1 . 角蛋白酶（KerA）是降解角蛋白的酶类，在饲料工业中具有较大的应用前景，但天然菌株产酶量低限制了其推广应用。为了获得高效表达的KerA工程菌，研究者分别构建了大肠杆菌和毕赤酵母工程菌，并实现了异源表达。下图1为含KerA基因的外源DNA、质粒的有关信息，EcoR1、BamH1、Sal1、Xho1均为限制酶，Kan^r、Tc^r分别为卡那霉素抗性基因、四环素抗性基因。请回答下列相关问题：
(1)为了获取KerA基因，从天然菌株中提取相应的DNA片段，再通过PCR技术大量扩增，PCR技术的原理_____，前提是_____。

(2)为了形成合适的重组质粒，应该选用_____和_____限制酶切割外源DNA和质粒DNA．
(3)重组质粒导入受体细胞的成功率很低，需经筛选才能获得导入成功的受体细胞。结合图1所获得的重组质粒分析，应选择具有_____特点的细胞作为受体细胞，才有利于后续的筛选。
(4)将目的基因导入大肠杆菌时，常出现三种情况：未转化的细菌、含空载体（普通质粒）的细菌、含重组质粒的细菌。下图是KerA基因重组质粒的“工程菌”的筛选示意图：
下图2中的_____和_____（选用“A/B/C/D/E”字母作答）菌落为含有目的基因的“工程菌”。

(5)KerA基因在大肠杆菌和毕赤酵母工程菌是否能实现异源表达，需要用_____技术检测，若在二者细胞中都能实现表达，从分子水平上分析原因是_____，并且它们体内转录和翻译的过程或机制相同。但经研究发现，只有毕赤酵母工程菌表达合成的KerA可直接投入使用，分析其原因是_____。
(6)KerA在60℃以上时热稳定性差，限制了该酶的应用范围，研究人员在KerA的末端插入半胱氨酸，这不仅对酶活性影响小，且大大提高了其热稳定性。其运用到的这种现代生物技术为_____。

2 . 干扰素是动物体内合成的一种蛋白质，可以用于治疗病毒感染和癌症，但体外保存相当困难，如果将其分子上的一个半胱氨酸变成丝氨酸，就可在-70℃条件下保存半年，给广大患者带来福音。回答下列问题：
(1)蛋白质的合成是受基因控制的，因此获得能够控制合成“可以保存的干扰素”的基因是生产的关键，依据蛋白质工程原理，设计实验流程，让动物生产“可以保存的干扰素”：

①________；②_________；③________；④_______。
(2)基因工程和蛋白质工程相比较，基因工程在原则上只能生产__________的蛋白质，不一定符合____________需要。而蛋白质工程是以蛋白质分子的结构规律及其与生物功能的关系作为基础，通过_______或_______，对现有蛋白质进行_________或制造一种新的蛋白质，以满足人类的生产和生活需要。
(3)蛋白质工程实施的难度很大，原因是蛋白质具有十分复杂的______________结构。

3 . 科学家将鱼抗冻蛋白基因转入番茄，使番茄的耐寒能力大大提高，可以在相对寒冷的环境中生长。质粒上有PstⅠ、SmaⅠ、HindⅢ、AluⅠ四种限制酶切割位点，下图是转基因抗冻番茄培育过程的示意图（amp^r为氨苄青霉素抗性基因），其中①~④是转基因抗冻番茄培育过程中的相关步骤，Ⅰ、Ⅱ表示相关结构或细胞。请据图回答下列问题。

（1）在构建基因表达载体时，可用一种或者多种限制酶进行切割。为了避免目的基因和载体在酶切后产生的末端发生任意连接，在此实例中，应该选用限制酶____、___________进行切割。
（2）培养基中的氨苄青霉素会抑制番茄愈伤组织细胞的生长，要利用该培养基筛选已导入含鱼的抗冻蛋白基因的番茄细胞，应使基因表达载体Ⅰ中含有________作为标记基因。
（3）研究人员通常采用______法将鱼抗冻蛋白基因导入番茄细胞内。通常采用_________技术，在分子水平检测目的基因是否翻译形成了相应的蛋白质。

4 . 科学家从苏云金芽孢杆菌中分离出杀虫晶体蛋白基因（简称Bt基因）培育转基因抗虫棉，下列分析正确的是（　　）

A．通过PCR技术扩增Bt基因时需用TaqDNA聚合酶打开DNA双链

B．构建基因表达载体需使用限制酶、DNA连接酶

C．在棉花细胞中检测出Bt基因转录出的mRNA是培育成功的标志

D．可直接将Bt基因导入棉花细胞

5 . 为了加快优良种牛的繁殖速度，科学家采用了以下两种方法，请根据图示信息回答下列问题。

（1）试管牛和克隆牛的培育过程中均用到的工程技术有____________、_____________等。
（2）在受精的过程中，首先发生________反应，释放出的酶直接溶解卵丘细胞之间的物质。判断卵子是否受精的标志通常是___________________________。此外受体对移入子宫的外来胚胎基本上不发生______反应，这为胚胎在受体内的存活提供了可能。
（3）要培育高产奶率的转基因牛，如建立生产生长激素的乳腺生物反应器，即科学家将__________和______________的启动子等调控组件重组在一起，通过显微注射等方法导入牛的受精卵中。

6 . 耐辐射球菌对射线具有超强耐受力，其P基因突变株受射线照射后生存率显著降低。研究者利用P基因成功转化不耐辐射的酵母菌，经射线照射后检测发现，与非转基因酵母菌相比，转基因酵母菌三种抗氧化酶含量显著增加。相关叙述不合理的是（       ）

A．采用划线法将酵母菌接种到液体培养基中培养

B．酵母菌的接种、培养等操作需保证无杂菌污染

C．耐辐射球菌对射线的耐受力与P基因密切相关

D．P基因通过增强细胞抗氧化能力使细胞具有耐受力

7 . 下图为研究人员培育转黄瓜花叶病毒外壳蛋白基因（CMV-CP基因）番茄的主要过程示意图（Kan^r为卡那霉素抗性基因）。请回答：

（1）若要使CMV-CP基因在番茄细胞中表达，需要构建基因表达载体，包含_____________、启动子、目的基因、终止子、复制原点。
（2）将CMV-CP基因导入番茄细胞后，培育的番茄植株具有抗CMV感染能力，这种现象属于植物的特异性免疫，该免疫过程中抗原是_____________。
（3）过程①接种的农杆菌细胞中，Kan^r及CMV-CP基因应插入到Ti质粒的________内部，该片段具有______________________的特点。
（4）③过程形成愈伤组织的培养基中应加入适宜浓度的_____________，其目的是_____________________________。
（5）过程③、④所需的培养基为_____________ （填“固体”或“液体”）培养基。过程⑤再生植株抗性鉴定时，引物序列设计的主要依据是_____________。

8 . 土壤农杆菌含有一个大型的Ti质粒，在侵染植物细胞的过程中，其中的T-DNA片段转入植物的基因组。若想用基因工程手段获取抗旱植株，以下分析不合理的是（　　）

A．若用Ti质粒作为抗旱基因的载体，目的基因的插入位置应该在T-DNA片段内，且要保证复制起始点和用于转移T-DNA的基因片段不被破坏

B．将重组Ti质粒导入土壤农杆菌中时，可以用钙离子处理细菌

C．用含有重组Ti质粒的土壤农杆菌感染植物细胞后，可通过植物组织培养技术得到具有抗旱基因的植物

D．若能在植物细胞中检测到抗旱基因，则说明该基因工程项目获得成功

9 . 下列有关生命的物质基础和结构基础的阐述，不正确的是： （     ）

A．C、H、O、N、P是ATP、染色质、质粒、NADPH共有的化学元素

B．糖蛋白、抗体、RNA聚合酶、限制性内切酶都是具有识别作用的物质

C．线粒体、核糖体、质粒、酶等结构或物质中肯定不含有核糖参与组成的是酶

D．假设某基因在控制合成两条多肽链的过程中，产生的水分子数为a，则组成该基因的碱基个数至少为（6a+12）

10 . 用XhoI和SalI两种限制性核酸内切酶分别处理同一DNA片段，酶切位点及酶切产物分离结果如图。以下叙述不正确的是（　　）

A．如图中两种酶识别的核苷酸序列不同

B．如图中酶切产物可用于构建重组DNA

C．泳道①中是用SalI处理得到的酶切产物

D．图中被酶切的DNA片段是单链DNA