1 . 原位PCR技术是利用原位PCR仪，在组织或细胞中靶DNA所在的位置上进行的PCR循环扩增，通过掺入标记基因直接显色或结合原位杂交进行检测的方法。进行扩增时，反应体系中的反应成分需渗透到组织或细胞的靶DNA处才能进行扩增。PCR反应体系中需要添加一定浓度的Mg²⁺，而组织细胞间的物质会吸附Mg²⁺，使进入细胞的Mg²⁺减少。下列说法正确的是（       ）

A．PCR技术中复性是当温度下降到65℃时，两种引物与两条DNA单链结合的过程

B．反应体系中扩增的原料会依次连接到子链的5端

C．反应体系中引物的G，C碱基含量越高越好，因为越高引物结合的特异性越强

D．原位PCR反应体系中使用的Mg2+浓度要比常规PCR高

2 . 干扰素是动物或人体细胞受到病毒侵染后产生的一种糖蛋白，它是一种抗病毒的特效药。“中国干扰素之父”侯云德院士利用基因工程的方法获得了人干扰素α-1b，用于临床疾病的治疗。回答下列相关问题。
(1)获得基因工程用的干扰素基因，需先从T淋巴细胞的细胞质中获得___________，经逆转录获得cDNA，再利用___________技术扩增干扰素基因，扩增干扰素基因的前提是要有一段已知目的基因的___________，以便合成引物。
(2)利用山羊乳腺生物反应器来生产干扰素时，要将改造后的人干扰素基因与山羊乳腺蛋白基因的启动子等调控组件重组在一起，目的是___________。然后将基因表达载体导入山羊的（填“受精卵”或“乳腺细胞”）中。____________________________
(3)有人尝试让植物细胞产生干扰素，经探索发现水稻胚乳细胞作为反应器的效果比较好。在用农杆菌Ti质粒构建基因表达载体时，应将干扰素基因插入T-DNA片段________________（填“内”或“外”），Ti质粒上的T-DNA的作用是________________。检测水稻胚乳细胞中干扰素基因是否成功表达可采用的方法是。___________________________

3 . 在基因工程中，构建基因表达载体时工具酶的作用部位以及PCR扩增DNA时90摄氏度高温的作用部位是（       ）
   

A．a

B．b

C．c

D．d

4 . 科研人员将寒带地区海鱼体内的抗冻基因导入千禧果（一种番茄品种）细胞，成功培育出抗冻千禧果。下图为培育过程中使用的Ti质粒示意图，其中Vir区的基因活化能促进的加工和转移。回答下列问题：
   
(1)将抗冻基因的mRNA逆转录后，再进行PCR可获得抗冻基因，该过程中所需要的酶是________。每次PCR循环分为3步，其中所需温度最低的一步称为________，PCR扩增抗冻基因时需要添加特异性引物，目的是________。
(2)抗冻基因不能直接导入受体细胞，需要构建抗冻基因表达载体。构建抗冻基因表达载体的目的是________（答出1点）。
(3)选择图中Ti质粒构建基因表达载体时，不能选择限制酶Ⅱ切割Ti质粒，原因是________，最好选择限制酶________构建基因表达载体。
(4)为筛选成功导入抗冻基因的千禧果细胞，最好在培养基中添加________。将成功转化的千禧果细胞诱导培育成植株，最后在________条件下筛选出具有抗冻性状的千禧果植株。

5 . 干扰素(IFN)是一类蛋白质，它作用于靶细胞产生抗病毒作用，还具有抑制癌细胞生长和调节免疫功能等作用。用基因工程来研究和生产干扰素成为科学家努力的目标，下图为基因工程技术获取干扰素的三条途径。请回答下列问题：
   
(1)为了快速获得更多的干扰素基因，常采用PCR技术进行扩增，该过程用到的酶是_____。
(2)将IFN基因导入大肠杆菌一般先用_____处理大肠杆菌，使其处于感受态。图中①用到的技术为___。将IFN基因导入动物受精卵常用的方法是___。
(3)利用转基因牛生产干扰素时，需要将IFN基因与____的启动子等调控组件重组在一起；若要得到更多的乳腺生物反应器可以对图中②获得的_____阶段的早期胚胎进行分割。
(4)在胚胎移植前，需对早期胚胎进行筛选和鉴定，科研人员取囊胚的细胞，利用SRY基因（位于Y染色体上的性别决定基因）制成的探针进行____检测，将检测结果呈_____(填“阳”或“阴”)性的胚胎进行移植。
(5)利用农杆菌转化法将IFN基因导入植物细胞，常用Ti质粒作为载体的原因是____。

6 . 数字PCR技术是一种核酸分子绝对定量技术，其原理如图所示。下列有关叙述错误的是（       ）
   

A．每个反应单位中都需要加入解旋酶和耐高温DNA聚合酶

B．应根据目的基因的一段已知序列设计两种引物

C．PCR每一循环包括变性、复性和延伸三个过程

D．PCR结束后有靶分子的反应单位能检测出荧光

7 . PCR转基因检测技术被多国检测工作者使用，该技术通常包括核酸提取、核酸扩增、扩增产物检测3个步骤。某研究小组设计并完成了“转基因抗草甘膦大豆定性PCR检测”实验，请参与实验设计并回答相关问题(草甘膦为常用除草剂；转基因抗草甘膦大豆的外源基因构建图如图1所示)：
   
(PO为外源启动子、NOS为外源终止子、CP4-EPSPS为外源基因)
(1)提取DNA：取待测大豆组织裂解破碎，进行DNA提取和纯化，得到待测大豆基因组DNA。该过程的常用的试剂有EDTA、SDS、NaCl、酒精等。在研磨液中加入NaCl的目的是_________________，提取到的DNA可以用_____________试剂鉴定。
(2)DNA扩增：
①该小组拟定的引物设计如表所示，其中有一个基因的引物设计是不科学的，该基因是______________；不科学的原因是_________________________________。

基因	引物序列
PO	F-5'GGGATT-3' R-5'AATCCC-3'
NOS	F-5'GAATCCTGTTGCCGGTCTTG-3' R-5'TTATCCTAGTTTGCGCGCTA-3'
CP4-EPSPS	F-5'CTTCTGTGCTGTAGCCACTGATGC-3' R-5'CCACTATCCTTCGCAAGACCCTTC-3'

②PCR扩增：在反应体系中分别加入模板、相应引物、___________酶、__________等，在设定的PCR体系下可以特异性扩增目标DNA片段。
(3)扩增产物检测：扩增得到的PCR产物一般先通过_____________对产物进行初步鉴定.在凝胶中DNA分子的迁移速率与________________________________等有关。

8 . 二十碳五烯酸（EPA）是人体需要的一种营养物质。某实验室利用转基因技术从海洋细菌中提取了EPA合成途径的关键基因。下图表示通过PCR获取和扩增基因的部分过程。下列叙述正确的是（       ）
   

A．PCR体系中需要加入引物、原料和等

B．据图可知，可以选择引物①④或者②③

C．PCR第n次循环需要个引物

D．用于PCR的两个引物的碱基序列一般相同

9 . 下列关于利用PCR技术扩增目的基因的叙述，错误的是（       ）

A．PCR技术利用DNA半保留复制的原理，使核糖核苷酸序列呈指数方式增加

B．扩增目的基因前，需要设计可与目的基因的碱基序列互补的两种双链引物

C．基因的扩增依赖于模板、耐高温的DNA聚合酶和原料等物质

D．加热至90 ℃以上的目的是使基因的磷酸二酯键断裂

10 . COVID—19的抗原性与感染性与其表面的S蛋白（刺突糖蛋白）密切相关，现利用基因工程的方法生产相关疫苗。图甲为构建S蛋白基因表达载体的过程，图乙为重组质粒被相关酶切后的电泳结果。请回答下列问题。

(1)①过程所使用的酶为______，为保证PCR技术扩增S蛋白基因正常进行，该反应体系的主要成分有______。PCR技术中低温复性的目的是______。
(2)通过PCR技术可在cDNA分子中专一性扩增出S蛋白基因，其原因是______。PCR过程经过4次循环，需要的引物的数量是______个。
(3)构建好的重组质粒长度共2000bp，用限制酶HindⅢ及限制酶HindⅢ和BamHⅠ分别对重组质粒进行切割并电泳，结果如图乙所示，可推测BamHⅠ在重组质粒上有______个酶切位点。为使S蛋白基因在受体细胞中高效表达，需要把S蛋白基因正确插入重组质粒的______之间。