【推荐1】调查显示，病毒性传染病严重危害山羊健康，且多种病原体混合感染的情况较普遍。干扰素是对抗病毒感染中发挥重要作用的蛋白质，因此通过疫苗接种控制传染病暴发流行的同时，积极研究广谱、高效、安全的干扰素对山羊病毒性传染病的防治有着十分现实的意义，其基本流程如下。
(1)获取干扰素基因：从下列①~⑧项中选择合适选项填入空格处，使方案可行。
①肝细胞的总RNA；②单核细胞的所有DNA；③引物；④RNA酶抑制剂；
⑤逆转录酶；⑥dNTP；⑦TaqDNA聚合酶；⑧DNA连接酶
设计方案：获取___________作为模板，同时还需要的实验材料或试剂有___________。
(2)构建重组表达载体：将获得的含目的基因的DNA片段（不含限制酶的识别序列）进行PCR，利用的引物序列如下：
引物1：5'-CATGCCATGGCAGGCTGCCACCTGCCTCACATCCA-3'；
引物2：5'-CGGTACCTTCAGTCCTTCCTCTGGATCT-3'。
经大量扩增后，用限制酶NcoI（5'-C^↓CATGG-3'）对获得的含目的基因的DNA片段进行酶切，目的基因的DNA片段上有___________个黏性末端，理由是___________。作为表达载体的质粒上，除了标记基因和多个限制酶的识别序列外，还需要有___________（写2种即可）。质粒与目的基因用合适的限制酶处理后进行拼接。
(3)大肠杆菌的转化和表达：将大肠杆菌放于低温、低浓度的___________溶液中，成为感受态细胞，再将大肠杆菌与重组DNA分子混合，最后进行短暂的___________处理，使外源DNA转入大肠杆菌，然后将重组菌在适宜条件下，诱导其表达干扰素，最后进行产物分离保存。
(4)干扰素的抗病毒活性检测：先将一种山羊的肾细胞接种于多孔板，培养至单层贴壁细胞，再将其随机均分为6组（A~F），其中C~F组加入不同浓度的干扰素，A~F组置于适宜条件下培养24小时后，___________组加入病毒，其中以___________组为阳性对照，每隔12小时观察细胞病变情况。结果是A组细胞大小形态正常，贴壁良好，B组细胞逐渐出现坏死脱落，C~F组的细胞不同程度的少量坏死脱落，而且___________，由此可见，干扰素能以浓度依赖的方式显著抑制病毒诱导的细胞病变。

【推荐2】CRM1是一种核转运蛋白，由CRM1基因控制产生，转运含有NES序列的货物蛋白。科学研究发现，肿瘤细胞中CRM1基因过度表达，含有NES序列的肿瘤抑制因子被过量地转运至细胞质，使得它们无法在细胞核内发挥正常功能，会促进肿瘤的发生及生长。为探究CRM1的运输机制及肿瘤的治疗，科学家进行了相关研究。请回答下列问题：
(1)研究人员利用PCR技术大量扩增CRM1基因，需要根据______设计两种引物，引物的作用是_______。
(2)CRM1C528S是CRM1突变体，不具有运输能力，GST-NES为某种肿瘤抑制因子，RanGTP蛋白可能与货物蛋白的转运有关，研究人员利用上述物质设计实验进行跨膜模拟，结果发现只有③组实现了对GST-NES的跨膜转运，据此可推断________。
   
(3)科学家利用计算机成功筛选出了与货物蛋白结构相似的小分子KPT，并将其制备成抑制肿瘤细胞药物，推测KPT的作用机理是________。请设计实验验证上述推论，写出实验思路和预期结果。（材料：肿瘤小鼠模型若干只、正常小鼠模型若干只、小分子KPT。注：药物处理方法与肿瘤的具体检测方法不做要求）实验思路：__________。预期结果：__________。

【推荐1】学习以下材料，回答（1）~（5）题。
碳同化途径的工程化改造
烟草是转基因研究的模式生物。烟草的光合速率受RuBP羧化-氧化酶（R酶）催化效率和胞内CO₂浓度服制。R酶由大亚基（RL）和小亚基（RS）组成，RL蛋白和RS蛋白分别由叶绿体rl基因和细胞核rs基因编码，大小亚基在叶绿体中组装形成R酶。R酶既能催化C₅羧化形成C₃，也能催化C₅氧化为C₂，进入线粒体分解为CO₂，R酶催化的反应类型取决于其周围的CO₂和O₂浓度。玉米等植物已经进化出CCM机制，叶绿体中R酶周围积累CO₂以增强羧化和抑制氧化。研究人员尝试在烟草中替换R酶，并构建CCM途径。
H⁺菌是一种自养型细菌。H⁺菌的羧基体由多种蛋白构成，蛋白外壳包裹着R酶和碳酸酐酶（CA）。H菌的R酶由大亚基（CL）和小亚基（CS）组成，催化效率高，CA可维持CO₂和HCO₃^-的平衡。科研人员构建了含有H ⁺菌羧基体基因的表达载体，将其导入烟草叶绿体中，通过同源重组的方式将原有的rl基因替换。通过透射显微镜观察到转基因烟草叶绿体中存在完整的羧基体。提取烟草叶绿体总蛋白，电泳结果如图1。
进一步检测转基因烟草的光合速率远低于野生型。为寻找原因，科研人员检测了转基因烟草的离体羧基体的羧化效率和CO₂亲和力，发现二者均与H菌无显著差异。基于上述研究，科研人员推测需要构建有效的CO₂浓缩途径，进一步完善烟草CCM机制，为提高农作物产量奠定基础。

(1)基于文中信息，解释当氧气浓度高时，烟草光合速率低的原因___。
(2)请结合文中信息，完善羧基体中的反应式，写出酶①和酶②的名称:___、___。

(3)结合文中信息，分析图1结果，下列推测错误的是___。

A．转基因烟草叶绿体中rl基因全部被表达载体上的基因替换

B．导入含羧基体基因的表达载体可导致叶绿体中RS蛋白含量减少

C．RL和CL蛋白大小相同，可使用特异性抗体区分

D．转基因烟草羧基体中R酶的大小亚基分别是CL和CS

(4)CA还可催化CO₂和水形成H₂CO₃产生H⁺和HCO₃^-，科研人员进行羧基体CA活性的测定实验：在反应体系中加入缓冲液（pH=8）并通入CO_2，两组实验分别加入羧基体、CA，并设置空白对照，测定pH值，计算各组pH值变化速率。实验结果是___，证明羧基体中CA活性不是限制转基因烟草光合速率的原因。
(5)二氧化碳不易通过扩散作用穿过羧基体蛋白外壳。对图2中转基因烟草的叶绿体进行改造，实现提升羧基体中CO₂浓度的目的。请写出改造方案___。

【推荐2】蛋白酶抑制剂基因转化是作物抗虫育种的新途径。某研究团队将胰蛋白酶抑制剂（NaPI）和胰凝乳蛋白酶抑制剂（StPinlA）的基因单独或共同转化棉花，获得了转基因植株。回答下列问题：
(1)蛋白酶抑制剂的抗虫机制是________。
(2)________是实施基因工程的核心。
(3)利用农杆菌转化法时，必须将目的基因插入到质粒的________上，此方法的不足之处是________。
(4)为检测目的基因在受体细胞基因组中的整合及其转录和翻译，可采用的检测技术有________（写出两点即可）。
(5)确认抗虫基因在受体细胞中稳定表达后，还需进一步做抗虫的________以鉴定其抗性程度。下图为三种不同遗传操作产生的转基因棉花抗虫实验结果，据结果分析________（填“NaPI”或“StPinlA”或“NaPI＋StPinlA”）转基因棉花的抗虫效果最佳，其原因是________。

(6)基因突变可产生新的等位基因，在自然选择的作用下，昆虫种群的基因频率会发生________。导致昆虫朝着一定的方向不断进化。提此推测，胰蛋白酶抑制剂转基因作物长期选择后，某些害虫具有了抗胰蛋白酶抑制剂的能力，其分子机制可能是________（写出两点即可）。

【推荐3】红景天中的HMA3基因能编码Cd转运蛋白，科研人员将红景天中的HMA3基因转入栾树，以实现栾树的定向改良，使其增强对Cd的富集能力，从而更有效治理Cd污染。实验的主要流程如下，其中Hyg^r为潮霉素抗性基因，Kan^r为卡拉霉素抗性基因，请回答：

(1)重组质粒的构建、扩增、保存
① 从红景天细胞中提取总RNA为模板，进行RTPCR。其中PCR的反应条件：98 ℃10 s，55 ℃30 s，72 ℃1 min，35个循环，其中55 ℃30 s过程称为________。若模板双链cDNA的数量为a个，经过35个循环需要消耗引物的数量是________。
② 为构建Cd转运蛋白与绿色荧光蛋白(GFP)的融合蛋白，需确保目的基因与质粒正确连接。构建重组质粒时用________酶切PCR纯化产物(已添加相应酶切位点)及Ti质粒，然后通过DNA连接酶进行连接制备重组质粒，并依次转入大肠杆菌和农杆菌。
(2)栾树愈伤组织的诱导
切割无菌苗将其茎段插入愈伤组织培养基，培养基应添加__________________(填植物激素的名称)，放入培养箱，经过21 d的黑暗诱导，茎段经________形成愈伤组织。
(3)农杆菌介导转化体系的建立
将农杆菌单克隆菌株对栾树愈伤组织进行侵染转化，并用添加________的培养基筛选出转化成功的愈伤组织，将愈伤组织继续培养成完整植株。待幼苗长出较为发达的根系后进行移栽炼苗，炼苗的目的是_________。
(4)原生质体制备及目的基因的检测和鉴定
①取4 g筛选后愈伤组织，用镊子轻轻捣碎，冲洗。用滤网过滤溶液，将愈伤组织转移至含__________的酶解液中处理一段时间获得原生质体。
②在激光共聚焦下观测到细胞膜发出绿色荧光。在本研究中选择GFP与Cd转运蛋白构建融合蛋白的目的是______________。若要从个体生物学水平上进行目的基因的检测与鉴定，则可以检测比较转基因栾树与野生型栾树________。

【推荐1】崧蓝是常用中药板蓝根和大青叶的主要基原植物，有清热解毒、凉血利咽的功效，可防治病毒性感染。在各地广为栽培，但常因除草剂的侵害，造成质量和产量下降。链霉菌中的bar基因序列未知，其编码的乙酰转移酶能使除草剂的活性成分草丁膦失活，拟利用基因工程技术将bar基因导入崧蓝中，以获得抗除草剂的崧蓝植株。回答下列问题；
(1)为获取bar基因，需将链霉菌基因组DNA借助载体、微生物等所形成的____________中的所有基因进行表达，并用乙酰转移酶为抗原所制备出的灵敏度高的__________来检测表达产物。在该制备过程中，需从已免疫的小鼠___________（填一器官名称）中提取B淋巴细胞，并与骨髓瘤细胞共同培养，过程中需采用__________等方法诱导其融合（答出⒉点即可）。
(2)如图1和图2为各种限制酶的识别序列在质粒、含目的基因的DNA片段上的分布情况。在构建表达载体时，为防止DNA片段反向拼接和自身环化，需用限制酶____________（填BamHI、HindⅢ、EcoRI、Smal中的一种或几种）同时处理Ti质粒和含目的基因的DNA片段，并用__________进行连接。为提高形成重组DNA的成功率，除上述处理外，还可以采用改变温度和PH等环境条件、提高DNA连接酶的浓度、提高目的基因的浓度、____________（写出两种方法即可）

(3)将bar基因导入受体细胞。转化农杆菌时应添加____________以利于重组质粒进入农杆菌细胞；利用含重组质粒的农杆菌侵染崧蓝的叶片时，Ti质粒上的____________可以携带bar基因整合到崧蓝叶片细胞的染色体DNA上；将叶片转移到固体培养基上培养，培养基中加入抗生素的作用是____________，再转移到含有___________培养基上，筛选出已经转化的崧蓝细胞。
(4)取被侵染的崧蓝叶片组织接种到MS培养基中培养，经过___________或体细胞胚发生途径形成转基因植株，该过程中利用了____________原理。为检验bar基因是否表达，在分子水平上可用___________来检测其转录产物。