【推荐1】玉米螟和田间杂草严重影响玉米的生长发育，导致玉米产量和品质下降，科研人员将crylAb、crylF（cry基因来源于苏云金芽孢杆菌，其编码的杀虫蛋白能抑制玉米螟等玉米害虫）和cp4epsps基因（cp4epsps基因来源于土壤根瘤农杆菌，其编码的蛋白质对除草剂草甘膦不敏感）构建在同一载体上，并利用农杆菌转化到玉米中，获得具有抗虫和耐除草剂性状的转基因玉米株系BFL4-1。回答下列问题：
(1)为实现3种目的基因的扩增，正常情况下需要制备___________种引物，引物的作用是_____________________。在构建基因表达载体时，通常需要在目的基因前后引入两种限制酶的切割位点，该方法比用同一种酶进行酶切的优势__________________。（答出两点）
(2)下表为检测与鉴定含目的基因植株的4种方法。预测同一后代群体中，4种方法检出的含目的基因植株的比例从小到大依次是____________________。

方法	检测对象	检测目标	检出的含目的基因 植株的比例
PCR扩增	基因组DNA	目的基因	X1
分子杂交	总mRNA	目的基因转录产物	X2
抗原—抗体杂交	总蛋白质	目的基因编码的蛋白质	X3
个体鉴定	幼苗	抗除草剂和抗虫幼苗	X4

(3)在植物体细胞杂交中为保证原生质体在制备过程中的完整性，经常需要将原生质体放入适宜浓度的甘露醇中以维持原生质体形态。为探究玉米原生质体制备中甘露醇溶液的适宜浓度，进行了如下实验：
实验材料及用具：玉米单细胞悬液、浓度为2 mol/L的甘露醇溶液、细胞壁水解酶、蒸馏水、培养瓶、血细胞计数板、显微镜（具有测距功能）等。
请将实验补充完整：____________________________________，处理相同且适宜时间后，用血细胞计数板和显微镜对各个培养瓶中的原生质体计数，并测量原生质体的体积，并记录。其中原生质体数目最多，且原生质体体积最接近植物细胞体积对应的浓度即是最适宜的甘露醇溶液浓度。

【推荐2】现代生物技术
杨树是重要的经济树种，但其害虫很多，利用基因工程培育抗虫杨树是害虫防治的有效手段。胰蛋白酶抑制剂能干扰昆虫的代谢，引起昆虫死亡，但对人体无害。科学家将马铃薯胰蛋白酶抑制剂基因（Pin﹣Ⅱ）通过农杆菌导入杨树细胞，培育成了抗虫杨树。图1示含目的基因的DNA分子，图2表示质粒，图中Ap^r表示氨苄青霉素抗性基因，Ne^r表示新霉素抗性基因，复制原点是质粒DNA复制的起点，使其能在受体细胞中存在和遗传。箭头表示识别序列完全不同的4种限制酶的酶切位点。

（1）上述基因工程中，受体细胞是_____细胞，属于_____（填“动物”“植物”或“微生物”）基因工程。
（2）为使目的基因与质粒高效重组，最好选用_____（限制酶）作用于含目的基因的DNA和质粒，然后在_____酶的作用下形成重组质粒。
（3）上述基因工程中，导入受体细胞的重组DNA分子为_____。
A．目的基因+杨树基因
B．目的基因+运载体
C．目的基因+杨树基因+运载体
D．杨树基因+运载体
（4）成功导入重组质粒的细胞会表现为_____。
A．抗氨苄青霉素，不抗新霉素
B．抗氨苄青霉素，也抗新霉素
C．不抗氨苄青霉素，抗新霉素
D．不抗氨苄青霉素，也不抗新霉素
（5）用转基因杨树叶片喂养某种杨树害虫，发现害虫死亡率显著增加。试从分子水平写出转基因和非基因杨树的叶片细胞的三个不同点：_____。

【推荐1】[生物—选修3：现代生物科技专题]
2016年9月英国《新科学家》杂志披露：美国华裔科学家张进团队利用“三父母婴儿”技术，使一对约旦夫妇成功产下一个健康男婴（婴儿母亲的线粒体携带有亚急性坏死性脑病基因，曾导致多次流产、婴儿夭折）。所谓“三父母婴儿”技术，是指利用有线粒体基因缺陷的女性卵子中的健康细胞核和捐赠者去掉细胞核的卵子，“拼装”一个新的卵子，再通过一系列现代生物技术，最终培育出正常婴儿的技术。请回答下列问题：
（1）为重新“拼装”卵子，需要通过显微操作进行_____。接下来他们又使用电脉冲方法来______“拼装”的卵子。
（2）在对“拼装”卵子体外受精前，需要对收集的精子进行_______处理，哺乳动物的处理方法有化学诱导法和____________两种。
（3）受精卵形成后，应将其移入______中继续培养。人的体外受精胚胎，即试管胚胎，可在8—16个细胞阶段进行__________________。
（4）张进告诉记者：他们碰巧、也是故意要“制造”男孩。因为男性的线粒体_______（填“会”或“不会”）不会传给下一代，理由是_________________________。

【推荐2】中科院的研究团队利用细胞工程和基因编辑技术，成功培育出世界上首例只有双母亲来源的孤雌小鼠和双父亲来源的孤雄小鼠，实现了哺乳动物的同性繁殖，实验流程如下图所示。回答下列问题：

(1)培养卵母细胞和精子时，需要定期更换培养液，目的是________________。
(2)卵母细胞去核通常采用的方法是_______________，去核的卵母细胞与aESC融合的方法通常是_________________。不考虑致死情况，得到的孤雄小鼠性染色体组成为__________________。
(3)CRISPR/CAS系统是应用最广泛的基因组编辑技术。由具有限制性内切核酸酶功能的CAS蛋白和一条人为重组的一段目的基因的单链向导RNA（sgRNA）组成，sgRNA 可以指导CAS蛋白对靶基因进行敲除、插入和突变修饰。在基因编辑中，CAS蛋白的功能是_______________。
(4)除基因编辑可实现突变修饰外，PCR 技术也可实现基因的定点突变。萝卜的蛋白A具有广泛的抗植物病菌作用，我国科学家获得了高效表达蛋白 A 的转基因大肠杆菌作为微生物农药。检测发现，转入的蛋白A 基因在大肠杆菌中表达效率很低，研究者推测不同生物对密码子具有不同的偏好。因而设计了与蛋白A基因结合的两对引物（引物B 和C 中都替换了一个碱基），并按如图方式依次进行4次PCR扩增，以获得定点突变新的蛋白A基因。在图中4次PCR扩增中，每次选择的引物分别是（答案从“引物A”、“引物B”、“引物C”、“引物D”中选择作答，若不需要上述引物，则填“0”）：

PCR1：______________；PCR2：___________；PCR3：__________________；PCR4：___________。

【推荐3】科学家培育转乳糖分解酶基因奶牛的过程如图所示。请回答下列问题：

（1）图中细胞培养的培养液成分与植物组织培养基成分最主要的区别在于前者含有___________。在进行细胞原代培养时会出现___________和细胞接触抑制现象．为了防止细胞培养过程中细菌的污染，可向培养液中加入适量的______________________。
（2）图中将乳糖分解酶基因导入胚胎呈纤维细胞中，最常用的方法是______________________。。
（3）图中的核移植操作需要将进行细胞培养获得的供体细胞的细胞核注入去核的卵母细胞中，去掉卵母细胞细胞核的目是_________________________________，而所用的供体细胞一般都选用传代10代以内的细胞，原因是______________________。
（4）重组细胞2在培养液中培养成的重组胚胎移入受体母牛体内会生出与图中的黑白花奶牛性状并不完全相同的犊牛，原因可能有_________________________________。
（5）转乳糖分解酶基因奶牛的培育成功，说明了动物的____________________具有全能性。

【推荐1】研究发现，细胞可以通过回收机制使细胞器的驻留蛋白质返回到正常驻留部位。若驻留在内质网的可溶性蛋白（内质网驻留蛋白）的羧基端有一段特殊的氨基酸序列（KDEL序列），就会从内质网逃逸到高尔基体，此时高尔基体顺面膜囊区的KDEL受体就会识别并结合KDEL序列将他们回收到内质网。请据图回答：

(1)上图体现了生物膜的结构特点是______________，整个生命活动过程中所需要的ATP由__________________产生。（填场所）
(2)据上图分析，该过程能识别与结合KDEL信号序列的受体可存在于_________________________________；KDEL信号序列和受体的亲和力受pH高低的影响，______________（填“高”或“低”）pH能促进KDEL序列与受体蛋白的结合。
(3)不同囊泡介导不同途径的运输，下图是上图中分泌蛋白释放到细胞外的局部放大。右图中的囊泡能精确地将细胞“货物”运送并分泌到细胞外，此过程体现了细胞膜具有__________________的功能。细胞代谢的控制中心是______________。

【推荐2】为了研究温度对某种酶活性的影响，设置三个实验组：A组（20℃）、B组（40℃）和C组（60℃），测定各组在不同反应时间内的产物浓度（其他条件相同），结果如图。回答下列问题：
   
(1)酶活性是指_____________的能力。三个温度条件下，该酶活性最高的是______________组。
(2)在时间t₁之前，如果A组温度提高10℃，那么A组酶催化反应的速度会_____________。
(3)如果在时间t₂时，向C组反应体系中增加2倍量的底物，其他条件保持不变，那么在t₃时，C组产物总量________，原因是_____________。
(4)生物体内酶的化学本质是______________，其特性有______________（答出两点即可）。
(5)若此酶为动物体内提取的某种消化酶，则研究它在细胞中合成和运输采用的科学方法为__________，其分泌过程主要体现了细胞膜的____________性。

【推荐3】血浆中胆固醇含量过高是导致动脉粥样硬化和冠状动脉疾病的一种重要原因。胆固醇主要在肝细胞中合成，在血液中是通过与磷脂和蛋白质结合形成低密度脂蛋白（LDL）颗粒形式运输到其他组织细胞（靶细胞）中，以满足这些细胞对胆固醇的需要，同时减低血浆中胆固醇含量。下图是LDL通过受体介导的胞吞作用进入细胞的途径。

(1)胆固醇参与人体血液中脂质的运输，还参与构成________。据图分析，LDL表面有________层磷脂分子包裹。
(2)胞内体膜上的H^＋-ATP酶是一种转运H^＋的载体蛋白，能催化ATP水解，利用ATP水解释放的能量将H^＋泵入胞内体，此过程中，H^＋________（需要/不需要）与质子泵结合，H^＋-ATP酶作为载体蛋白在转运H^＋时发生的变化是________。
(3)LDL受体的化学本质是蛋白质，据此推测，与LDL受体加工、修饰有关的细胞器有________（填3种），该过程体现了生物膜的________的结构特点。
(4)人体血液中高水平的LDL会诱发高胆固醇血脂症。PCSK9蛋白是能与LDL受体结合的蛋白质，研究人员发现，当利用PCSK9基因的某种突变体，使PCSK9蛋白活性增强时，会增加LDL受体在溶酶体中的降解，导致细胞表面LDL受体减少，根据这个实验现象，请设计一种治疗高胆固醇血脂症的思路。________。

【推荐1】细胞自噬是指细胞利用溶酶体选择性清除自身受损、衰老的细胞器，或降解过剩的生物大分子，供细胞回收利用的正常生命过程，如图是细胞自噬的两种途径示意图，请回答问题：

(1)细胞器溶酶体在机体的功能为____。
(2)溶酶体内水解酶的最适pH在5.0左右，但是细胞质基质的pH一般是7.2左右，这种差异能防止溢出的水解酶____。
(3)衰老的细胞器可通过途径____被清除。
(4)过剩蛋白质不与介导分子结合很难进入溶酶体，这说明介导分子与溶酶体膜受体蛋白之间能____。哺乳动物在冬眠时细胞内介导分子会____。

【推荐2】线粒体是人体细胞能量代谢最重要的细胞器。辐射、毒素、自由基等会引起线粒体损伤。细胞色素C是生物氧化过程中的电子传递体，能提高线粒体对氧的利用。线粒体损伤后细胞色素C被释放，可诱发细胞凋亡，如图所示。线粒体损伤诱发的细胞凋亡以及线粒体自噬，严重干扰细胞的正常功能。回答下列问题：
   
(1)据图分析，细胞色素C发挥传递电子的作用的场所是_____。线粒体损伤后，其外膜的通透性增强，细胞色素C被释放后与蛋白质A结合，蛋白质A催化ATP水解，使C-9酶发生_____（填“磷酸化”或“去磷酸化”）而被激活以催化一系列的反应，最终引起细胞凋亡。
(2)受损线粒体代谢中会产生更多的活性氧等自由基，自由基对细胞的损害主要表现在_____（答出2点）。线粒体损伤后，细胞自噬作用增强，其生理意义是______。
(3)线粒体对缺氧环境敏感，高海拔低氧环境会引起线粒体氧化应激平衡失调，为研究低氧环境下细胞的适应性功能改变，研究人员做了相关实验。将大鼠细胞分别用常氧（甲）、适度低氧（乙）和严重低氧（丙）处理24h后，三类细胞受损线粒体的自噬情况如图1所示；三类细胞经3-甲基腺嘌呤（自噬抑制剂）处理相同时间后，细胞内活性氧含量情况如图2所示。
   
分析图1，给予_____处理后，细胞内线粒体自噬水平最高；综合以上信息，适度低氧处理能_____，以减缓细胞损伤，使细胞适应低氧的环境。

【推荐3】脑钙化是一种与衰老相关的病理反应，也是一种遗传疾病。不同基因突变均可导致患病，研究人员对其相关机理进行了研究。
   
(1)研究遗传病的发病率及其遗传方式时，正确的方法分别是（       ）
①在人群中随机抽样调查并计算发病率       ②在人群中随机抽样调查研究遗传方式
③在患者家系中调查并计算发病率       ④在患者家系中调查研究遗传方式

A．①②

B．②③

C．①④

D．③④

(2)家族1由单基因突变（A/a）导致，分析上图可知，家族1中I-3的基因型为（       ）

A．aa

B．XaY

C．XAY

D．Aa

(3)通过检测发现，家族2中的I-2只携带了位于同一对同源染色体上的另一个致病基因t，家族2中的I-1与家族1中的I-1的基因型均为AaTT，具有两个非等位致病基因也可患病，如果不考虑基因突变，家族2中的Ⅱ-1的基因型为（       ）

A．aaTt

B．AaTt

C．Aatt

D．AaTT

(4)如果家族1中的Ⅲ-1与家族2中的Ⅲ-1结婚，请在染色体上画出子代中患脑钙化病的可能的基因型。______（不考虑交叉互换）
   
为探究A基因表达产物A蛋白在细胞中的位置，研究人员利用A蛋白的抗体和呼吸链酶IV的抗体分别加上绿色和红色荧光标记，对野生型小鼠神经元进行免疫荧光分析，将A蛋白定位于线粒体。
(5)下列有关线粒体结构的表述正确的是（       ）

A．葡萄糖不能在线粒体基质中分解，也不进入线粒体基质

B．三羧酸循环发生于线粒体内膜

C．所有真核生物的细胞都有线粒体，也都能进行有氧呼吸

D．有氧呼吸过程中，线粒体基质产生的ATP最多

(6)研究发现A基因位于人类2号染色体，由于线粒体位于细胞质，受精作用时，受精卵的细胞质主要来自母体，因此有人认为脑钙化疾病是由母亲传递给子女的。请对此说法进行评价并阐明理由__________________。
线粒体分裂新发现：一直以来，人们认为在细胞生长和细胞分裂的活跃期，线粒体通过中间分裂产生两个子线粒体（如图a）。中间分裂前后的线粒体生理状态并没有太大的差异。近日，研究人员发现，当线粒体出现损伤时会发生应激性生理生化反应，如膜电位和pH降低，Ca²⁺和活性氧自由基（ROS）增加，此时线粒体会出现外周分裂（如图b）。线粒体通过外周分裂产生大小不一的子线粒体，其中较小的子线粒体不包含复制性DNA（mtDNA），最终被自噬体吞噬，即线粒体自噬，而较大的子线粒体得以保全。
   
(7)结合资料信息，下列表述正确的是（       ）

A．与线粒体自噬密切相关的细胞器是溶酶体和内质网

B．外周分裂产生的较大的子线粒体中含有mtDNA

C．中间分裂和外周分裂均需DRP1参与，且外周分裂需要溶酶体参与

D．线粒体通过中间分裂实现了遗传物质的均分，符合孟德尔遗传定律

(8)结合图a、b分析，线粒体在逆境胁迫下，通过外周分裂达成“丢车保帅”的生物学意义是：________________。
(9)以往的研究认为，线粒体分裂频率过高是多种疾病的信号标志，通过药物抑制分裂是一种潜在的治疗方法。然而，事情可能没有那么简单，请你解释为什么没有那么简单？________________。