【推荐1】定点诱变技术是近年来生物工程研究中发展迅速的一个领域。通过定点诱变可以在体外改造目的DNA分子，进而研究基因的表达以及蛋白质的结构与功能之间的关系。经典的大引物PCR定点诱变技术成为基于PCR的定点诱变技术中应用最普遍的方法，操作过程如图甲。研究者欲改造某基因并将其导入大肠杆菌的质粒中保存，该质粒含有氨青霉素抗性基因、LacZ基因及一些酶切位点，结构如图乙。回答下列问题：
   
(1)利用大引物PCR进行定点诱变需要进行两轮PCR（PCR1和PCR2），在PCR1中，至少需要______个循环才能获得图甲所示的大引物。在PCR2中，要获得带有诱变点的改良基因，引物应选用大引物两条链中的______（填“①”或“②”）。
(2)为实现质粒和改良基因的高效连接，选用限制酶XmaⅠ而不选用限制酶SmaⅠ的原因是______。为将改良基因构建在质粒上，还需要______等酶。
(3)在构建改良基因表达载体时，有的质粒含有改良基因，有的质粒为空白质粒，将含上述组件的溶液加入到大肠杆菌菌液中，适宜温度下培养一段时间后，再将菌液涂布在含氨苄青霉素和______的平板上。一段时间后，在培养基上出现白色和蓝色两种菌落，其中______菌落含有重组质粒，判断的依据是______。

【推荐2】已知果蝇的长翅和小翅、圆眼和棒眼各为一对相对性状，分别受一对等位基因控制。某研究小组将一只雌性长翅圆眼果蝇与一只雄性长翅棒眼果蝇进行多次杂交，统计F₁的表现型及比例为长翅圆眼：小翅圆眼：长翅棒眼：小翅棒眼=309：111：312：117。回答以下问题：
(1)因为果蝇具有_____的优点（至少写出两点），所以是常见的遗传学实验材料。
(2)通过分析，对两对相对性状显隐性关系、两对等位基因是位于常染色体还是只位于X染色体上这两个问题，能做出明确判断的是_____。
(3)研究小组发现在上述多次杂交实验中有两次杂交的后代表现为长翅：小翅=1：1（相关基因用A、a表示）。为探究其原因，研究小组首先通过查阅资料发现A、a基因位于常染色体上，接着另取雌性小翅果蝇与杂合雄性长翅果蝇多次杂交，发现也有少数几次杂交后代表现为长翅：小翅=0：1．从减数分裂的角度看，出现上述例外的原因可能是_____。
(4)分别提取长翅和小翅果蝇的总RNA，通过PCR技术，依次完成_____和DNA复制过程后，比较获得的cDNA长度，发现小翅基因对应的cDNA比长翅基因的长。若小翅是由于变异产生的，则变异类型最可能是_____。

【推荐3】白细胞介素12（IL-12）是免疫应答中的异二聚体糖蛋白，由p35和p40两个亚基经两个二硫键共价结合而成，对人体抗癌免疫系统有非常重要的调节作用。由于p35和p40基因分别定位于不同的染色体，两基因同时表达且p40和p35以1：1的比例形成的异二聚体才具有生物活性。若两基因表达效率不同，则形成的IL-12二聚体的活性大大降低。为避免上述不利情况的发生，科学家尝试用下图所示方案构建了含有p40和p35cDNA序列的IL-12融合基因。其中P1、P2、P3、P4为PCR引物。P2和P3除含有与p40基因和p35基因互补的碱基序列外，在5'端含有36个组成Linker的碱基序列，它们之间有27个碱基互补。

(1)p40的cDNA序列____________（填“能”或“不能”）包含终止密码子的编码序列，理由是____________。
(2)构建IL-12融合基因时，首先利用引物P1、P2扩增p40基因，利用引物P3、P4扩增p35基因，然后经过一个循环的变性、退火和延伸，即通过重叠延伸法得到少量的IL-12融合基因。之后以____________为引物，大量扩增出IL-12融合基因。据图分析IL-12融合基因中的Linker序列共有____________对碱基。
(3)可利用递减PCR扩增目的基因。递减PCR是在开始时先设定一个比较高的复性温度（如62℃），每个循环复性温度下降1℃，到一个较低温度（如52℃）以后每个循环的复性温度保持不变直到结束。递减PCR较常规PCR技术的优势是______________。
(4)已知限制酶Xhol的识别序列：5'-C'TCGAG-3'Nhel的识别序列：5'-G'CTAGC3'，根据下表中相关引物的碱基序列，判断引物P1和P4中分别引入了限制酶______________的序列，P3的5'端的前10个碱基序列是________________。

引物	碱基序列
P1	5'CTAGCTAGCGATGTGTCACCAGCAGTTGGTCATCT3'（35个碱基）
P2	5'ACCACCAGAGCCCCCGCCCCCGCTTCCTCCTCCTCCACTGCAGGGCACAGATGCCCATT3'（59个碱基）
P4	5'CGCCTCGAGTTATTAGGAAGCATTCAGATAG3′（31个碱基）

(5)科学家将构建成功的IL-12融合基因（共有1630个碱基对，其中没有内含子）转染树突状细胞（DC），请利用PCR技术检测IL-12融合基因是否表达出mRNA。实验设计思路是：
提取______________，进行RT-PCR扩增，检测扩增产物中_________________________。

【推荐1】请回答下列有关植物组织培养的问题：
（1）用于植物组织培养的植物材料称为_____________________。
（2）组织培养中的细胞，从分化状态转变为未分化状态的过程称为___________________。
（3）在再分化阶段所用的培养基中，含有植物激素X和植物激素Y。逐渐改变培养基中这两种植物激素的浓度比，未分化细胞群的变化情况如图所示。据图指出两种激素的不同浓度比与形成芽、根、愈伤组织的关系。

①当植物激素X与植物激素Y的浓度比等于1时，_____________________________________。
②当植物激素X与植物激素Y的浓度比大于1时，_____________________________________。
③当植物激素X与植物激素Y的浓度比小于1时，_____________________________________。
（4）生产上用试管苗保存植物的优良性状，其原因是_____________________________________。

【推荐2】草甘膦是目前世界上使用量最大的除草剂，因此研制抗草甘膦的农作物新品种是国内研究热点。某科研单位培育出抗草甘膦的植物，培育过程如图1所示。

（1）在阶段1过程中，将适当浓度的b与农杆菌混合，筛选______________________，出再通过农杆菌介导，筛选含有重组DNA的水稻细胞c，提高培育的成功率。
（2）阶段2水稻细胞经过培养后，脱分化形成____________，再分化获得____________，再发育成完整植株。要想再获得脱毒苗，还可以从新植株芽、根的____________获取细胞后，再进行植物组织培养。
（3）近年诞生了具划时代意义的CRISPR/Cas9基因编辑技术，可简单、准确地进行基因定点编辑。如图2所示，Cas9蛋白是____________酶，通过向导RNA中的识别序列，可以特异性结合位点进行切割。
（4）研究发现，草甘膦通过水稻细胞的某受体蛋白M起作用，因此该研究单位欲通过基因编辑技术对水稻细胞进行精确的基因敲除，经组织培养获得完整植株后，还需进行____________得到可连续遗传的抗草甘膦水稻品种。

【推荐3】利用种皮白色水稻甲（核型2n）进行原生质体培养获得再生植株，通过再生植株连续自交，分离得到种皮黑色性状稳定的后代乙（核型2n）。甲与乙杂交得到丙，丙全部为种皮浅色（黑色变浅）。设种皮颜色由1对基因A和a控制，且基因a控制种皮黑色。请回答：
(1)甲的基因型是_________。上述显性现象的表现形式是__________。
(2)请用遗传图解表示丙为亲本自交得到子一代的过程_____。
(3)在原生质体培养的过程中，首先对种子胚进行脱分化得到愈伤组织，通过________培养获得分散均一的细胞。然后利用没处理细胞获得原生质体，原生质体再生出________，才能进行细胞分裂，进而分化形成植株。
(4)将乙与缺少1条第7号染色体的水稻植株（核型2n-1，种皮白色）杂交获得子一代，若子一代的表现型及其比例为_______，则可将种皮黑色基因定位于第7号染色体上。
(5)通过建立乙植株的_________，从中获取种皮黑色基因，并转入玉米等作物，可得到转基因作物。因此，转基因技术可解决传统杂交育种中_______亲本难以有性杂交的缺陷。

【推荐1】面对2019新型冠状病毒在全球的肆虐，包括我国在内的各国都在想方设法积极应对。下图为科研人员研发冠状病毒疫苗的几种技术思路。
     
（1）途径Ⅰ和Ⅱ都需要通过动物细胞培养获得足够数量的病毒株。在动物细胞培养中，除了适宜的营养物质、温度等条件外，还需要控制气体条件是____________与5%二氧化碳的混合气体，二氧化碳的主要作用是____________。途径Ⅰ与途径Ⅱ相比，生产的疫苗安全性更高的是途径____________。
（2）途径Ⅲ中，过程①的操作需要____________酶。途径Ⅲ中所示技术的核心是________（用图中数字作答）。
（3）途径Ⅳ生产的DNA疫苗在动物细胞中表达引起机体免疫应答。与DNA疫苗相比，mRNA疫苗的安全性更有优势，这是因为mRNA不需要进入____________，无整合到宿主细胞染色体基因组中的风险，且易被____________水解，不会遗传给子细胞。
（4）该病毒表面蛋白A为主要抗原，由病毒的A基因控制合成，为进一步获得更符合治疗要求的单克隆抗体，科研人员对抗体结构进行精细研究，找到既不影响抗体空间结构又降低免疫反应的____________序列，通过基因工程技术对抗体结构进行人源化改造。

【推荐2】重组工程是一项新型的基因操作技术，其基本原理是通过重组酶将特定的单链DNA片段与双链DNA分子在同源序列处重组，从而实现基因的敲除、替换和突变等修饰。图1表示DNA单链重组过程示意图，请回答问题：

(1)基因工程的核心工作是____________。
(2)图2是大肠杆菌pBR322﹣Red质粒的示意图。科研人员欲利用重组工程技术敲除该质粒上从ki1基因至N基因之间的DNA序列，设计的单链多核苷酸引物应为____________的连接序列（在①、②、③、④中选填）。

(3)将单链多核苷酸与含有pBR322-Red质粒的大肠杆菌感受态细胞混合、电击转化，在重组酶的作用下，理论上1%～6%的大肠杆菌会发生体内同源重组。已知线性化质粒无法转化大肠杆菌。为了从大肠杆菌混合物中筛选出发生重组的克隆，科研人员进行了下列操作。请完成表格相关内容。

目的	简要操作
扩大培养	①将大肠杆菌混合物全部转入含____________的液体培养基中
质粒提取、酶切	②提取质粒，选择限制酶____________进行处理
转化	③用酶切产物转化____________（“含有”或“不含有”）pBR322-Red质粒大肠杆菌的感受态细胞
鉴定、筛选	④菌落PCR技术、琼脂糖凝胶电泳

(4)PCR技术扩增目的基因的前提是____________，以便根据此前提合成引物。引物的作用是____________。
图3为用琼脂糖凝胶电泳对PCR结果进行鉴定，其中泳道____________（填“1”或“2”）对应的是ki1-N基因缺失的质粒。在电泳过程中，为了指示电泳进程，可以将PCR扩增产物与____________混合。

(5)常规的基因工程和重组工程都能将外源基因插入质粒。一般情况下，限制酶在质粒上存在多个作用位点，因此常规的基因工程技术构建重组质粒时会出现____________现象，而重组工程技术可以提高精准。

【推荐3】如图可表示细胞融合技术的一些过程，请据图回答：

（1）若A、B到C过程是体外受精过程，则对已取得的精子必须先进行__处理，若需获得更多的卵细胞一般要对雌性个体注射__，使其__。
（2）若该过程是制备单克隆抗体的过程，在A、B到C的过程中，A细胞为骨髓瘤细胞，B细胞为能产生抗体的B淋巴细胞，那么D细胞称为__ 细胞．从融合细胞中选择出它的方法是在特定的选择性培养基中培养，筛选出该类细胞后还需进行__培养和抗体检测，经多次筛选可获得数量足够的能分泌所需抗体的细胞。
（3）若A、B细胞为植物细胞，D细胞在植物组织培养时，先配置__培养基，再加入一定比例的植物激素，当生长素相对较少时，愈伤组织可发育形成__。
（4）若要培育转基因植物，则可采用__法将目的基因导入受体细胞中．受体细胞应该是__。（A．体细胞     B．卵细胞     C．受精卵     D．雄配子）．为了得到农杆菌的单菌落，常采用的分离方法有两种，即__和__。
（5）植物组织培养和微生物培养都需要无菌操作，下列不适宜用高压蒸汽灭菌的是__。
A．接种环和镊子                           B．三角瓶和广口瓶
C．发芽培养基和生根培养基          D．用于培养的幼茎和幼芽