8 . 树突状细胞是功能最强的专职抗原呈递细胞，能有效激活初始T细胞。S靶向蛋白是一种非天然蛋白，能向树突状细胞的FcγRI受体，从面高效启动免疫应答。科研人员设计并合成了S靶向蛋白基因，经过转导，构建CHO K1工程细胞以大量生产S靶向蛋白。接着将S靶向蛋白与具有多表位的肿瘤抗原相交联，制成靶向树突状细胞的结肠癌肿瘤疫苗。该技术预期可大幅提高疫苗的效价。过程如下图所示：

回答下列问题：
(1)图中①②③④⑤所示的步骤属于______工程的主要环节。
(2)②过程为避免目的基因的反向连接，对限制酶的使用要求是______。③过程导入重组表达载体通常采用的方法是______。⑤过程需要控制的条件有______。（写出两点即可）
(3)④过程需要一定数量的S靶向蛋白基因探针，该探针可用PCR技术生产。在PCR体系中，S靶向蛋白基因的数量为b个，上游引物数∶下游引物数=1∶50。该体系扩增进行5轮循环后，上游引物刚好耗尽，则上游引物的数量等于______条。在此基础上，若再进行30轮循环扩增，此过程可生产出具有下游引物序列的单链探针数量是______条。
(4)给结肠癌小鼠注射疫苗后，预期⑥过程后续的免疫应答反应是______，以高效杀伤癌细胞。该技术给我们的启示是靶向蛋白还可应用于______。