某科研人员为增加油菜种子含油量,将酶D基因(图甲左)与叶绿体转运肽基因(图甲右)连接构建融合基因,再把融合基因导入Ti质粒(图乙)形成基因表达载体,将基因表达载体导入农杆菌,应用农杆菌转化法(图丙),最终获得含油量较高的转基因油菜品种。(1)D基因和转运肽基因构建融合基因需要的限制酶是____ 。融合基因与Ti质粒构建表达载体需要的限制酶是____ 。
(2)为了获得含有基因表达载体的农杆菌,在农杆菌培养基中需加入____ (填“潮霉素”“卡那霉素”或“潮霉素或卡那霉素”)进行筛选,将筛选出的农杆菌浸泡过的油菜愈伤组织,进行植物组织培养,从油菜外植体培养成试管苗需要用____ 种培养基。
(3)为研究转化过程中酶D基因插入染色体位点情况,研究者筛选出A、B、C 三类转基因植株,成熟后自花传粉、单株收种,将其种子播种于含潮霉素的选择培养基中(图丙),种子萌发率依次为3/4、15/16和63/64,请在下图细胞中画出三类转基因植株酶 D 基因(用D表示)在染色体的位置____ 。(4)为探究酶 D基因在转化植株中的遗传是否遵循基因自由组合定律,可选择B 类植株与____ 之间异花传粉,将所结种子播种于含潮霉素的选择培养基中,若萌发率为____ ,表明酶 D基因在转化植株中遵循基因自由组合定律。
(2)为了获得含有基因表达载体的农杆菌,在农杆菌培养基中需加入
(3)为研究转化过程中酶D基因插入染色体位点情况,研究者筛选出A、B、C 三类转基因植株,成熟后自花传粉、单株收种,将其种子播种于含潮霉素的选择培养基中(图丙),种子萌发率依次为3/4、15/16和63/64,请在下图细胞中画出三类转基因植株酶 D 基因(用D表示)在染色体的位置
更新时间:2024-04-03 12:51:41
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【推荐1】科研工作者将苏云金芽孢杆菌的Bt抗虫基因导入普通品系棉花,获得了三个纯合抗虫品系甲、乙和丙。将三个抗虫品系与普通品系棉花杂交,F1均抗虫,且F2抗虫:不抗虫均为3:1。
(1)采用农杆菌转化法导入Bt基因,则需先将Bt基因插入农杆菌Ti质粒的__________ 上。以上实验结果表明,在甲、乙,丙三个品系中Bt基因均已整合到棉花的__________ 上,其遗传遵循孟德尔__________ 定律。
(2)将三个品系相互杂交,得到的结果如下:
甲×乙→F1抗虫→F2抗虫:不抗虫=15:1
乙×丙→F1抗虫→F2抗虫:不抗虫=15:1
甲×丙→F1抗虫→F2抗虫:不抗虫=99:1
判断甲、乙、两三个品系中Bt基因所插入染色体的位置关系是____________________ ,
将甲乙杂交的F1与乙丙杂交的F1杂交,后代抗虫:不抗虫=__________
(3)通过基因工程另获一对纯合抗虫基因的品系丁,若要通过杂交实验来确定丁品系中的Bt基因插入了新的染色体上,还是和甲、乙、丙位于同一条染色体上,请写出
①该实验的思路:______________________ 。
②预期实验结果和结论:____________________________ 。
(1)采用农杆菌转化法导入Bt基因,则需先将Bt基因插入农杆菌Ti质粒的
(2)将三个品系相互杂交,得到的结果如下:
甲×乙→F1抗虫→F2抗虫:不抗虫=15:1
乙×丙→F1抗虫→F2抗虫:不抗虫=15:1
甲×丙→F1抗虫→F2抗虫:不抗虫=99:1
判断甲、乙、两三个品系中Bt基因所插入染色体的位置关系是
将甲乙杂交的F1与乙丙杂交的F1杂交,后代抗虫:不抗虫=
(3)通过基因工程另获一对纯合抗虫基因的品系丁,若要通过杂交实验来确定丁品系中的Bt基因插入了新的染色体上,还是和甲、乙、丙位于同一条染色体上,请写出
①该实验的思路:
②预期实验结果和结论:
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解题方法
【推荐2】某昆虫(2n=8)的性别决定方式为XY型。该昆虫的野生型翅是无色的,科研人员利用基因工程技术获得了一只雌性个体(甲)和一只雄性个体(乙),昆虫甲的一条2号常染色体上插入了一个外源基因A,昆虫乙的“某条染色体”上插入了一个红色荧光蛋白基因,昆虫甲和乙的翅均为无色。昆虫甲与昆虫乙交配,所得F1雌雄个体中红色荧光翅与无色翅的比例均为1:3。外源基因的插入对该昆虫原有基因的表达均无影响,不考虑突变和致死等其他情况,回答下列问题。
(1)该昆虫的一个细胞中可能含有___________ 染色体组。
(2)昆虫乙的“某条染色体”既不是X染色体,也不是Y染色体,理由是___________
(3)昆虫甲和乙的翅都是无色的,但昆虫甲与昆虫乙交配,所得F1中1/4的个体表现为红色荧光翅,推测原因很可能是___________ 。为了探究昆虫乙的“某条染色体”是否是2号常染色体,可以让F1红色荧光翅雌雄个体间交配,然后统计F2的表型及其比例。若昆虫乙的“某条染色体”不是2号常染色体,则F2的表型及其比例为___________ ;若昆虫乙的“某条染色体”是2号常染色体,则F2的表型及其比例为___________ 。
(4)研究人员在做该昆虫实验时发现1只由于单基因突变从而表现突变性状的雌虫(简称突变型),让这只雌虫与1只野生型的雄虫进行交配(Y染色体上无相关基因)F1中野生型与突变型之比为2:1,且雌雄个体之比也为2:1,请你解释这个现象,并说明突变基因的类型与亲代的基因型:________________ (相关基因用R、r表)
(1)该昆虫的一个细胞中可能含有
(2)昆虫乙的“某条染色体”既不是X染色体,也不是Y染色体,理由是
(3)昆虫甲和乙的翅都是无色的,但昆虫甲与昆虫乙交配,所得F1中1/4的个体表现为红色荧光翅,推测原因很可能是
(4)研究人员在做该昆虫实验时发现1只由于单基因突变从而表现突变性状的雌虫(简称突变型),让这只雌虫与1只野生型的雄虫进行交配(Y染色体上无相关基因)F1中野生型与突变型之比为2:1,且雌雄个体之比也为2:1,请你解释这个现象,并说明突变基因的类型与亲代的基因型:
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【推荐3】果蝇是遗传实验的好材料,某实验室中保存有黑体残翅、焦刚毛两个突变品系,其野生型分别灰体长翅、直刚毛,它们均能纯种传代,且两对基因均位于常染色体上。实验室中还保留有杂合裂翅果蝇(Dd),能真实遗传,即后代全为杂合裂翅果蝇。回答下列问题:
(1)一只焦刚毛雄蝇与野生型(直刚毛)雌蝇杂交,子一代全为直刚毛,子二代直刚毛:焦刚毛=3:1.为确定刚毛控制基因位于常染色体上还是X染色体上,可进行另一组实验,杂交方案为_____ 。也可不进行新实验,但需要补充_____ (数据)。
(2)将一对灰体长翅、黑体残翅果蝇杂交,子一代全为灰体长翅果蝇。用子一代雌蝇进行测交,子二代为灰体长翅:黑体残翅:灰体残翅:黑体长翅=42:42:8:8;用子一代雄蝇进行测交,后代为灰体长翅:黑体残翅=1:1.推测雌蝇进行减数分裂的卵原细胞中,能发生互换的约占_____ %。若将子一代交配,子二代中灰体长翅:黑体残翅:灰体残翅:黑体长翅的分离比为_____ 。
(3)为解释杂合裂翅果蝇真实遗传的原因,有人提出如下解释模型:
①D基因表现为一因多效:除决定裂翅外,还具有显性纯合致死效应。
②基因M、m不决定性状,M对m完全显性,基因型为_____ 时具有致死作用。
③上述两对基因和染色体的位置关系是_____ 。
(4)实验发现某对裂翅果蝇杂交后,子一代果蝇裂翅:直翅=2:1.假定出现该比例的原因是某个亲本的基因组成改变了一个基因导致的,请利用(3)中解释模型的原理,判断该果蝇的突变基因及突变类型为_____ ,并推测子一代果蝇自由交配后,子二代果蝇中D的基因频率为_____ 。
(1)一只焦刚毛雄蝇与野生型(直刚毛)雌蝇杂交,子一代全为直刚毛,子二代直刚毛:焦刚毛=3:1.为确定刚毛控制基因位于常染色体上还是X染色体上,可进行另一组实验,杂交方案为
(2)将一对灰体长翅、黑体残翅果蝇杂交,子一代全为灰体长翅果蝇。用子一代雌蝇进行测交,子二代为灰体长翅:黑体残翅:灰体残翅:黑体长翅=42:42:8:8;用子一代雄蝇进行测交,后代为灰体长翅:黑体残翅=1:1.推测雌蝇进行减数分裂的卵原细胞中,能发生互换的约占
(3)为解释杂合裂翅果蝇真实遗传的原因,有人提出如下解释模型:
①D基因表现为一因多效:除决定裂翅外,还具有显性纯合致死效应。
②基因M、m不决定性状,M对m完全显性,基因型为
③上述两对基因和染色体的位置关系是
(4)实验发现某对裂翅果蝇杂交后,子一代果蝇裂翅:直翅=2:1.假定出现该比例的原因是某个亲本的基因组成改变了一个基因导致的,请利用(3)中解释模型的原理,判断该果蝇的突变基因及突变类型为
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【推荐1】实验室中保存有两种突变黑腹果蝇:裂翅型(基因A,位置未知);黑檀体型(基因d,位于3号染色体上);和野生型(表型为灰体、直翅)三个品系。 突变型除突变性状外,其余性状均与野生型相同。三个品系中除裂翅型外,其它品系均为纯合子。某实验小组利用上述果蝇进行的杂交实验见下表。
(1)实验1的数据表明裂翅基因 A 位于____ 染色体上。
(2)实验2中 F₂果蝇中没有出现____ (表型)果蝇,说明裂翅基因A____ (位于/不位于)3号染色体上。
(3)裂翅品系果蝇(AaBb)在自我繁殖时不产生纯合子,但产生的子代与亲代的基因型都相同。为解释这种现象,有人提出如下条件:____ (基因型)致死。
②B/b基因不决定性状,但 bb纯合致死。
③裂翅品系个体基因 A/a 与 B/b的位置关系为____ (在图中画出B/b基因的位置)。
(4)若前问条件均符合,用X射线照射裂翅果蝇的受精卵,发生变异后的受精卵发育成裂翅雌蝇。假定X射线照射导致受精卵细胞中 B/b基因在同源染色体上的位置发生了位置的交换,将该雌蝇与正常裂翅雄蝇(AaBB)交配,则后代翅型的表型及比例为____ 。
实验 | 亲本 | F1 | F2 |
1 | 正交:裂翅型()×野生型() 反交:裂翅型()×野生型() | 裂翅():裂翅():野生型():野生型()=1:1:1:1 | F1雌雄裂翅果蝇交配,F2:裂翅:野生型=2:1 |
2 | 裂翅型×黑檀体型 | 裂翅: 野生型=1: 1 | F1裂翅雌果蝇与黑檀体雄果蝇配,F2:裂翅:黑檀体=1:1 |
(1)实验1的数据表明裂翅基因 A 位于
(2)实验2中 F₂果蝇中没有出现
(3)裂翅品系果蝇(AaBb)在自我繁殖时不产生纯合子,但产生的子代与亲代的基因型都相同。为解释这种现象,有人提出如下条件:
①A/a基因除了决定裂翅/直翅外,且
②B/b基因不决定性状,但 bb纯合致死。
③裂翅品系个体基因 A/a 与 B/b的位置关系为
(4)若前问条件均符合,用X射线照射裂翅果蝇的受精卵,发生变异后的受精卵发育成裂翅雌蝇。假定X射线照射导致受精卵细胞中 B/b基因在同源染色体上的位置发生了位置的交换,将该雌蝇与正常裂翅雄蝇(AaBB)交配,则后代翅型的表型及比例为
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【推荐2】转基因技术的研发是加快农业现代化的重要途径,但转基因食品的安全性备受关注。研究者将水稻抗虫基因(crylC)和双T-DNA载体连接(图示连接后双T-DNA部分结构),利用其中的“Cre/LoxP”系统培育了安全可食用的转基因水稻。在“Cre/LoxP”系统中,Cre基因编码的Cre酶可特异性识别同一DNA两个同向的loxP序列并将两个loxP间的序列删除。图:P—启动子(P1为胚乳特异表达启动子;P2为绿色组织特异性表达启动子)
回答下列问题:
(1)Cre酶与基因工程中的______ (工具酶)作用类似。
(2)载体中,T-DNA的作用是转移到被侵染的细胞后__________________ ,hpt基因(潮霉素抗性基因)和gus基因(表达产物使无色底物显蓝色)有助于双T-DNA共转化植株的筛选,起到基因表达载体中____________ (填结构)的作用。
(3)筛选得到双T-DNA共转化成功的植株T0中,hpt基因对植物和环境具有潜在的危害,需设法将其删除。先从T0植株中筛选T-DNA1和T-DNA2都是单拷贝(单个)插入的植株GH-1、GH-2和GH-3,自交后得到T1代植株进行潮霉素抗性检测,选择抗性检测为阴性植株的叶片的gus基因进行PCR检测,产物的电泳结果如下图a。(不考虑减数分裂时发生互换)①T0代中______ (填编号)是T-DNA1和T-DNA2以连锁形式在单一位点插入植株。
②在答题卡对应的图b中画出植株GH-2的T-DNA1和T-DNA2在染色体上的位置_____ (注:用圆点·表示T-DNA1和T-DNA2在染色体上的位置)
③GH-1的T0代自交的后代T1植株中,具有抗虫特性但不含hpt基因的植株的比例为______ 。这些植株自交后筛选即可获得稳定遗传的种子Tx。
(4)水稻种子主要包括胚和胚乳,其中胚乳被加工成精米食用。该“Cre/LoxP”系统,实现了______ ,培育了安全可食用的转基因水稻。Tx种子播种后获得的叶片______ (填“具有”或“不具有”)抗虫的性状。
回答下列问题:
(1)Cre酶与基因工程中的
(2)载体中,T-DNA的作用是转移到被侵染的细胞后
(3)筛选得到双T-DNA共转化成功的植株T0中,hpt基因对植物和环境具有潜在的危害,需设法将其删除。先从T0植株中筛选T-DNA1和T-DNA2都是单拷贝(单个)插入的植株GH-1、GH-2和GH-3,自交后得到T1代植株进行潮霉素抗性检测,选择抗性检测为阴性植株的叶片的gus基因进行PCR检测,产物的电泳结果如下图a。(不考虑减数分裂时发生互换)①T0代中
②在答题卡对应的图b中画出植株GH-2的T-DNA1和T-DNA2在染色体上的位置
③GH-1的T0代自交的后代T1植株中,具有抗虫特性但不含hpt基因的植株的比例为
(4)水稻种子主要包括胚和胚乳,其中胚乳被加工成精米食用。该“Cre/LoxP”系统,实现了
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【推荐3】玉米是全球重要的粮食作物,有众多品系。现将籽粒凹陷糊粉层有色和籽粒饱满糊粉层无色的两个纯合玉米品系杂交,F1全为籽粒饱满糊粉层有色,F1相互授粉,F2表现型及比例为籽粒饱满糊粉层有色:籽粒饱满糊粉层无色:籽粒凹陷糊粉层有色:籽粒凹陷糊粉层无色=a:b:c:d(a/b/c/d可能是包括0在内的任意值,且无遗传致死现象)。回答下列问题:
(1)玉米亲本杂交后应收集并统计______________ (填“父本”“母本”或“父本和母本”)上所结籽粒。籽粒饱满和籽粒凹陷这对相对性状中,显性性状是_____________ 。F2的表现型比例(a:b:c:d)可能有多种情况:若____________ (用a/b/c/d构成的数学公式作答)说明籽粒形状(饱满或凹陷)由一对等位基因控制,遵循基因分离定律。
(2)若上述两对性状的遗传分别都符合分离定律,请预测F2的表现型比例并指出出现该比例应满足的前提条件(假设减数分裂时不发生交叉互换也没有新的基因产生):
①若a:b:c:d=9:3:3:1,应满足的前提条件是:___________________________________ ;
②若a:b:c:d=___________________ ,则不满足上述①中的前提条件。
(3)可通过基因工程方法获得抗除草剂玉米,若某转基因玉米的二条非同源染色体上分别成功整合了一个抗除草剂基因(T),该转基因玉米自交,理论上子代中抗除草剂个体(至少含有一个T基因)所占比例为______ 。
(1)玉米亲本杂交后应收集并统计
(2)若上述两对性状的遗传分别都符合分离定律,请预测F2的表现型比例并指出出现该比例应满足的前提条件(假设减数分裂时不发生交叉互换也没有新的基因产生):
①若a:b:c:d=9:3:3:1,应满足的前提条件是:
②若a:b:c:d=
(3)可通过基因工程方法获得抗除草剂玉米,若某转基因玉米的二条非同源染色体上分别成功整合了一个抗除草剂基因(T),该转基因玉米自交,理论上子代中抗除草剂个体(至少含有一个T基因)所占比例为
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【推荐1】为增加油菜种子的含油量,研究人员从陆地棉中获取酶D基因,从拟南芥基因文库中获取转运肽基因:
(1)要获得酶D基因和转运肽基因A、D端相连的融合基因,首先需要用________ 酶和________ 酶处理可得到。
(2)将上述融合基因插入如图所示_________ 的T-DNA中,构建基因表达载体并导入农杆菌中,构建基因表达载体的目的是_______________________________________ 。
(3)携带外源DNA片段的质粒进入受体细胞后,在细胞中进行___________ ,或_________ ,随染色体DNA进行同步复制。
(4)要检测转基因油菜中是否插入了融合基因,可以用_____________________ 作探针,使探针与_______________ 杂交,如果显示出__________ ,就说明融合基因已插入成功。
(1)要获得酶D基因和转运肽基因A、D端相连的融合基因,首先需要用
(2)将上述融合基因插入如图所示
(3)携带外源DNA片段的质粒进入受体细胞后,在细胞中进行
(4)要检测转基因油菜中是否插入了融合基因,可以用
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【推荐2】我国约在7000年前就开始种植水稻,现在水稻已经成为我国广泛种植的重要作物。提高水分利用效率对于旱作水稻的生产有重要意义。科学家从拟南芥中获取功能基因HARDY(HRD),并将其转入水稻中过量表达,提高了水稻的水分利用效率。回答下列问题:
(1)科学家在获取拟南芥HRD基因过程中,采用了增强子作为筛选工具。增强子是一段能增强与其相连基因转录的DNA序列,将增强子插入到基因组中可得到若干个突变株系。增强子插入到基因外部,可获得基因_____________ 突变株;增强子插入到基因内部,可获得基因______________ 突变株。
(2)提取拟南芥总RNA,经_____________ 过程获得总cDNA,利用PCR技术选择性扩增HRD基因的cDNA。以上过程依次需要用到____________ 和____________ 两种工具酶。
(3)将HRD的cDNA插入到Ti质粒的___ 上构建重组载体,利用农杆菌侵染水稻细胞并将HRD的cDNA整合到水稻细胞染色体上。为了便于转基因植物的筛选,重组Ti质粒中必需包括____________ 。
(4)在干旱条件下,野生型(WT)和HRD增强表达的转基因水稻植株A、B(HRDA、HRDB)的根生物量(根系干重)及叶片蒸腾速率的测定结果如图所示。据图分析转基因水稻耐旱能力增强的原因包括_____________ 和____________ 。
(1)科学家在获取拟南芥HRD基因过程中,采用了增强子作为筛选工具。增强子是一段能增强与其相连基因转录的DNA序列,将增强子插入到基因组中可得到若干个突变株系。增强子插入到基因外部,可获得基因
(2)提取拟南芥总RNA,经
(3)将HRD的cDNA插入到Ti质粒的
(4)在干旱条件下,野生型(WT)和HRD增强表达的转基因水稻植株A、B(HRDA、HRDB)的根生物量(根系干重)及叶片蒸腾速率的测定结果如图所示。据图分析转基因水稻耐旱能力增强的原因包括
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【推荐3】疫苗接种是当前新冠肺炎疫情防控工作的一项重要举措,我国科学家研发了多种新冠疫苗,其中重组腺病毒疫苗研发策略是:将新冠病毒的S蛋白基因整合到腺病毒DNA中,形成表达S蛋白的重组腺病毒,注射到健康人体内,腺病毒可侵染人体细胞,达到预防新冠病毒感染的效果。回答下列问题:
(1)与直接将S蛋白注射到体内作为疫苗相比,重组腺病毒疫苗的优点是可以引起人体产生_____________ 免疫,更有效清除病毒。
(2)为了构建重组腺病毒DNA,需要将S蛋白基因插入腺病毒DNA中,由于腺病毒DNA分子较大,传统的限制性核酸内切酶和DNA连接酶处理效率较低,所以采取如图1所示方法获得重组腺病毒DNA。将质粒1和质粒2共同导入受体细胞中,据图推测,最终重组线性DNA分子的筛选过程中,应在培养基中加入_____________ (用字母表示即可)。
(3)生产疫苗的过程是将上述重组线性DNA分子(不编码病毒复制必需的E1蛋白)导入到293细胞系(该细胞系可表达人体细胞没有的E1蛋白),最终包装成完整的腺病毒。重组DNA分子中缺失E1基因的意义是______________ 。
(4)为了检测疫苗的效果,科学家用不同方式给雪貂接种重组腺病毒疫苗后,感染新冠病毒,一段时间后检测新冠病毒含量,结果如图2所示,说明重组腺病毒疫苗_______________ ,且效果最好的免疫方式是______________ 。
(5)作为符合新冠疫苗的接种对象,你可以采取哪些行动响应国家疫苗接种的政策?_____________ (两方面)。
(1)与直接将S蛋白注射到体内作为疫苗相比,重组腺病毒疫苗的优点是可以引起人体产生
(2)为了构建重组腺病毒DNA,需要将S蛋白基因插入腺病毒DNA中,由于腺病毒DNA分子较大,传统的限制性核酸内切酶和DNA连接酶处理效率较低,所以采取如图1所示方法获得重组腺病毒DNA。将质粒1和质粒2共同导入受体细胞中,据图推测,最终重组线性DNA分子的筛选过程中,应在培养基中加入
(3)生产疫苗的过程是将上述重组线性DNA分子(不编码病毒复制必需的E1蛋白)导入到293细胞系(该细胞系可表达人体细胞没有的E1蛋白),最终包装成完整的腺病毒。重组DNA分子中缺失E1基因的意义是
(4)为了检测疫苗的效果,科学家用不同方式给雪貂接种重组腺病毒疫苗后,感染新冠病毒,一段时间后检测新冠病毒含量,结果如图2所示,说明重组腺病毒疫苗
(5)作为符合新冠疫苗的接种对象,你可以采取哪些行动响应国家疫苗接种的政策?
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【推荐1】人参是一种名贵中药材,具有良好的滋补作用。干扰素可用于治疗慢性乙肝、丙肝及部分肿瘤。下图为三种限制酶识别序列与酶切位点及制备能合成干扰素的人参愈伤组织细胞的示意图。请回答:(1)图中①的DNA用HindⅢ、BamHI完全酶切后,反应管中有______ 种DNA片段。利用PCR技术扩增干扰素基因时,扩增第n次时,需要______ 个引物。
(2)假设图中质粒上BamHI识别位点的碱基序列变为了另一种限制酶BclI识别位点的碱基序列,现用限制酶BclI和HindⅢ切割质粒,那么该图中①的DNA右侧选择______ 进行切割,理由是______ 。形成的重组质粒能被______ 切开。
(3)在构建重组质粒的过程中,用HindⅢ、BamHI切割质粒和目的基因比只用BamHI切割好,这样可以防止______ 。②过程需要用到的酶是______ 。
(4)④过程检测人参愈伤组织细胞是否产生干扰素,所用的方法是______ 。
(2)假设图中质粒上BamHI识别位点的碱基序列变为了另一种限制酶BclI识别位点的碱基序列,现用限制酶BclI和HindⅢ切割质粒,那么该图中①的DNA右侧选择
(3)在构建重组质粒的过程中,用HindⅢ、BamHI切割质粒和目的基因比只用BamHI切割好,这样可以防止
(4)④过程检测人参愈伤组织细胞是否产生干扰素,所用的方法是
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【推荐2】由M基因编码的M蛋白是一类广泛存在于动植物中的金属结合蛋白,具有吸附重金属的作用,它能在大肠杆菌和动物A的肝细胞中特异性表达。现设计实验如下:
1.实验一:科研人员将外源DNA片段F插入M基因的特定位置,再通过一定的技术手段获得M基因失活的转基因克隆动物A,流程如图1所示。
2.实验二:将M基因导入大肠杆菌构建具有吸附重金属的作用的工程菌,如图2所示。
(1)在构建含有片段F的重组质粒过程中,用于切割质粒DNA的工具酶能将特定部位的两个核苷酸之间的____________ 断开。
(2)在无菌、无毒等适宜环境中进行动物A成纤维细胞的原代和传代培养时,需要定期更换培养液,目的是________________________ 。
(3)图1中②所使用的技术叫____________ 。与胚胎细胞核移植技术相比,体细胞核移植技术的成功率____________ 。从早期胚胎中分离获得的胚胎干细胞,在形态上表现为细胞体积小,细胞核大,核仁明显,功能上具有____________ 。
(4)鉴定转基因动物:以免疫小鼠的B淋巴细胞与骨髓瘤细胞进行融合,筛选融合杂种细胞,制备M蛋白的单克隆抗体,简要写出利用此抗体确定克隆动物A中M基因是否失活的实验思路。
(5)根据M蛋白cDNA的核苷酸序列设计了相应的引物(图2甲),通过PCR扩增M基因。已知A位点和B位点分别是起始密码子和终止密码子对应的基因位置。选用的引物组合应为____________ 。实验二中,PCR所用的DNA聚合酶扩增出的M基因的末端为平末端。由于载体E只有能产生黏性末端的酶切位点,需借助中间载体P将M基因接入载体E。载体P和载体E的酶切位点及相应的酶切序列如图2乙所示。
①选用____________ 酶将载体P切开,再用____________ DNA连接酶将M基因与载体P相连,构成重组载体P′。
②由于载体P'不具有表达M基因的____________ 故应该选用____________ 酶组合对载体P'和载体E进行酶切,将切下的M基因和载体E用DNA连接酶进行连接,将得到的混合物导入到用____________ 离子处理的大肠杆菌,筛出M工程菌。
(6)M基因在工程菌的表达量如图所示。请回答该结果能否说明已经成功构建了具有较强吸附废水中重金属能力的工程菌的理由____________ 。
1.实验一:科研人员将外源DNA片段F插入M基因的特定位置,再通过一定的技术手段获得M基因失活的转基因克隆动物A,流程如图1所示。
2.实验二:将M基因导入大肠杆菌构建具有吸附重金属的作用的工程菌,如图2所示。
(1)在构建含有片段F的重组质粒过程中,用于切割质粒DNA的工具酶能将特定部位的两个核苷酸之间的
(2)在无菌、无毒等适宜环境中进行动物A成纤维细胞的原代和传代培养时,需要定期更换培养液,目的是
(3)图1中②所使用的技术叫
(4)鉴定转基因动物:以免疫小鼠的B淋巴细胞与骨髓瘤细胞进行融合,筛选融合杂种细胞,制备M蛋白的单克隆抗体,简要写出利用此抗体确定克隆动物A中M基因是否失活的实验思路。
(5)根据M蛋白cDNA的核苷酸序列设计了相应的引物(图2甲),通过PCR扩增M基因。已知A位点和B位点分别是起始密码子和终止密码子对应的基因位置。选用的引物组合应为
①选用
②由于载体P'不具有表达M基因的
(6)M基因在工程菌的表达量如图所示。请回答该结果能否说明已经成功构建了具有较强吸附废水中重金属能力的工程菌的理由
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非选择题-解答题
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较难
(0.4)
【推荐3】降钙素是一种多肽类激素,临床上用于治疗骨质疏松症等。人的降钙素活性很低,半衰期较短。某科学机构为了研发一种活性高、半衰期长的新型降钙素,预期新型从降钙素的功能出发,推测相应的脱氧核苷酸序列,并人工合成了两条各含72个碱基的DNA单链,两条链通过18个碱基对形成部分双链DNA片段,再利用Klenow酶补平,获得双链DNA,过程如图。
在此过程中发现,合成较长的核苷酸单链易产生缺失碱基的现象。分析回答下列问题:
(1)Klenow酶是一种_____________ 酶,合成的双链DNA有_______ 个碱基对。
(2)获得的双链DNA经EcoRⅠ(识别序列和切割位点-G↓AATTC-)和BamHⅠ(识别序列和切割位点-G↓GATCC-)双酶切后插入到大肠杆菌质粒中,筛选含重组质粒的大肠杆菌并进行DNA测序验证。
①大肠杆菌是理想的受体细胞,这是因为它____________________________ 。
②设计EcoRⅠ和BamHⅠ双酶切的目的是_______________________________ 。
③大肠杆菌质粒中含有标记基因是为了_________________________________ 。
(3)经DNA测序表明,最初获得的多个重组质粒,均未发现完全正确的基因序列,最可能的原因是____________________________________________________ 。
(4)上述制备该新型降钙素,运用的现代生物工程技术是__________________ 。
在此过程中发现,合成较长的核苷酸单链易产生缺失碱基的现象。分析回答下列问题:
(1)Klenow酶是一种
(2)获得的双链DNA经EcoRⅠ(识别序列和切割位点-G↓AATTC-)和BamHⅠ(识别序列和切割位点-G↓GATCC-)双酶切后插入到大肠杆菌质粒中,筛选含重组质粒的大肠杆菌并进行DNA测序验证。
①大肠杆菌是理想的受体细胞,这是因为它
②设计EcoRⅠ和BamHⅠ双酶切的目的是
③大肠杆菌质粒中含有标记基因是为了
(3)经DNA测序表明,最初获得的多个重组质粒,均未发现完全正确的基因序列,最可能的原因是
(4)上述制备该新型降钙素,运用的现代生物工程技术是
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