【推荐2】玉米的祖先——野生玉米，名叫“大刍草”，经过9000多年人工驯化，被改造成现代玉米。我国中科院科学家经过长达10年不懈努力，从野生玉米“大刍草”中，成功找回玉米人工驯化过程中丢失的一个控制高蛋白含量的优良基因THP9，克隆出来并将此高蛋白基因转移到玉米细胞内，获得了转基因高蛋白玉米新品种。请回答相关问题：

EcoRI	BamHI	KpnI	MfeI	HindⅢ

(1)若科研人员获得了THP9基因对应核苷酸序列，则可利用DNA合成仪直接合成目的基因，该种获取目的基因的方法是___________。
①化学合成法②PCR法③基于大规模筛选的方法
(2)构建基因表达载体时，若科研人员需将THP9基因整合到质粒上，如图，已知图中THP9基因转录方向为从左往右，应使用限制酶______________切割如图中质粒，使用限制酶________________切割图中含THP9基因的DNA片段，以获得能正确表达THP9基因的重组质粒。
(3)限制酶来源于原核生物，不会切割本身的DNA分子是因为_____________________。
(4)TPH9基因转录的模板链是______，利用PCR技术对THP9基因进行扩增的原理是__________。
(5)为了检测转基因技术是否成功，科研工作者在个体水平上的检测方法是____________________。

【推荐3】复合型免疫缺乏症患者由于缺少腺苷酸脱氨酶基因（ADA基因）而导致免疫功能缺损。科学家将患者的T细胞取出并转入ADA基因，再将携带ADA基因的T细胞注入患者体内，可以改善患者的免疫功能。回答下列问题。
(1)从正常人的T细胞中获取___________ （填mRNA或DNA），在___________酶的作用下合成cDNA，在cDNA中还需要筛选才能获得ADA基因，其原因是___________。
(2)根据ADA基因两端的核苷酸序列合成_____________，并通过___________技术对目的基因进行筛选和扩增。在扩增过程中首先要进行90-95℃保温，其目的是___________
(3)将人正常的ADA基因导入到患者的T细胞时，需要构建基因表达载体，其目的是______________。上述治病方法叫做___________。

【推荐1】下表是几种限制酶识别序列及其切割位点，图1、图2中标注了相关限制酶的酶切位点，其中切割位点相同的酶不重复标注。请回答下列问题：

限制酶	BamHⅠ	BclⅠ	Sau3AⅠ	HindⅢ
识别序列及切割位点

   
（1）为了筛选出转入了重组质粒的大肠杆菌，应在选择培养基中添加_________。
（2）若BamHⅠ酶切的DNA末端与BclⅠ酶切的DNA末端连接，连接部位的6个碱基对序列为________，对于该部位，这两种酶_____（填“都能”“都不能”或“只有一种能”）切开。
（3）若用Sau3AⅠ切图1质粒最多可能获得_______种大小不同的DNA片段。

【推荐2】γ-氨基丁酸（GABA）在降低血压、治疗神经损伤、生产可降解材料等方面有广泛应用，高效制备GABA是目前国内外的研究热点。科研人员运用基因工程技术构建重组表达载体（如图所示），将其成功导入大肠杆菌获得能生产GABA的工程菌。该菌利用目的基因表达产物GadB，催化L-谷氨酸脱羧大量合成GABA。回答下列问题。

   

(1)在基因工程操作中，大肠杆菌是运用最广泛的工程菌，原因是______________。
(2)由图可知，步骤①用于切割质粒的限制酶是________，这在实践中的优势是_________________。
(3)在进行步骤②之前，需对gadB基因进行PCR扩增以提高获得重组质粒的概率，需加入__________种引物和__________酶，扩增过程中使用的引物__________（填“可”或“不可”）重复利用。
(4)将重组质粒导入到用__________处理的大肠杆菌中完成转化；利用含有__________的培养基筛选出转基因工程菌。
(5)将成功转化的大肠杆菌进行发酵培养，发酵罐内的原料应富含__________，酸碱度要求是调至__________。一段时间后，检测GABA的含量。

【推荐3】限制酶是基因工程的基本工具之一。同尾酶指来源各异，识别的靶序列也不相同，但产生相同的黏性末端的限制酶，在基因工程中应用较为广泛。几种常见的限制酶的切割位点如表所示。回答下列问题：

限制酶	BamHI	SalI	BglⅡ	XhoI
识别序列及切割位点

(1)表中两组同尾酶分别是____和____。表中限制酶切割出的为黏性末端，若限制酶切割出的为平末端，则可以用____（选填“E·coliDNA连接酶”“T4DNA连接酶”“E·coliDNA连接酶或T4DNA连接酶”）。
(2)某限制酶的识别序列及切割位点为'GATC，某DNA分子上有4个该限制酶的识别位点，用该限制酶切割该DNA分子，会生成4个片段。若用BamHI切割该DNA分子会生成2个片段，则该DNA分子为____（填“环”或“链”）状结构。若用两种酶同时处理该DNA分子，则会生成____个片段。
(3)限制酶的切割位点是____（填化学键名称）。在基因工程中，与使用一种限制酶相比，同时使用2种同尾酶进行切割的优点有____（写出1个）。

【推荐1】核衣壳蛋白（N蛋白）是RNA病毒的主要结构蛋白，与其致病性密切相关。新型冠状病毒（SARS-CoV-2）作为一个新的RNA病毒变种，属于冠状病毒属。自新冠爆发以来，不同地区出现了多种变异毒株，目前研究发现，不同的SARS-CoV-2的N蛋白几乎没有差异，但与其他冠状病毒N蛋白存在序列上的很多变异。以下为某研究团队借助现代生物技术构建SARS-CoV-2的重组N蛋白用于抗体检测和其他研究的过程。请分析回答：
(1)分析发现SARS-CoV-2N蛋白在其肽链的C端和N端与其他冠状病毒N蛋白间存在变异，为得到相应目的基因必须对现有N蛋白进行____________，方法是通过相应的生物学技术预测分析SARS-CoV-2N蛋白的结构，并利用氨基酸分析技术得到其氨基酸序列，再利用____________推测控制合成SARS-CoV-2N蛋白的核苷酸序列，进而得到相应的目的基因（DNA）序列，以上步骤为____________的技术环节，属于第二代基因工程技术。
(2)合成SARS-CoV-2的N蛋白基因的具体方法为：先通过____________过程得到SARS-CoV-2的cDNA，再通过设计特定的___________，采用___________技术扩增冠状病毒N蛋白基因。
(3)在接下来的基因工程中最核心的步骤是___________，该过程中，他们选用了pET-28质粒（如下图1），其上所含的限制酶的识别和酶切位点如图2，为使上述方法获得的目的基因能准确插入pET-28质粒，可在设计两种___________时，分别在其___________端加上___________、___________（按从左向右5′→3′顺序书写序列）

(4)在获取基因表达产物时，该团队选择大肠杆菌作为受体细胞，在导入操作前一般会先用_________处理，使其处于感受态，因为此状态下细菌细胞___________。

【推荐3】植物基因工程中常用到植物组织培养技术。为了获得纯合的转K基因植株，实验小组设计了一个实验流程，其主要内容如图所示。回答下列问题：
   
(1)用农杆菌转化法导入目的基因时，一般将目的基因嵌入到Ti质粒的_______上。图中A代表的是_______的农杆菌。
(2)由单核花粉粒培育出愈伤组织的过程称为_______，其实质是_______。
(3)B过程可用_______处理愈伤组织的细胞，从而使细胞中染色体数目加倍。由含K基因的愈伤组织细胞（2n）培育出幼苗的过程中，_______（填“需要”或“不需要”）光照处理，原因是____________________________。
(4)经过培养、筛选最终得到的二倍体植株即为纯合的转K基因植株。K基因纯合的原因是____________________________。

【推荐1】据报道，美国科研人员通过基因转移技术，从根本上治愈了实验小鼠所患的Ⅰ型糖尿病，这种技术把选定的X基因输入胰腺，这些基因随后得到整合并促使消化系统和其他类型的细胞制造胰岛素，请回答下列问题：
（1）在基因工程中，X基因被称为___________，利用PCR技术扩增X基因的前提需要有一段已知该基因的碱基序列，是用于合成___________，在扩增过程中需加入__________酶。
（2）启动子的作用是_______________________________。目的基因能在不同生物体内正常表达，这说明_________________________________________。
（3）将X基因导入小鼠体内之前，需要操作的核心步骤是______________，所需的酶是 _____________________。
（4）若对患Ⅰ型糖尿病小鼠进行转基因技术治疗后(经检测X基因已成功导入胰腺细胞)，但是发现并未治愈其病症，可能的原因是____________________。(至少答2条)

【推荐2】乳腺炎和口蹄疫分别是由细菌和病毒引起的危害奶牛养殖业的两种严重疾病。研究者利用生物技术培育出转乳铁蛋白肽(抗细菌)和人干扰素(抗病毒)基因的双转基因奶牛新品种。下图1为基因表达载体，图2为培育流程。

(1)培育双转基因奶牛涉及的生物技术有_______________________________________________(至少2项)。
(2)牛乳铁蛋白肽基因能在转基因奶牛的乳腺细胞中表达，人干扰素基因则可在全身细胞表达，这与构建表达载体时________的选择有关。据图可知，干扰素基因与____________基因可同时转录，基因工程过程中主要的工具酶有________________。
(3)将基因导入牛胎儿成纤维细胞前，需用________将其处理成单个细胞。成纤维细胞无法直接发育成个体，需要去核卵母细胞的细胞质诱导，以实现细胞核的________。
(4)研究者利用________________技术筛选出____________(填“牛乳铁蛋白肽”或“干扰素”)基因成功表达的胚胎进行移植。

【推荐3】研究者将动物体内的目的基因导入大肠杆菌的质粒中保存，该质粒含有氨苄青霉素抗性基因(Amp^R)、 LacZ 基因及一些酶切位点，其结构和操作步骤如下图所示。

(1)大肠杆菌等微生物是基因工程中研究最早、应用最广泛的受体细胞，这是因为微生物具有__________________等优点(至少两点)。一般使用__________种限制酶处理质粒和含有目的基因的DNA片段，这样做的优点是_______________________。
(2)步骤③中加入的物质是_______，目的是___________________。
(3)将连接产物导入大肠杆菌，先用__________处理大肠杆菌，目的是____________。
(4)酶切位点选择在LacZ基因上，目的是用于区分_______________的大肠杆菌，依据是_________________。