1 . 猕猴桃溃疡病是一种严重影响猕猴桃产量的细菌性病害。为获得抗猕猴桃溃疡病的转基因猕猴桃，科研人员以猕猴桃的愈伤组织（对卡那霉素敏感）为转基因受体，通过农杆菌转化法将抗菌肽基因导入猕猴桃。图1表示抗菌肽基因和卡那霉素抗性基因（nptⅡ基因）及其上限制酶酶切位点的分布情况，图2表示Ti质粒及其上限制酶酶切位点的分布情况。回答下列问题：
   
(1)限制酶能识别双链DNA分子的特定核苷酸序列，并使每条链中特定部位的两个核苷酸之间的_______断裂。限制酶主要来源于原核生物，但不会切割原核生物自身的DNA分子，推测原因是______。目的基因可随T-DNA整合到目的细胞的染色体DNA上，这体现了_______的生物学变异原理。
(2)若只用EcoRI切割目的基因和Ti质粒，会产生多种连接产物。为筛选出含有目的基因正向连接的重组Ti质粒的菌株，采用含有不同抗生素的平板进行筛选，得到了①②③三类菌落，其生长情况如下表，“+”表示生长，“-”表示不生长。根据表中结果判断，应选择的菌落是_____（填表中序号），菌落②的导入情况是_______。

项目	①	②	③
无抗生素	+	+	+
卡那霉素	-	-	+
氨苄青霉素	-	+	+
卡那霉素+氨苄青霉素	-	-	+

(3)若既要避免上述多种连接情况的发生，又要使目的基因最终能整合到猕猴桃愈伤组织细胞的染色体DNA上，最好选择限制酶_________对目的基因和Ti质粒进行切割。

2 . 酿酒酵母不能利用木糖制约了利用植物原料生产乙醇的经济效益。木酮糖激酶是木糖转化、利用的关键 酶，为提高酵母细胞中木酮糖激酶的表达量，科研人员将两种启动子与木酮糖激酶基因结合并导入酿酒酵母细胞，构建 能同时利用葡萄糖和木糖的重组酿酒酵母。下图表示相关研究过程，表是几种限制性内切酶的识别序列及切割位 点。请回答：


（1）重组质粒中终止子的作用是 ____________________。表中切割 DNA 后形成相同黏性末端的限制性内切酶是__________________，黏性末端为___________ 。       
（2）过程③使用的限制性内切酶是   _________________。过程⑤需先用 LiAc 处理酿酒酵母细胞，其目的是 _________________________________ ，使细胞处于能吸收环境中DNA的状态。
（3）结合图示分析，进行工程菌筛选时，在含四环素的培养基上长出的菌落不一定是导入重组质粒的酿酒酵母，这是因为 _____________________________________ 。
（4）研究人员对筛选得到的两种重组酵母(甲中导入启动子 A，乙中导入启动子 B)细胞中木酮糖激酶活力及发酵乙醇得率进行比较(发酵条件：1 L 15 g·L^－1 的葡萄糖和 50 g·L^－1 的木糖培养基中，120 h)结果如下表。

重组酿酒酵母	木酮糖激酶酶活力U． mg-2	葡萄糖消耗量g．L-1	木糖消耗量g． L-I	乙醇得率g/g
重组酿酒酵母甲	0． 24	14． 59	48．61	0．34
重组酿酒酵母乙	0． 56	14．98	49．39	0．39

从木酮糖激酶酶活力分析，可以得出的结论是启动子 A 的功能比启动子B____，但本实验中乙醇得率相差不大，其可能的原因是____。

3 . （1）基因工程操作过程的实现至少需要三种必要的工具：限制性核酸内切酶、运载体、_____。
（2）下列有关限制性核酸内切酶的描述，正确的是_____
A．从反应类型来看，限制性核酸内切酶催化的是一种水解反应
B．限制性核酸内切酶能识别DNA、切割DNA任一序列
C．限制性核酸内切酶的活性受温度、pH的影响
D．质粒分子经限制性核酸内切酶切割后，含有2个游离的磷酸基团．
E．限制性核酸内切酶识别序列越短，则该序列在DNA中出现的几率就越小
（3）与“限制性核酸内切酶”作用部位完全相同的酶是_____。
A．逆转录酶            B．RNA聚合酶             C．DNA连接酶            D．解旋酶

下表中列出了几种限制酶识别序列及其切割位点，图1、图2中箭头表示相关限制酶的酶切位点。

限制酶	BamHⅠ	HindⅢ	EcoRⅠ	SmaⅠ
识别序列及 切割位点	G↓GATCC CCTAG↑G	A↓AGCTT TTCGA↑A	G↓AATTC CTTAA↑G	CCC↓GGG GGG↑CCC

（4）用限制酶HindⅢ，BamH I和二者的混合物分别降解一个4kb（1kb即1千个碱基对）大小的线性DNA分子，降解产物分别进行凝胶电泳，在电场的作用下，降解产物分开，如图3所示：P．F．Productions后期制作。据此分析，这两种限制性内切酶在该DNA分子上的限制位点数目是_____．
A．HindⅢl个，BamHI 2个          　 B．HindⅢ2个，BamHI 3个
C．HindⅢ2个，BamHI 1个        　   D．HindIII和BamHI各有2个
（5）DNA分子结构的稳定性与氢键数目的多少有关．若对图1中质粒进行改造，增加其稳定性，表中哪种酶的酶切位点会增多？_____．
A． BamH I        B． HindⅢC．EcoR I            D．Sma I
（6）用图1中的质粒和图2中的外源DNA构建重组质粒，不能使用SmaⅠ切割，原因是_____。
（7）与只使用EcoRⅠ相比较，使用BamHⅠ和HindⅢ两种限制酶同时处理质粒、外源DNA的优点在于可以防止_____。

4 . 限制酶是基因工程的基本工具之一。同尾酶指来源各异，识别的靶序列也不相同，但产生相同的黏性末端的限制酶，在基因工程中应用较为广泛。几种常见的限制酶的切割位点如表所示。回答下列问题：

限制酶	BamHⅠ	SalⅠ	BglⅡ	XhoⅠ
识别序列及 切割位点

(1)表中两组同尾酶分别是__________和__________。表中限制酶切割出的为黏性末端，若限制酶切割出的为平末端，则可以用__________（选填“E.coliDNA连接酶”“T₄DNA连接酶”“E.coliDNA连接酶或T₄DNA连接酶”）。
(2)某限制酶的识别序列及切割位点为，某DNA分子上有4个该限制酶的识别位点，用该限制酶切割该DNA分子，会生成4个片段。若用BamHⅠ切割该DNA分子会生成2个片段，则该DNA分子为__________（填“环”或“链”）状结构。若用两种酶同时处理该DNA分子，则会生成__________个片段。
(3)限制酶的切制位点是__________（填化学键名称）。在基因工程中，与使用一种限制酶相比，同时使用2种同尾酶进行切割的优点有__________（写出1个）。

7 . 回答基因工程相关的问题。
棉花是重要的经济植物，其会被害虫感染，利用基因工程培育抗虫棉花是害虫防治的有效手段。胰蛋白酶抑制剂能干扰昆虫的代谢，引起昆虫死亡，但对人体无害。科学家将马铃薯胰蛋白酶抑制剂基因（Pin﹣Ⅱ）通过农杆菌导入棉花细胞，培育成了抗虫棉花。图2中Ap^r表示氨苄青霉素抗性基因，Ne^r表示新霉素抗性基因，复制原点是质粒DNA复制的起点，使其能在受体细胞中存在和遗传。箭头表示识别序列完全不同的4种限制酶的酶切位点。

(1)上述转基因技术属于　　。

A．动物基因工程	B．微生物基因工程
C．植物基因工程	D．质粒基因工程

(2)上述基因工程中，用限制酶_____切割，取下目的基因，能够和图2的质粒形成重组质粒。
(3)上述基因工程中，导入受体细胞的重组DNA分子为　　。

A．目的基因+棉花基因	B．目的基因+运载体
C．目的基因+棉花基因+运载体	D．棉花基因+运载体

(4)成功导入重组质粒的细胞会表现为　　。

A．抗氨苄青霉素，不抗新霉素	B．抗氨苄青霉素，也抗新霉素
C．不抗氨苄青霉素，抗新霉素	D．不抗氨苄青霉素，也不抗新霉素

8 . 表是几种限制酶识别序列及切割位点，图甲为某质粒的示意图，图乙是一段含有目的基因的DNA片段。请回答下列问题：


（1）基因工程中分子手术刀和分子缝合针分别是指____________________________。
（2）用图中质粒和目的基因构建重组质粒，应选用_______________两种限制酶切割，含有重组质粒的大肠杆菌不能在含_____________的培养基上生存。
（3）若要检测目的基因是否成功导入大肠杆菌，采用的检测方法是_________________。
（4）若用BamH I酶切的DNA末端与Bcl I酶切的DNA末端连接，连接部位的6个碱基对序列为_______________________________________，对于该部位，这两种酶_________（填都能都不能或只有一种能）切开。

9 . 生长激素缺乏症患者，也被称为“袖珍人”，因生长激素不足而导致生长发育障碍，身材矮小。生长激素缺乏症发病率为1/8500，是一种内分泌疾病，表现为身材矮小、生长障碍、性发育障碍、代谢紊乱、神经系统、心、肾功能异常。目前一般通过注射生长激素治疗，科研人员尝试利用奶牛乳腺生物反应器生产生长素，以保证临床用量。
（1）外源生长激素基因作为目的基因除了可以从基因组文库获取外，还可以利用从供体动物_________细胞中提取的mRNA，在逆转录酶催化下合成。
（2）下表为4种限制酶的识别序列和酶切位点，右下图为含有生长激素基因的DNA片段及其具有的限制酶切点。若需利用酶切法（只用一种酶）获得生长激素基因，最应选择的限制酶是______________。

（3）利用转基因牛、羊的乳汁提取药物工艺简单，要使用蛋白基因在奶牛乳腺中特异性表达，应将药用蛋白基因与___________等调控元件重组在一起，导入性染色体组成为_________的受精卵中。如果将药用蛋白基因转移到动物的膀胱上皮细胞中，利用转基因牛、羊的尿液生产提取药物比乳汁提取药物的更大优越性在于_________________。

10 . 玉米紫冠（A）对非紫冠（a）、非糯（B）对糯（b）、非甜（D）对甜质（d）有完全显性作用。以玉米紫冠非糯非甜为母本，非紫冠糯甜为父本进行有性杂交，得到F₁代植株。对其自交和测交，得到8个自交穗和7个测交穗。F₁自交和测交结果表现型及比例如下，请据表分析回答下列问题。

	紫冠非糯非甜	紫冠糯非甜	紫冠非糯甜	非紫冠非糯非甜	非紫冠糯非甜	非紫冠糯甜	合计（粒）
F2代结果	1180	197	486	199	269	160	2491
F1测交结果	426	124	571	136	412	563	2232

(1)F₂代出现的新类型有_____种。
(2)以上三对相对性状符合基因分离定律的是_____，你的判断依据是_____。实验结果可在_____（全部/部分）自交穗上观察到F₂代性状分离现象。
(3)F₁测交呈现1：1：1：1分离比的两对相对性状分别是_____。产生这种现象的实质是_____。
(4)F₁自交后代中紫冠甜的个体所占百分比是_____。
(5)由于玉米含赖氨酸较少，科学家采用了_____技术，将富含赖氨酸的蛋白质编码基因导入玉米体内，其在玉米植株内成功表达的标志是_____。