【推荐2】Ⅰ．小鼠的繁殖能力强，相对性状明显，是常用的遗传实验材料，用小鼠进行遗传学实验，小鼠的弯曲尾（B）对正常尾（b）显性．遗传学家针对小鼠的尾形进行了相应的遗传实验．                    
实验一：                    

父本	母本	子一代
弯曲尾	正常尾	雌性全是弯曲尾；雄性全是正常尾

实验二：遗传学家将一个DNA片段导入到子一代弯曲尾雌鼠的体细胞中，通过DNA重组和克隆技术获得一只转基因正常尾小鼠．                    
说明：①插入的DNA片段本身不控制具体的性状；                    
②小鼠体内存在该DNA片段，B基因不表达，即该DNA片段和B基因同时存在是表现为正常尾，b基因的表达不受该片段影响；                    
③若小鼠的受精卵无控制尾形的基因（B、b），将导致胚胎致死。                    
请回答：                    
（1）由实验一可知，子一代雌鼠的基因型是__。                    
（2）该转基因小鼠的育种原理是__。                    
（3）遗传学家认为该DNA片段插入到小鼠染色体上的位置有4种可能（见如图）．为确定具体的插入位置，进行了相应的杂交实验．（该DNA片段与B或b基因的交换值为20%）                    

                    

实验方案：                    
让该转基因正常尾小鼠与非转基因正常尾雄性小鼠杂交，统计子代的表现型种类及比例                    
结果与结论：
①若子代__，则该DNA片段的插入位置属于第1种可能性；                    
②若子代__，则该DNA片段的插入位置属于第2种可能性；                    
③若子代__，则该DNA片段的插入位置属于第3种可能性，且完全连锁；若不完全连锁，则子代的表现型及比例为__；                    
（4）若子代__，则该DNA片段的插入位置属于第4种可能性，且完全连锁；若不完全连锁，则子代的表现型及比例为__；                    
（5）上题中的第一种①情况和第三种③情况下插入DNA方式中，插入的该DNA片段与控制尾形的基因在遗传过程中分别满足遗传基本规律中的__定律．                    
Ⅱ．狗的一个复等位基因系列控制皮毛中色素的分布．等位基因a^y降低了色素沉积程度，产生沙色的狗；等位基因a^t产生斑点型式的狗；等位基因a^s使暗色素在全身均匀分布；等位基因a^y、a^t、a^s之间具有不循环而是依次的完全显隐性关系（即如果a^y对a^t显性、a^t对a^s显性，则a^y对a^s也显性，可表示为a^y＞a^t＞a^s）根据以下系谱图回答问题：                    

                    

（6）根据该系谱图确定复等位基因的显性顺序是__；                    
（7）上述狗皮毛颜色的遗传遵循__定律；                    
（8）Ⅰ₁的基因型为__，Ⅲ₂与Ⅲ₃交配产生斑点子代的概率是__；                    
（9）已知狗的长尾（A）对短尾（a）是显性．现用短尾狗（甲群体）相互交配产生的受精卵在胚胎发育早期注射微量胰岛素，生出的小狗就表现出长尾性状（乙群体）．请设计实验方案探究胰岛素在小狗胚胎发育过程中是否引起基因突变（设计实验方案预测实验结果及结论）                    
①实验思路：__                    
②结果及结论：__。

【推荐3】蝴蝶（2n=56）的性别决定方式为ZW型。某种野生型蝴蝶的体色是深紫色，深紫色源自于黑色素与紫色素的叠加。黑色素与紫色素的合成分别受A/a、B/b基因（均不位于W染色体上）的控制。现有一种黑色素与紫色素合成均受抑制的白色纯合品系M，研究人员让该品系M与纯合野生型蝴蝶进行正反交实验，所得F₁的体色均为深紫色。利用F₁又进行了以下实验：

	杂交组合	后代表型及比例
实验一	F1的雌蝶×品系M的雄蝶	深紫色：白色=1：1
实验二	F1的雄蝶×品系M的雌蝶	深紫色：紫色：黑色：白色=9：1：1：9

回答下列问题：
(1)根据正反交实验结果可以推测，控制蝴蝶体色的基因位于______________染色体上，品系M的基因型为______________，F₁雄蝶体细胞中染色体有_______________种形态。
(2)由实验一的实验结果推测，A/a、B/b两对基因遵循孟德尔的基因_____________定律。
(3)实验一和实验二后代的表现型比例不同，原因可能是______________。若让F₁的雌、雄蝶相互交配，子代中深紫色、紫色、黑色和白色个体的比例为_____________
(4)多次单对杂交重复上述两组实验，发现极少数实验一中所得后代全为深紫色，而实验二结果保持不变。由此推测，F₁中有个别雌蝶产生的含有__________________基因的卵细胞不育，这种雌蝶记作雌蝶N。
(5)野生型蝴蝶及品系M均为P*基因纯合子。研究发现，雌蝶N的一个P*基因突变为P基因，P基因编码的蛋白可与特定DNA序列结合，导致卵细胞不育。将雌蝶N与品系M杂交，子代全为深紫色，选取子代雌蝶与品系M继续杂交，所得后代仍全为深紫色。据此判断，P基因为______________（填“显性”或“隐性”）基因，P基因与A/a、B/b基因在染色体上的位置关系是_____________

【推荐1】阿尔兹海默症（AD）是一种发生于老年和老年前期的中枢神经系统退行性疾病，β-淀粉样前体蛋白（APP）基因是 AD发病关联基因。科学家尝试构建含人APP基因的转基因小鼠动物模型（如图1），以研究AD疾病的发病机制。

限制性内切核酸酶	BamHl	Xho l	Bcl l	Sac l
识别序列及切割位点	5'-C↓GATCG-3'	5'-C↓TCGAG-3'	5'-↓GATC-3'	5'-GAGCT↓C-3'

(1)下列对培养基X和培养基 Y 的说明正确的是____。

A．培养基 X是鉴别培养基

B．培养基 Y 应选用液体培养基

C．培养基X上生长大肠杆菌均含有重组质粒

D．培养基 Y 上生长大肠杆菌均含有重组质粒

(2)下列关于过程Ⅳ的培养条件，说明合理的是____。

A．加入抗生素—防止细菌感染

B．5%CO2—维持酸碱平衡

C．适宜温度—维持酶活性

D．适宜渗透压—维持水平衡

(3)在繁育转基因小鼠过程中采用的生物技术与工程是____。（编号选填）
①重组DNA 技术
②动物细胞培养技术
③动物细胞融合技术
④细胞核移植技术
⑤胚胎移植技术
(4)若过程Ⅰ中质粒pUCl8选用了 Xho I和BclⅠ进行切割，表为4种限制酶的识别序列和切割位点。为实现其与目的基因相连，可在人APP基因两端分别添加____（编号选填）：若要保证过程Ⅱ能够成功回收 APP 基因，则应在人 APP 基因两端分别添加____。（编号选填）
①XhoI 和 BclI的识别序列
②SacI 和 BclI的识别序列
③Xho I 和 BamHI的识别序列
④Sac I 和 BamHI 的识别序列
科学家研究发现AD与脑部的β淀粉样蛋白（Aβ）寡聚有关，Aβ寡聚体能引起一系列的神经细胞毒性反应，造成神经细胞死亡。相关机制如图2，请回答：

(5)有的神经递质为小分子化合物，但仍以图8所示方式释放，其意义是____。

A．不利于神经冲动快速传递

B．避免被酶降解

C．短时间内可大量释放

D．减少能量的消耗

(6)神经递质与突触后膜上的 NMDA受体结合会引起Na⁺通道打开，Aβ寡聚体与NMDA受体结合后突触后膜兴奋性将____（增强/减弱/不变）。AD患者的神经纤维常常出现缠结原因是Aβ寡聚体导致微管稳定性丢失，由微管蛋白组成的____（细胞结构）被破坏，不能维持细胞的正常形态。
(7)请据图2及所学知识分析AD患者与糖尿病的相关性____。

【推荐1】帝王蝶是世界上唯一能长距离迁徙的蝴蝶，其幼虫只摄食一种叫乳草的植物，乳草会分泌 一种名为强心甾的毒素，有资料研究显示，过量摄入强心甾对除帝王蝶幼虫以外其他的动物来说都是有 毒的，会导致死亡。
（1）钠钾泵在许多动物细胞膜上均有存在，它能通过主动转运控制细胞内外的钠、钾离子浓度， 因此从膜蛋白功能的角度看，钠钾泵还具有_____的活性。强心甾能与细胞膜表面的钠钾泵结合，抑制其主动转运功能，从而导致细胞内外________________失衡，使细胞破裂。
（2）科学家猜测：帝王蝶的钠钾泵基因可能发生了突变，使其获得了对强心甾的抗性。为研究帝 王蝶钠钾泵基因的碱基排列顺序并获得相应的蛋白产物，科学家尝试从帝王蝶基因组中获取该基因，并 通过________ 实现了对其的扩增；科学家选用合适的__________、DNA 连接酶和载体构建重组 DNA 分子，并将其导入大肠杆菌以获得大量的目的基因，再将其导入_______________ 中（A．农杆菌 B．酵母细胞 C．昆虫细胞   D．海拉细胞）获得相应的蛋白产物。
（3）为提高重组 DNA 分子导入的成功率，除了需要确保重组 DNA 分子有足够的物质的量外，还必 须采用各种方法提高大肠杆菌的_________。为了筛选成功导入重组 DNA   分子的大肠杆菌，宜用__________法将转化混合物转移至含有________的平板上。通过基因测序，发现帝王蝶钠 钾泵基因中的突变会导致其蛋白产物中有 3 处氨基酸种类与其他昆虫不同，分别是第 111、119 和 122 位氨基酸，这体现了基因突变的普遍性。
（4）为了从受体细胞中分离目的基因的蛋白产物（目的蛋白），科学家在目的蛋白的肽链末端添加 一个含有 6-10 个组氨酸的“标签”，该标签在适宜条件下可以与含有金属离子的固定化介质结合。因此， 可以提取受体细胞的______中的全部蛋白质，通过_____法将其中的目的蛋白固定在层析 柱上，再洗去不需要的杂蛋白，最后将目的蛋白从层析柱上______下来，从而获得纯度较高的 目的蛋白。通过对目的蛋白的研究发现：上述 3 个位点的突变使得帝王蝶膜结构上钠钾泵的____发生了改变，强心甾无法与其结合，由此验证了之前的猜测。
（5）为进一步研究上述突变位点的作用，科学家使用 CRISPR/Cas9 技术在果蝇中开展了相关研究。
通过该技术，研究人员可以在 DNA 分子中特定的序列处剪切 DNA 分子并进行编辑。研究人员将基因 编辑所需的各种元件同时导入果蝇____细胞中，对钠钾泵基因上的相应位点进行编辑，实验 结果如下：

突变情况	神经系统功能	强心甾抗性
无突变	+++	-
111	+	+
119	+++	-
122	--	++
111+119	++	++
122+119	+	+++
111+119+122	++	++++

注：“+”表示神经系统功能正常或有强心甾抗性“-”表示神经系统功能不正常或没有强心甾抗性
根据上表分析，可以推断出：_____突变对果蝇正常生存影响最小，__________突变则可能是在帝王蝶进化过程中最后出现的，3 个位置先后出现的突变使得帝王蝶在保证神经系统正常功能的 前提下，还进一步获得了对强心甾的抗性，这体现了进化论中________的思想。

【推荐2】我国科学家欲获得高效表达萝卜蛋白A的转基因大肠杆菌作为微生物农药，进行了相关研究。检测发现，转入的蛋白A基因在大肠杆菌细胞中表达效率很低，研究者推测不同生物对密码子具有不同的偏好，因此通过PCR对蛋白A基因进行了定点诱变，过程如图1所示。图2为生产该微生物农药所用的质粒结构示意图。图3为转基因大肠杆菌在培养基中的生长情况。据此回答下列问题：

(1)通常情况下，PCR过程中添加引物的作用是使DNA聚合酶能_________。图1中引物B和引物C与普通引物不同的是______________。（写一点）
(2)若将新的蛋白A基因导入到图2所示的质粒中构建重组DNA，则扩增新的蛋白A基因时，最好在引物_____________的_____________（填“5′”或“3′”）端添加______________限制酶的酶切位点。
(3)结合图3分析，导入转新蛋白A基因的大肠杆菌应接种在_____________（填“固体”或“液体”） 培养基上，该培养基应添加____________以对其进行筛选。接种前通常采用____________法对培养基进行灭菌，该培养采用的接种方法是____________。
(4)鉴定图3的菌落中大肠杆菌是否产生了新的蛋白A的方法是____________。

【推荐3】结核病是由结核杆菌引起的人畜共患病。结核杆菌通常以气溶胶形式传播，气溶胶颗粒被肺泡吞噬细胞吞噬，吞噬细胞破裂导致结核杆菌在机体内进一步传播。羊痒病是由正常细胞的非致病性肠蛋白异构化为痒病朊蛋白所致。为研制既能抗结核病又能抗羊痒病的双抗羊，科学家进行了如下操作。
(1)小鼠SP110基因是目前发现的具有抗结核杆菌感染功能的基因。研究人员为了验证SP110基因的功能，同时也为了验证山羊吞噬细胞特异性启动子MSR可以启动SP110基因在吞噬细胞内的表达，将MRS启动子与小鼠SP110基因形成融合基因，设计了下表所示的三组实验。

组别	主要操作	培养细胞后，使之破裂
对照组1	空质粒导入山羊肺泡吞噬细胞，接种适量结核杆菌	细胞培养72小时后，加入③___________，使吞噬细胞破裂，释放结核杆菌
对照组2	含有能广泛表达SP110基因的山羊肺泡吞噬细胞，①___________
实验组	②___________，接种等量的结核杆菌

取三组实验等量的细胞裂解液，用稀释涂布平板法培养，结果如下图1所示。由图可知小鼠SP110基因可用于双抗羊的研制，依据的实验现象是___________。

(2)非致病性胱蛋白是由山羊13号染色体上的PRNP基因的第三外显子控制合成的，PRNP基因的结构如图2．研究人员用新型基因敲除技术对体外培养的山羊成纤维细胞PRNP基因的外显子3序列实施定点敲除。请根据上述信息，设计一个检测敲除是否成功的思路：提取山羊成纤维细胞的DNA，根据___________设计引物进行PCR，并用___________作用于PCR产物后进行凝胶电泳，若仅获得一条电泳条带，说明定点敲除成功。

(3)用TALEN敲除载体与供体DNA表达载体（图4）共同转化体外培养的幼羊成纤维细胞，可将融合基因定点敲入PRNP基因的外显子3部位，原理如图3．请指出图4中数字1和2的分别代表的结构：1、___________、2、___________。经检测，山羊成纤维细胞中非致病性脱蛋白基因和SP110基因的表达情况是___________（填“两者均增加”或“两者均减少或不表达”或“前者减少、后者增加”或“前者增加、后者减少”）。

(4)欲用上述细胞获得双抗羊，需要用到的技术有___________（至少写出两项）。