【推荐3】为获得转R—GFP融合基因纯合小鼠，科研人员将红色荧光蛋白基因（RFP）插入含Gata3基因的载体中，然后导入小鼠受精卵，获得能正常表达两种蛋白质的杂合子雌、雄小鼠各一只。利用荧光蛋白活体成像系统进行检测，发现两者均为阳性RFP转基因小鼠。相关限制酶识别序列及限制酶识别位点如图甲所示，A、B、C、F、R为不同引物。

(1)在PCR反应溶液中常添加___，其作用是___。在利用PCR扩增RFP编码区序列的过程中，需要设计引物F和R，在两个引物的（填“3'”或“5'”）___端需分别插入___的限制酶识别序列，以使RFP基因能正确插入载体中。用于扩增RFP编码区序列的引物需满足的条件是___。
(2)在RFP基因的扩增及重组载体的构建过程中，需要的工具酶有___。
(3)将实验获得的两只雌、雄杂合子小鼠（P）进行杂交获得F₁若干，选取1～5五只小鼠，从中提取含Gata3基因的相关DNA片段，设计了引物A和C用于PCR扩增，扩增产物电泳结果如图乙所示，则___小鼠是Gata3—RFP基因纯合子小鼠；若用引物A和B进行PCR扩增，___（填“能”或“不能”）区分RFP转基因阳性小鼠中的杂合子和纯合子，原因是___。
(4)为制备大量单链DNA片段，研究人员常采用不对称PCR技术。其基本原理是采用不等量的一对引物，经若干次循环后，低浓度的引物（限制性引物）被消耗尽，以后的循环只产生高浓度引物（非限制性引物）的延伸产物，结果获得大量单链DNA（ss—DNA）。若反应体系中原有100个模板DNA，最初10个循环后限制性引物耗尽，再进行20个循环，理论上可制备ss—DNA___个（用科学计数法表示），在这30个循环中ss—DNA的产生量主要受___的影响。

【推荐3】为使水稻获得抗除草剂性状，科研人员将除草剂草甘膦抗性基因转入水稻植株，获得抗草甘膦转基因水稻。回答下列问题：

(1)将草甘膦抗性基因作为目的基因，与Ti质粒构建基因表达载体。目的基因表达载体进入细胞后，Ti质粒上的___区段可转移到油菜细胞的基因组中。为防止酶切产物自身环化，构建表达载体需用2种限制酶，选择的原则是___。
①Ti质粒内，每种限制酶只有一个切割位点
②草甘膦抗性基因编码蛋白质的序列中，每种限制酶只有一个切割位点
③酶切后，草甘膦抗性基因形成的两个黏性末端序列不相同
④酶切后，Ti质粒形成的两个黏性末端序列相同
A．①③   B．①④   C．②③   D．②④
(2)农杆菌经处理后，将其与基因表达载体混合，完成___后，在添加___的培养基中，经筛选1得到含目的基因表达载体的农杆菌。
(3)取某品种水稻的幼胚，先进行消毒处理，然后接种到培养基中，水稻幼胚细胞发生___形成愈伤组织。用含基因表达载体的农杆菌侵染该愈伤组织。
(4)利用PCR技术，可以鉴定被侵染的愈伤组织中是否含有草甘膦抗性基因。草甘膦抗性基因的部分序列如下：
5′—ATGGCT…………AGGAAC—3′
3′—TACCGA…………TCCTTG—5′
根据上述序列应选择引物___（填序号）进行PCR。
①引物：5′—TACCGA—3′   ②引物：5′—GTTCCT—3′
③引物：5′—AUGGCU—3′   ④引物：5′—ATGGCT—3′
(5)利用PCR技术扩增目的基因，其原理与细胞内DNA复制类似（如下图所示）。图中引物为单链DNA片段，它是子链合成延伸的基础。

①第___轮循环产物中开始出现两条脱氧核苷酸链等长的DNA片段，第5轮循环后，产物中两条脱氧核苷酸链等长的DNA片段有___个，若进行30轮循环，需引物A___个。
②在PCR反应体系中含有热稳定DNA聚合酶，下面的表达式不能正确反映DNA聚合酶的功能，这是因为___。
(6)除了鉴定愈伤组织中是否含有目的基因以外，还可以利用___方法来鉴定草甘膦抗性基因的表达产物，从而进行图中的筛选2，两次筛选后得到的转基因愈伤组织经过细胞的___过程，获得转基因水稻。

【推荐1】人类y基因启动子上游的调控序列中含有BCL11A 蛋白结合位点，该位点结合BCL11A 蛋白后，y基因的表达被抑制。通过改变该结合位点的序列，解除对y基因表达的抑制，可对某种地中海贫血症进行基因治疗。科研人员扩增了γ基因上游不同长度的片段，将这些片段分别插入表达载体中进行转化和荧光检测，以确定BCL11A 蛋白结合位点的具体位置。相关信息如图所示。

   

(1)为将扩增后的产物定向插入载体指导荧光蛋白基因表达，需在引物末端添加限制酶识别序列。据图可知，在F₁～F₇末端添加的序列所对应的限制酶是____，在R末端添加的序列所对应的限制酶是____。PCR缓冲体系中除图示条件外还要加入____（至少2个）。获得扩增产物后，应选择限制酶____切割载体。本实验中，从产物扩增到载体构建完成的整个过程共需要____种酶。
(2)将构建的载体导入____（选填“保留”、“除去”）BCL11A 基因的受体细胞，成功转化后，含F₁～F₆与R扩增产物的载体表达荧光蛋白，受体细胞有荧光，含F₇与R扩增产物的受体细胞无荧光。据图分析，构建成功的基因表达载体上荧光蛋白基因和BCLIIA基因转录时的模板链在____（选填“相同”、“不同”）的DNA链上，含F₇与R扩增产物的受体细胞无荧光的原因是____。
(3)向培养液中添加适量的____，含F₁～F₄与R扩增产物的受体细胞不再有荧光，而含F₅～F₆与R扩增产物的受体细胞仍有荧光。若γ基因上游调控序列上与引物序列所对应的位置不含有BCL11A 蛋白的结合位点序列，据此结果可推测，BCL11A 蛋白结合位点位于引物____在调控序列上所对应序列之间的区段上，理由是____。

【推荐1】已知某二倍体雌雄同株植物，基因g纯合会导致其雄性不育成为雌株。现将抗虫基因（B⁺）转入不抗虫的该种植物，获得转基因抗虫植株若干（假设转基因过程中，B⁺基因可插入到不同的染色体上，一条染色体上至多只插入一个B⁺基因，无抗虫基因用B^-表示）。将某一纯合抗虫雌株（甲）与另一纯合抗虫正常株（乙）杂交，F₁全为抗虫正常株。F₁自交产生的F₂表现型及数量：抗虫雌株193株、不抗虫雌株13株、抗虫正常株591株、不抗虫正常株39株。
回答下列问题：
(1)B⁺基因与B^-基因（是/不是）_________等位基因，甲与乙杂交得到的F₁可产生___________种基因型配子。F₂中出现抗虫与不抗虫的表现型及数量的原因是__________。
(2)取F₂中不抗虫正常株与甲进行杂交，子代（F₃）的表现型及比例为_________________，子代（F₃）随机授粉，F₄中抗虫雌株所占比例为_________________。
(3)为确定上述F₃中抗虫正常株的基因型，设计测交实验进行验证，用遗传图解表示该过程。
(4)在实际生产中，获得的转基因抗虫植株种植多代后，其抗虫能力呈下降趋势，其可能的原因是害虫种群_______________频率上升。为减缓转基因植株抗虫能力下降的趋势，可采用的种植措施是_______________。

【推荐3】7S球蛋白是大豆最主要的过敏原蛋白，三种大豆脂氧酶Lox-1，2，3是大豆产生腥臭味的原因。大豆食品深加工过程中需要去除7S球蛋白和三种脂氧酶。科研人员为获得7S球蛋白与三种脂氧酶同时缺失的大豆新品种，将7S球蛋白缺失的大豆植株与脂氧酶完全缺失的植株杂交，获得F₁种子。F₁植株自交得到F₂种子。对F₁种子和F₂种子的7S球蛋白和脂氧酶进行蛋白质电泳检测，不同表现型的电泳条带示意如下图。
   
注：图中黑色条带为抗原一抗体杂交带，表示相应蛋白质的存在。M泳道条带为相应标准蛋白所在位置，F₁种子泳道的条带待填写。
根据电泳检测的结果，对F₂种子表现型进行分类统计如下表。

F2种子表现型		粒数
7S球蛋白	野生型	124
	7S球蛋白缺失型	377
脂氧酶Lox-1，2，3	野生型	282
	①	94
	②	94
	Lox-1，2，3全缺失型	31

回答下列问题：
(1)7S球蛋白缺失型属于_____（填“显性”或“隐性”）性状。
(2)表中①②的表现型分别是_____、_____。脂氧酶 Lox—1，2，3分别由三对等位基因控制，在脂氧酶是否缺失的性状上，F₂种子表现型只有四种，原因是_____。
(3)在答题卡对应的图中画出F1种子表现型的电泳条带_____。
(4)已知Lox基因和7S球蛋白基因独立遗传。图中第_____泳道的种子表现型为7S球蛋白与三种脂氧酶同时缺失型，这些种子在F₂中的比例是_____。利用这些种子选择并获得稳定遗传种子的方法是_____。
(5)为提高大豆品质，利用基因工程方法提出一个消除野生型大豆7S球蛋白过敏原的设想。_____