库中获取索马甜基因。构建cDNA文库的过程中，要以___________为模板合成cDNA。与基因组文库相比，cDNA文库含有的基因__________（填“较多”、“较少”或“与其相当”）。利用PCR技术扩增索马甜基因时，需要有一段已知的索马甜基因的核苷酸序列，以便根据这一已知序列__________。
(2)将索马甜基因导入大肠杆菌前，要用__________处理大肠杆菌；若要从牛乳汁中获得索马甜，构建基因表达载体时，要将索马甜基因和___________重组在一起，并且选用牛的__________作为受体细胞。
(3)为了检测奶牛细胞中的索马甜基因是否转录出mRNA，可用__________作探针与提取的mRNA杂交；为了检测是否翻译出索马甜，可用相应的抗体进行___________。