【推荐1】斑马鱼的酶D由17号染色体上的D基因编码。具有纯合突变基因（dd）的斑马鱼胚胎会发出红色荧光。利用转基因技术将绿色荧光蛋白基因（G）整合到斑马鱼17号染色体上，带有G基因的胚胎能够发出绿色荧光。未整合G基因的染色体的对应位点表示为g。图1和图2所示分别为实验所用的质粒上相关酶切位点以及含绿色荧光蛋白基因（G）的外源DNA片段上具有的相关酶切位点。请据图回答下列问题：
   
(1)在上述转基因实验中，将G基因与质粒重组，需要的两类酶是___。
(2)用图1中质粒和图2外源DNA构建重组质粒时，不能使用___切割以免破坏目的基因，若要防止质粒和含目的基因的外源DNA片段自身环化，则应选择下列方法___为好。
①只使用EcoRI处理
②使用BamHI和 SamⅠ同时处理
③使用BamHI和HindⅢ同时处理
④使用SamI和HindⅢ同时处理
(3)现用转基因个体N和个体M进行如下杂交实验得到的子代胚胎表现型如图3所示。
   
①根据上述杂交实验推测亲代M的基因型是___，子代中只发绿色荧光的胚胎基因型是___。
②杂交后，出现红绿荧光（既有红色又有绿色荧光）胚胎的原因是亲代___（填“M”或“N”）的初级精（卵）母细胞在减数分裂过程中，同源染色体上的非姐妹染色单体发生了互换，导致染色体上的基因重组。

【推荐2】转基因草莓中有能表达乙肝病毒表面抗原的基因，由此可获得用来预防乙肝的一种新型疫苗，其培育过程如下图甲所示（①至④代表过程，A至C代表结构或细胞）：   

(1)图中A为___。获得A的途径有多种，其一就是根据目标蛋白质的氨基酸序列，推测出DNA的序列，再通过化学方法合成A。现已知目标蛋白中的一段氨基酸序列为-甘氨酸-丝氨酸-精氨酸-，请写出A中该段氨基酸序列对应的碱基对序列___（已知相应氨基酸的对应密码子如下：亮氨酸-UUG，精氨酸 -CGC，丝氨酸-AGC，甘氨酸-GGA）。
(2)借助农杆菌将B导入叶盘细胞后，通过③④过程培养成草莓幼苗的技术工程是___，所依据的原理是___。
(3)过程①的具体过程如图乙所示，现有SalI、BamHI、HindIII三种限制酶均可切割质粒和A，应选用限制酶___进行切割，以保证它们定向连接。限制酶切断的是DNA分子中特定部位的两个脱氧核苷酸之间的键，下图表示正确的是___（表示限制酶作用部位）。   
(4)下列关于基因工程常用运载体——质粒的说法正确的是___。

A．质粒通常是来自细菌的环状DNA分子，使用质粒运载体是为了避免目的基因被分解

B．质粒运载体只能在与目的基因重组后进入细胞

C．质粒上具有多种限制酶切点，以便于切割后与目的基因连接,没有限制酶就无法使用质粒运载体

D．质粒运载体的复制和表达也遵循中心法则

【推荐3】脱水素是青稞植株中的一种抗冻物质，脱水素基因Dhn4的结构如图1所示，其中B链为模板链。研究人员利用图2所示的质粒，通过农杆菌转化法将该基因导入草莓中，成功培育出了抗冻草每植株。回答相关问题。

说明：Xho Ⅰ、Kpn Ⅰ、Pst Ⅰ为三种产生不同黏性末端的限制酶的识别位点：amp^r基因为氨苄青霉素抗性基因。
(1)利用PCR获取目的基因，提取青稞细胞的mRNA，经______过程获得PCR所需的模板。扩增Dhm4时应选择的引物组合是______，为使扩增后的产物按照正确方向与质粒连接，需在两个引物的______（填“5’”或“3’”）末端添加限制酶____________的识别序列。
(2)图2所示的质粒为农杆菌的______质粒，其中启动子的作用是_______________。
(3)将重组质粒导入用______处理过的农杆菌内，然后在含____________的培养基上筛选农杆菌，再将筛选后的农杆菌与草莓叶片共培养。1
(4)通过PCR技术检测草莓染色体上是否插入了Dhn4基因或____________；然后通过____________处理草莓，从个体水平鉴定转基因是否成功。

【推荐1】我国约在7000年前就开始种植水稻，现在水稻已经成为我国广泛种植的重要作物。提高水分利用效率对于旱作水稻的生产有重要意义。科学家从拟南芥中获取功能基因HARDY（HRD），并将其转入水稻中过量表达，提高了水稻的水分利用效率。回答下列问题：
（1）提取拟南芥总RNA，经________过程获得总cDNA，利用PCR技术选择性扩增HRD基因的cDNA。以上过程依次需要用到逆转录酶和________两种工具酶。
（2）将HRD的cDNA插入到Ti质粒的________上构建重组载体，利用农杆菌侵染水稻细胞并将HRD的cDNA整合到水稻细胞染色体DNA上。为了便于转基因植物的筛选，重组Ti质粒中必需包括________。
（3）在干旱条件下，野生型水稻（WT）和HRD增强表达的转基因水稻植株A、B（HRDA、HRDB）的根生物量（根系干重）及叶片蒸腾速率的测定结果如图所示。据图分析转基因水稻耐旱能力增强的原因包括________和________。

【推荐2】EV71是引起手足口病的肠道病毒，遗传物质为RNA。VP1蛋白是该病毒的主要表面抗原，通过基因工程可生产VP1蛋白，用于制备单克隆抗体。回答下列问题：
（1）用EV71感染动物并从动物细胞中提取总RNA，反转录为DNA后进行PCR，获取VP1基因。上述过程所用的酶有_____。
（2）VP1基因的模板链为3’-CCTAGG…VP1基因…TTCGAA-5’，转录时子链的延伸方向和PCR时子链的延伸方向同为5’→3’，根据模板链分析，用于PCR的两个引物的碱基序列为_____（引物为DNA单链，用5’、3’标注方向）。
（3）将VP1基因和质粒混合并用BamHⅠ和HindⅢ进行双酶切（如下图），双酶切的优点是_____。用酶切产物构建重组质粒并加入到含有大肠杆菌的培养液中，温育一段时间后，将菌液涂布在含新霉素和β-葡萄糖苷酸的培养基中。一段时间后，培养基上长出白色和蓝色两种菌落，其中含有重组质粒的菌落是____，判断依据是_______。

（4）工厂化生产VP1蛋白时，培养条件会影响大肠杆菌的VP1蛋白产量，这些培养条件有____（答出3条即可）

【推荐3】遗传毒性物质常存在于被化学物质污染的水体，可损伤生物的DNA，严重威胁人类健康。研究人员通过基因工程改造大肠杆菌，以期筛选对遗传毒性物质反应灵敏的工程菌株，用于水质检测。
（1）大肠杆菌DNA中存在可被遗传毒性物质激活的毒性响应启动子序列。将毒性响应启动子插入图1所示表达载体的P区，获得基因工程改造的大肠杆菌。当改造后的大肠杆菌遇到遗传毒性物质时，_______识别并与启动子结合，驱动噬菌体裂解基因（SRR）_____，表达产物可使大肠杆菌裂解。
（2）研究人员选取启动子sul准备与图1表达载体连接。图2显示了启动子sul内部存在的酶切位点，右向粗箭头表示转录方向

①据图1、2信息，克隆启动子sul时，在其A端和B端应分别添加限制酶______和__的酶切位点，从而确保启动子sul可与已被酶切的表达载体正确连接。
②将重组表达载体导入大肠杆菌，置于含有_______的选择培养基中进行筛选、鉴定及扩大培养，获得工程菌sul。
（3）研究人员陆续克隆了其他4种启动子（rec、imu、qnr、cda），分别连入表达载体，用同样的方法获得导入重组载体的工程菌，以筛选最灵敏的检测菌株。
①将5种工程菌和对照菌在LB培养基中培养一段时间后，检测菌体密度，结果如图3。图中结果显示_____，说明工程菌在自然生长状态下不会产生自裂解现象。

②上述菌株在LB培养基中生长2h时加入遗传毒性物质，检测结果如图4。据图可知，5种工程菌均启动了对遗传毒性物质的响应，应选择转入______启动子的菌株作为最优检测菌株。
（4）对上述工程菌进行工业化培养，通常采用______培养基，将工程菌置于可持续更新营养物质的培养罐中，这种营养物质的添加方式相比于传统的一次性添加营养物的优势是______。
（5）下列关于该工程菌的叙述，正确的包括______。
A．该工程菌可能用于检测土壤、蔬菜中的遗传毒性物质残留量
B．该毒性响应启动子序列广泛存在于自然界所有物种中
C．其表达产物可裂解大肠杆菌，检测后的剩余菌液可直接倒掉
D．为长期保存该工程菌，应加入一定浓度的甘油冻存于-20℃