组卷网 > 高中生物综合库 > 生物技术与工程 > 基因工程 > 基因工程的基本操作程序 > 目的基因的获取
题型:非选择题-解答题 难度:0.85 引用次数:163 题号:4263923
下图表示利用基因工程培育抗虫棉的过程,请据图回答下列问题。

(1)若限制酶Ⅰ的识别序列和切点是——↓GATC——,限制酶Ⅱ的识别序列和切点是—G↓GATCC—,那么在①过程中,应用限制酶__切割质粒,用限制酶__切割抗虫基因。①过程在__(“体内”或“体外”)进行。
(2)为在短时间内获得目的基因,可用__技术进行扩增,其原理是_______
(3)通过②过程得到的大肠杆菌涂布在含有__的培养基上,若大肠杆菌能够生长说明已导入了普通质粒或重组质粒,反之则说明没有导入,该培养基从功能方面属于__培养基。
(4)⑤过程所用技术称为__,从遗传学角度看,根本原因是根细胞具有____

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【推荐1】紫杉醇是目前最好的抗肿瘤药物之一,但其药源植物红豆杉十分稀缺。利用红豆杉细胞培养生产紫杉醇是解决紫杉醇药源紧缺问题的有效途径之一,但大多数红豆杉细胞培养物的紫杉醇产量较低,仍不足以进行工业化应用。超表达紫杉醇合成关键酶基因是提高红豆杉细胞紫杉醇产量的有效方法。回答下列问题:
(1)Bapt基因是紫杉醇合成关键酶基因之一,可用红豆杉细胞中的相关mRNA通过______过程得到cDNA,然后用_______技术对cDNA进行扩增。扩增过程中,加热使DNA解链后再将温度降低的目的是______
(2)若欲将超表达Bapt基因(Bapt基因与强启动子的结合物)导入到红豆杉细胞的染色体的DNA上,一般可使用_______法,在构建超表达Bapi基因载体的时候,可将超表达Bapt基因插入到______上。
(3)可通过DNA分子杂交技术检测红豆杉细胞中________(填“Bapt基因”或“强启动子”)的有无,从而确定超表达载体是否导入,原因是______。为检验最终的实验目的是否达到,还应检测红豆杉细胞培养物中的________
2024-02-25更新 | 313次组卷
非选择题-解答题 | 较易 (0.85)
【推荐2】果胶酶是应用于果酒生产的重要酶制剂之一,它广泛存在于细菌、酵母菌等多种微生物细胞中。某枯草杆菌含果胶酯酶基因,某酿酒酵母中含有多聚半乳糖醛酸酶基因。研究者利用基因工程技术实现了果胶酯酶基因在酿酒酵母中表达,克服了细菌作为外源基因表达系统的缺点,并且使多种有利特性集中在同一菌株,过程如图。回答下列问题。

(1)细菌因繁殖快、细胞内存在易于分离的质粒等优点,最早用于外源蛋白的生产“工厂”,其缺点是没有___________(填细胞器名称),因而不具有对蛋白质加工修饰的功能。
(2)①过程获得的目的基因是___________。该基因除了利用PCR技术进行扩增外,还可以从基因文库中获取。基因文库包括基因组文库和cDNA文库,其中_____________含有某种生物的全部基因,且具有内含子。
(3)②过程重组表达载体除了含有目的基因外,还必须有启动子、__________________________等。启动子是_____________识别和结合的部位,有了它才能驱动DNA转录出mRNA,最终获得目的蛋白质。
(4)现利用目的基因制成放射性探针,如何利用此探针检测目的基因是否成功导入酿酒酵母?____________________________________________
2020-05-21更新 | 189次组卷
【推荐3】学习以下材料,回答(1)~(4)题。
不断发展的单克隆抗体技术
1975年,生物学家创造了以杂交瘤细胞方式制备单克隆抗体的技术。自1986年全球首个鼠源单抗药物上市以来,单抗药物治疗方向不断发展,覆盖肿瘤、心血管疾病、自身免疫病、神经性疾病和抗感染等各个领域。
最早期的单克隆抗体均为鼠源单抗,在理论研究及实践应用中发挥了重要作用。然而,鼠源单抗作为异源蛋白,在人体内活性低,稳定性差;且容易让人产生免疫反应
——人抗鼠抗体反应(HAMA)而被清除。第二代人鼠嵌合单抗,是从杂交瘤细胞分离出鼠源抗体可变区基因,与人源抗体恒定区基因连接,插入适当表达载体,转染宿主细胞表达产生的。如图,人源基因序列占整个抗体的大部分,降低了单抗的HAMA 反应。最新一代单抗是全人源单克隆抗体,氨基酸序列均由人源基因编码,进入人体内后发生超敏或排斥反应的可能性最低。目前制备全人源单克隆抗体的技术包括转基因鼠技术、抗体库技术以及单个B细胞技术等。
转基因鼠技术是将优化的人源抗体合成基因,导入到本身不能合成抗体的免疫缺陷鼠的基因组中,在对转基因鼠进行特定抗原免疫后,后续流程与传统单抗制备方法一致,产生的抗体均由插入的人源抗体基因序列编码,也保证了单抗的抗原特异性和结合亲和力。
噬菌体展示技术是抗体库技术中的一种,将所选抗体库中抗体的可变区基因,与噬菌体壳蛋白基因构成融合基因,随着子代噬菌体重组而显示在噬菌体表面,从而筛选出抗体库中与特定抗原结合亲和力高的抗体基因。
单个B细胞技术可从患者或接种疫苗人群的外周血中,根据抗原和细胞表面标记物筛选出单个B 细胞,再利用逆转录 PCR 等技术直接获得抗体合成基因。单个B细胞技术的优点是只需少量细胞就可以快速高效地筛选出潜在的单克隆抗体,在新发、突发传染病等紧急事件中,可以快速获得针对病原微生物的高亲和力抗体。

(1)上述技术中,除噬菌体展示技术外,大多需要在________箱中进行动物细胞培养。当培养瓶中贴壁生长的细胞出现________现象时,用________酶处理后进行传代培养。
(2)传统方法通过杂交瘤细胞制备单抗时,需向小鼠注射________,再从小鼠脾脏中取已免疫的B细胞,与骨髓瘤细胞混合后,加入化学试剂________诱导细胞融合。对经选择培养的杂交瘤细胞进行克隆化培养和________,多次筛选后才能获得足够数量的能分泌所需抗体的细胞。
(3)文中提到的新技术中,不需要利用动物细胞融合技术的有________;需要使用基因工程技术的有________
A. 人鼠嵌合单抗技术                         
B. 转基因鼠技术     
C. 噬菌体展示技术                            
D. 单个B细胞技术
(4)下面是利用单个B细胞技术,针对某新型病原体表面的抗原X,制备单克隆抗体的技术路径,请结合材料补充“________”上的内容。
采集康复者外周血→筛选能够结合X的B细胞→提取________________→根据抗体基因通用序列设计引物进行PCR→获得________基因→________→导入受体细胞→获得抗X的单克隆抗体。
7日内更新 | 39次组卷
共计 平均难度:一般