1 . 幽门螺旋菌（Hp）感染是急慢性胃炎和消化性溃疡的主要致病因素。在患者体内采集样本并制成菌液后，进行分离培养。实验基本步骤如下。请回答：

(1)在配制培养基时，要加入尿素和酚红指示剂，这是因为Hp含有脲酶，它能以尿素为氮源；若有Hp，则菌落周围会出现_____色环带。
(2)下列对尿素溶液进行灭菌的最适方法是      灭菌。

A．高压蒸汽

B．紫外灯照射

C．75%酒精浸泡

D．过滤

(3)步骤X表示________。在无菌条件下操作时，先将菌液稀释，再将菌液滴加到培养基中央进行__________。菌液稀释的目的是为了获得_________菌落。
(4)在培养时，需将培养皿__________，放入恒温培养箱中培养。
(5)临床上用¹⁴C呼气试验检测人体是否感染Hp，其基本原理是Hp能将¹⁴C标记的_________分解为NH₃和¹⁴CO₂。

2 . 在“能分解尿素的微生物的分离与计数”活动中，下列叙述正确的是（　　）

   

A．培养微生物的培养基和器具都要进行高压蒸汽灭菌

B．可以通过逐步提高培养基中尿素的浓度，获得尿素高耐受菌株

C．以尿素为唯一氮源的培养基上长出的一定是能分解尿素的细菌

D．加入酚红作为选择培养基，筛选出尿素分解菌

3 . 金黄色葡萄球菌有很强的致病力，可引起骨髓炎等，还可能引起食物中毒。实验中下列做法错误的是（　　）

A．对接种环进行灼烧处理

B．带菌培养基必须经高压蒸汽灭菌后才能倒掉

C．接种过程在超净工作台完成，远离酒精灯，以免灼伤

D．接种后双手必须经肥皂洗净，再用体积分数为75%的酒精棉球擦拭

4 . （一）某种物质S（一种含有C、H、N的有机物）难以降解，会对环境造成污染，只有某些细菌能降解S．研究人员按照下图所示流程从淤泥中分离得到能高效降解S的细菌菌株，且细菌降解S后会在菌落外周形成透明圈。实验过程中需要甲、乙两种培养基，甲的组分为无机盐、水和S，乙的组分为无机盐、水、S和Y。
(1)实验时培养基通常采用_________的方法进行灭菌．乙培养基中的Y物质是_________。甲、乙培养基均属于_________培养基。

(2)实验中初步估测M中细菌细胞数为2×10⁷个/mL，若要在每个平板上涂布0.1ml稀释后的菌液，且保证每个平板上长出的菌落数不超过200个，则至少应将摇瓶M中的菌液稀释_________倍．培养过程中定期取样并用_________的方法进行菌落计数，评估菌株增殖状况．用平板培养细菌时一般需要将平板_________（填“倒置”或“正置”）．
(3)最后从平板中挑选_________的菌落，其降解S的能力较强。
（二）胰岛素的生产由提取动物胰岛素，发展到了利用基因工程生产重组人胰岛素。

(4)为避免目的基因任意连接和载体自身环化，应选用上图_________酶处理目的基因和载体。
(5)构建的基因表达载体除目的基因、标记基因外，还必须有_________、_________、_________等。
(6)利用奶牛设计乳腺生物反应器生产人胰岛素，为使人胰岛素基因在奶牛乳腺中特异表达，构建基因表达载体时应将目的基因与奶牛乳腺蛋白基因的启动子等调控组件重组在一起，并选用_________为受体细胞。

5 . 下列有关无菌技术，操作不规范的是（       ）

A．可将接种环贴在培养瓶的内壁上以降温冷却

B．在超净工作台操作时，必须关闭紫外灯

C．接种过程中，打开塞子前和塞上塞子后都要将瓶口或试管口在酒精灯火焰上灼烧灭菌

D．接种环和涂布器均可用高压蒸汽灭菌，使用前均需在酒精灯火焰上灼烧，冷却后再接种

6 . （一）请回答从土壤中分离产脲酶细菌实验的有关问题。
(1)LB固体培养基：取适量的蛋白胨、酵母提取物、NaCl，加入一定量的蒸馏水溶解，再加适量的__________，灭菌备用。
(2)尿素固体培养基：先将适宜浓度的尿素溶液用__________灭菌过的G6玻璃砂漏斗过滤，因为G6玻璃砂漏斗__________，故用于过滤细菌。然后将尿素溶液加入到已经灭菌的含有__________指示剂的培养基中，备用。
(3)取0.1ml的10^-4、10^-5两种土壤稀释液，分别用__________法接种到LB固体全营养培养基和尿素固体培养基上，培养48h，推测固体培养基上生长的菌落数最少的是__________。
A．10^-5稀释液+尿素固体培养基                    B．10^-5稀释液+LB固体培养基
C．10^-4稀释液+尿素固体培养基                           D．10^-4稀释液+LB固体培养基
在尿素固体培养基上产脲酶细菌菌落周围出现__________。
(4)统计10^-4稀释液接种培养后的菌落数分别是59、57、61，则样品中菌落的数量为__________个/mL，该方法测得的数值比实际值偏低的原因：__________。（考虑实验操作原因引起的细菌数目的变化）
（二）研究人员将fat-1基因与一只公兔的冻融精子在体外结合，再通过体外显微授精方式将携带有fat-1基因的精子注入到兔的卵母细胞中获得转基因胚胎，之后移植到代孕母兔输卵管内，最终得到4只转fat-1基因兔，其体内的不饱和脂肪酸比普通兔子提高了约3倍。请回答：
(5)为了得到更多的卵细胞，需要对母兔进行__________处理，若希望同时获得多个性状相同的兔子个体，可以使用__________技术。
(6)在上述转基因实验中，将fat-1基因与动物表达载体pEF-neo连接，构建pEF-fat-1重组质粒，需要的两类酶是限制性内切核酸酶和__________。
(7)在分离和培养兔子神经干细胞的过程中，当培养的神经干细胞达到一定的密度时，需进行___________培养以得到更多数量的细胞。有关该细胞培养过程，下列叙述错误的是__________。
A．在培养液中需要加入葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素、动物血清等
B．为了防止细胞培养过程中细菌的污染，可向培养液中加入适量的抗生素
C．细胞培养应在CO₂培养箱中进行，CO₂的作用是刺激细胞的呼吸
D．制备动物细胞悬浮液时，先用剪刀剪碎组织再用胰蛋白酶或胶原蛋白酶消化

7 . 在微生物培养实验中，分别采用了高压蒸汽、酒精、火焰灼烧等几种不同的处理方式，这些方式依次可用于杀灭什么部位的杂菌（　　）

A．接种环、手、培养基	B．培养容器、手、微生物菌种
C．培养基、手、接种环	D．培养容器、微生物菌种、接种环

8 . 下列操作需要在酒精灯火焰旁进行的一组是（       ）
①土壤取样       ②涂布平板       ③微生物的培养       ④配制培养基   ⑤倒平板       ⑥平板划线

A．①②③	B．③⑤⑥
C．②⑤⑥	D．②③④

9 . 细菌培养基常在121℃条件下高压灭菌锅中灭菌。如果只是在100℃条件下将细菌培养基灭菌，下列生物仍会存活的是（　　）

A．大肠杆菌

B．一种青霉菌

C．枯草芽孢杆菌的芽孢

D．沙门氏菌

10 . 无菌技术包括以下几个方面的叙述，正确的是（       ）

A．无菌技术的关键是杀灭实验室中所有的微生物

B．煮沸消毒法中100℃煮沸5～6分钟可以杀死微生物细胞和所有芽孢、孢子

C．为了防止污染，接种环经酒精灯火焰灭菌后应趁热快速挑取菌落

D．紫外线照射前，打开紫外灯和过滤风开关，灭菌30min