【推荐1】如图1～6是某研究小组利用过氧化氢酶探究H₂O₂分解条件而获得的实验结果。请回答下列有关问题：

(1)图1、图3所代表的实验中，自变量依次为___、___。
(2)图2中曲线bc段产生的原因可能是___。
(3)从图5可以得出的结论是：在底物足量条件下，___。图6中A点之前，限制酶促反应速率的因素是___。
(4)图1和图4分别说明酶具有___性和___性，酶作用的机理是___。
(5)图3是与H₂O₂酶活性影响因素相关的曲线，请分析回答，将酶置于pH=2的环境中，再将pH升至7，酶活性的变化是___。

【推荐2】多酶片是一种复方制剂，它主要是由胰酶、胃蛋白酶复合而成的一种药物，其说明书的部分内容如下：
(性 状)本品为肠溶衣与糖衣的双层包衣片，内层为胰酶，外层为胃蛋白酶。
(适应症)用于消化不良、食欲缺乏。
(用法用量)口服。一次2－3片，一日3次
(注意事项)本品在酸性条件下易破坏，故服用时切勿嚼碎。
回答下列问题。
（1）酶是活细胞产生的具有催化作用的有机物，具有_______________________________特点。服用多酶片时不能嚼碎的原因是_______________。
（2）多酶片为肠溶衣与糖衣双层包被，外层包被应为________(选填“肠溶衣”或“糖衣”)。糖衣以糖浆为主要包衣材料，有一定的防潮、隔绝空气、掩盖药物不良气味等作用；肠溶衣为一层特殊包裹物质，能很好保护胰酶不会在胃部被破坏的原因是___________________。
（3）请利用提供的材料用具，设计实验探究pH对胃蛋白酶活性的影响。
备选材料用具：蛋白块若干，胃蛋白酶溶液，蒸馏水，一系列pH梯度的溶液，试管若干，恒温水浴锅，时钟等。
实验步骤：
①取规格相同的5支洁净试管，分别编号1、2、3、4、5；
②向5支试管中分别注入5 mL一系列pH梯度的溶液，然后各加入5 mL胃蛋白酶溶液；
③将试管置于37℃的恒温水浴锅中保温5 min；
④向5支试管中各加入等量且适量的蛋白块；
⑤________________________________________________________________________。
（4）为进一步确认上述实验中，蛋白块的消失是否是胃蛋白酶催化所致，请提出实验改进的思路_____________________________________。

【推荐3】下面是某同学所做的有关过氧化氢在不同条件下分解的验证性实验。
一、实验材料和用具：新鲜的质量分数为20%的肝脏研磨液、体积分数为3%的过氧化氢溶液、质量分数为3．5%的FeCl₃溶液、蒸馏水、酒精灯、温度计等。
二、实验步骤

步骤	试管编号
	a	b	c	d
加入底物	3%H2O2 2mL	3%H2O2 2mL	3%H2O2 2mL	3%H2O2 2mL
控制温度	常温	常温	常温	常温
加入试剂	蒸馏水 2滴	FeCl3溶液 2滴	肝脏研磨液 2滴	煮熟的肝脏研磨液 2滴
观察气泡 产生情况

请根据该实验回答下列问题。
（1）该实验中，H₂O₂分解最快的试管是__________。
（2）酶是活细胞产生的有_______________作用的有机物，其中绝大多数酶是____________。与无机催化剂相比，酶催化效率更高的原因是______________________________。
（3）试管a和d的实验现象几乎相同，是因为高温会破坏酶的_______________。从而使其永久失去活性。加热也能促使过氧化氢的分解，其原因是_______________________________。
（4）假如四支试管的实验现象均不明显，原因最可能是_____________________。如果仅将上述实验条件由常温改为90℃水浴，重复实验，H₂O₂分解最快的试管是_________________。

【推荐1】白细胞表面抗原2（SLA—2） 在抗原呈递、机体器官移植以及免疫应答方面有着重要作用。 为进一步研究SLA—2 的结构与功能，科研人员以能稳定传代的猪肾上皮细胞为材料，构建了稳定高表达SLA—2 基因的细胞株，过程如图。其中Amp '表示氨苄青霉素抗性基因， Puro'为嘌呤霉素抗性基因， BclI、NotI、XbaI、San3AI 为限制酶酶切位点，括号内数值为距复制起点的长度。请回答下列问题。
   

限制酶	BclⅠ	NotⅠ	XbaⅠ	San3AⅠ
识别序列及切割位点	T↓GATCA	GC↓GGCCGC	T↓CTAGA	↓GATC

(1)过程①RT-PCR 需要的酶有_____。与白细胞内基因相比，过程①获得的 SLA-2 基因在结构上不具有 _____。
(2)为使获得的SLA—2 基因与质粒1定向连接，应选择的限制酶是_____。扩增时应选用的1对引物为_____（填字母）。
A．5'——GCGATCATGCGGGTCAGGGGCCCTCAAGCCATCCTC——3'
B．5'——GCTCTAGAATGCGGGTCAGGGGCCCTCAAGCCATCCTC——3'
C．5'——GTTTGATCACTCACACTCTAGGATCCTTGGTAAGGGACAC——3'
D．5'——GTTGCGGCCGCTCACACTCTAGGATCCTTGGTAAGGGACAC——3'
(3)过程②为将酶切、连接后的重组质粒导入处于_____ 的大肠杆菌，转化后采用含_____的平板进行筛选。
(4)为鉴定与验证重组质粒3，研究人员用Not   I和 San3A   I完全酶切质粒2和重组质粒3后 电泳并比较。凝胶电泳分离DNA 分子实验中，通常用荧光或 _____ 对DNA   进行标记，或用_____ 进行染色来观察DNA 的条带。电泳过程中需加 _____作为结果的参照物。

【推荐2】非细胞合成技术是一种运用合成生物学方法，在细胞外构建多酶催化体系，获得目标产物的新技术，其核心是各种酶基因的挖掘、表达等。中国科学家设计了4步酶促反应的非细胞合成路线（如图），可直接用淀粉生产肌醇（重要的医药食品原料），以期解决高温强酸水解方法造成的严重污染问题，并可以提高产率。

回答下列问题：
(1)研究人员采用PCR技术从土壤微生物基因组中扩增得到目标酶基因。此外，获得酶基因的方法还有_______。（答出两种即可）
(2)高质量的DNA模板是成功扩增出目的基因的前提条件之一。在制备高质量DNA模板时必须除去蛋白，方法有________。（答出一种即可）
(3)研究人员使用大肠杆菌BL21作为受体细胞、pET20b为表达载体分别进行4种酶的表达。表达载体转化大肠杆菌时，首先应制备_______细胞。为了检测目的基因是否成功表达出酶蛋白，需要采用的方法有_______。

【推荐3】CRISPR/Cas9是目前应用最广泛的基因组编辑技术，能对DNA分子中的基因进行编辑，引入人们想要的基因或破坏已有的基因。使用该技术，需要向待编辑的细胞中加入以下主要组分：人工合成的向导RNA.和一种来自细菌的核酸酶Cas9蛋白。其原理是向导RNA与DNA分子中希望被编辑的序列通过碱基互补配对结合后，Cas9蛋白再结合上去将与向导RNA结合的DNA进行切割，使DNA双链断裂，过程如下图所示。回答下列问题：

(1)据图推测Cas9蛋白切断的化学键是____。
(2)当DNA双链断裂后，可导入目的基因，目的基因的导入往往需要利用基因工程方法构建基因表达载体，基因表达载体上除了含有目的基因和标记基因，还必须有____（写出两项即可）。
(3)目的基因在与运载体结合前需要用PCR技术进行大量扩增，该过程需要Taq酶，该酶与普通DNA聚合酶相比，特点是____。获得PCR产物后，常用____电泳法对PCR产物进行鉴定。
(4)与传统的限制酶切割基因技术相比，CRISPR/Cas9基因编辑技术的明显优点是____。

【推荐1】某质粒上有SalⅠ、HindⅢ、BamH I三种限制酶切割位点，同时还含有抗四环素基因和抗氨苄青霉素基因。利用此质粒获得转基因抗盐烟草的过程如图所示，请回答下列问题。

（1）将含有目的基因的DNA与质粒分别用Sal I酶切，酶切产物用_____________催化连接后，两个DNA片段的连接结果有_______种。
（2）在构建重组质粒时，应选用______酶和________酶，对_______进行切割，以保证重组DNA序列的唯一性。
（3）为筛选出导入了重组质粒的农杆菌，应在培养基中加入________________，理由是_______。
（4）将转入抗盐基因的烟草细胞培育成完整的植株需要用__________________技术，愈伤组织经________进而形成完整植株，此过程除营养物质外还必须向培养基中添加________。

【推荐2】下图是某基因工程中构建重组质粒的过程示意图，载体质粒P0具有四环素抗性基因（tet^r）和氨苄青霉素抗性基因（amp^r）。请回答下列问题：

（1）EcoRⅤ酶切位点为，EcoRⅤ酶切出来的线性载体P₁为_______末端。
（2）用Taq DNA聚合酶进行PCR扩增获得目的基因片段，其两端各自带有一个腺嘌呤脱氧核苷酸，载体P₁用酶处理，在两端各添加了一个碱基为_______的脱氧核苷酸，形成P₂，P₂和目的基因片段在_______酶作用下，形成重组质粒P₃。PCR技术中，使用的DNA聚合酶不同于一般生物体内的DNA聚合酶，其最主要的特点是_____________________________________。 
（3）PCR技术可以临床用于诊断感染性疾病、肿瘤及遗传病等，它是一种用于放大扩增特定的DNA片段的分子生物学技术，其标准步骤为_______、退火、__________。
（4）重组质粒中抗生素抗性基因的作用是为了___________________。若该目的基因是从cDNA文库中分离获取的蔗糖转运蛋白基因，将重组质粒导入丧失吸收蔗糖能力的大肠杆菌突变体中，然后在_______为唯一含碳营养物质的培养基中培养，以完成目的基因表达的初步检测。

【推荐3】水稻穗粒数可影响水稻产量。研究者筛选到一株穗粒数异常突变体，并进行了相关研究。
(1)农杆菌Ti质粒上的_____________序列，可以从农杆菌中转移并随机插入到被侵染植物的_____________中，导致被插入的基因功能丧失。研究者用此方法构建水稻突变体库，并从中筛选到穗粒数异常突变体。
(2)研究者分别用EcoRI、HindIlI、Bam HI三种限制酶处理突变体的总DNA，用HindIII处理野生型的总DNA，处理后进行电泳，使长短不同的DNA片段分离。电泳后的DNA与DNA分子探针（含放射性同位素标记的T—DNA片段）进行杂交，得到下图所示放射性检测结果。

①由于杂交结果中_______________，表明T—DNA成功插入到水稻染色体基因组中。（注：T—DNA上没有EcoRI、HindIII、BamHI三种限制酶的酶切位点）
②不同酶切结果，杂交带的位置不同，这是由于__________________不同。
③由实验结果判断突变体为T—DNA单个位点插入，依据是________________。
(3)研究者用某种限制酶处理突变体的DNA（如下图所示），用_________________________________将两端的黏性末端连接成环，以此为模板，再利用中的引物__________________组合进行PCR，扩增出T—DNA插入位置两侧的 突变体DNA未知序列。经过与野生型水稻基因组序列比对，确定T—DNA插入了2号染色体上的B基因中。

(4)研究发现，该突变体产量明显低于野生型，据此推测B基因可能_________________（填“促进”或“抑制”）水稻穗粒的形成。
(5)育种工作者希望利用B基因，对近缘高品质但穗粒数少的低产水稻品系2进行育种研究，以期提高其产量，下列思路最可行的是(      )。
a．对水稻品系2进行⁶⁰Co照射，选取性状优良植株
b．培育可以稳定遗传的转入B基因的水稻品系2植株
c．将此突变体与水稻品系2杂交，筛选具有优良性状的植株

【推荐1】家蚕丝腺细胞能够特异性表达丝腺蛋白，以构成蚕丝。研究人员以手足口病疫苗基因为目的基因，构建丝腺生物反应器，以生产手足口病疫苗。请回答：
（1）构建基因表达载体时，手足口病疫苗基因应与_____启动因子重组，使手是口病疫苗基因能在丝腺细胞中特异性表达。基因表达载体中还应含有_______，供重组DNA的鉴定和选择。
（2）将基因表达载体导入受体细胞时，主要使用_____技术导入受精卵。
（3）运用PCR技术检测转基因家蚕中的手足口病疫苗基因是否成功转录，首先提取______以合成DNA，再经PCR技术扩增、检测。该过程所需的酶有________获得的转基因手足口病疫苗还需做安全性与有效性的临床试验，才能上市使用。

【推荐2】奶酪是一种常见的食品，传统的方法是从未断奶的小牛的胃黏膜里提取牛凝乳酶，它能水解多肽链中苯丙氨酸和甲硫氨酸之间的肽键以促使牛奶凝结来生产奶酪，此方法产量低且昂贵。如今科学家将编码牛凝乳酶的基因导入大肠杆菌中，实现牛凝乳酶的批量生产，极大的满足了奶酪生产的需求。请回答相关问题：

（1）科学家利用基因工程生产出大量的牛凝乳酶，该工程是在___________________水平上进行设计和施工的，其核心步骤是_________________________。
（2）上述基因工程技术过程中的目的基因是________________，常用__________方法扩增得到，该技术扩增DNA的过程包括__________________________。
（3）利用图示目的基因和质粒构建重组质粒，最好选用_______________（填限制性核酸内切酶名称）切割，这样选择的理由（至少写出两个）是__________和___________。若要初步筛选出导入重组质粒的大肠杆菌，要在含___________________（氨苄青霉素/四环素）的培养基中进行培养。
（4）最后进行凝乳酶活性检测：将适量的大肠杆菌表达出的凝乳酶的提取物加入脱脂奶粉溶液中，37℃保温一段时间，可观察到_______________________现象。