1 . 培育转基因生物时，首先要在体外对含有所需基因的DNA进行加工，其中包括将不同的DNA片段连接起来形成重组DNA。回答下列问题：
(1)图1中，HindⅢ、EcoRⅠ、BamHⅠ是3种不同的限制酶，且产生的黏性末端不同，GFP基因是绿色荧光蛋白基因。PCR扩增目的基因时，在两种引物的______（填“5′”或“3′”）端分别加上EcoRⅠ、BamHⅠ的识别与切割序列，该过程使用两种而不是一种限制酶的目的是______。

(2)图1获得的重组表达载体的标记基因是______。将筛选出的重组表达载体转染成纤维细胞，再利用该成纤维细胞进一步培育转基因动物。如何利用该成纤维细胞培育转基因动物，请简述实验思路：________。
(3)重叠延伸PCR技术采用具有互补末端的引物使PCR产物形成重叠链，通过重叠链的延伸将不同来源的片段重叠拼接在一起形成重组DNA，该技术成功的关键是重叠互补引物的设计。图2表示通过重叠延伸PCR技术拼接基因A和B的过程，步骤②得到的两种重叠产物中，目标产物是______，判断理由是______。其中步骤④加入的引物是______。与图1获得的重组表达载体相比，图中重叠延伸PCR技术形成重组DNA，不需要______酶。

2 . 线粒体中某基因突变可引发莱氏综合征（Leigh Syndrome）。医学工作者用来自卵子捐献者的健康线粒体取代了母亲卵子中的缺陷线粒体，随后用父亲的精子使融合后的卵子受精，诞生出世界首位“三亲婴儿”。下图为“三亲婴儿”技术路线示意图，回答下列问题：

   

(1)该技术涉及_______________等操作（至少答两项）。
(2)在促使捐献者及母亲超数排卵时，不宜长期过量使用性激素的原因是_____________。
(3)图示重组卵母细胞应培养至______（时期），才具备与精子受精的能力，人工授精前需对精子进行_____处理。
(4)“三亲婴儿”技术被认为可能有助于治疗某些不明原因的不孕不育症，并提高体外受精的成功率。医学工作者提出另一种“三亲婴儿”的技术路线：先___________________，然后将其细胞核转移到另一个细胞核已提前被移除的受精卵中。这样的受精卵也有三个遗传学亲本，并且不携带母亲的致病线粒体DNA。

3 . “（悟空）拔一把毫毛，丢在口中嚼碎，望空喷去，叫一声‘变！’即变作三二百个小猴，周围攒簇。”这是《西游记》中的一段描述，展示了中华先贤的想象力。毫毛来自体细胞，我们能用体细胞“变”出猴来吗？2017年我国科学家利用体细胞核移植技术成功培育出两只名为“中中”和“华华”的克隆猴，让神话变成了现实。下图为克隆猕猴的培育过程，请回答下列有关问题：
   
(1)哺乳动物核移植可以分为___________和___________，后者比前者难度大的原因是___________。
(2)从供体雌猕猴身体的某一部位上取体细胞并进行培养的过程中，首先对获得的动物组织可用___________酶处理一段时间，将组织分散成单个细胞。然后用培养液将细胞制成细胞悬液，放入培养皿或培养瓶内并置于适宜环境中培养。这样的初次培养称为___________。培养的细胞往往贴附在培养瓶的瓶壁上，这种现象称为___________。同时还会发生___________现象，才需要对细胞进行分瓶培养，分瓶后的培养称为___________。
(3)获得的卵母细胞需要在体外培养到___________，①过程所用的方法是___________。早期胚胎通常培养到___________阶段，通过___________技术移入代孕个体子宫内。
(4)胚胎移植的实质是___________。

4 . 生物技术与工程实践中常利用特殊的化学试剂或一定的物理刺激进行“激活”操作。下列叙述错误的是（       ）

A．将果酒用于果醋发酵时，提高温度是“激活”醋酸菌的重要条件之一

B．制备单克隆抗体时，应先利用抗原“激活”小鼠产生相应的B淋巴细胞

C．克隆高产奶牛时，获得的重构胚需要在胚胎移植后用Ca2+载体等试剂“激活”

D．在PCR反应过程中，耐高温的DNA聚合酶需要Mg2+"激活"

5 . 我国中科院的研究团队利用细胞工程和基因编辑技术，成功培育出世界上首例只有双母亲来源的孤雌小鼠和双父亲来源的孤雄小鼠，实现了哺乳动物的同性繁殖。实验流程如图所示，请回答下列问题：

(1)卵细胞转化成phFSC相当于植物组织培养中的___________过程，该过程___________（填“存在”或“不存在”）基因的选择性表达。
(2)要培育孤雄小鼠需要将精子和具卵细胞细胞核特点的ahESC同时注入去核的卵母细胞形成重构胚，在对卵母细胞进行去核时，除了显微操作外还可以采用___________（至少答出两种）等方法处理，得到的重构胚通常需要发育到___________阶段才能进行胚胎移植。
(3)不考虑致死情况，得到的孤雄小鼠性染色体组成为___________。利用胚胎分割的方法对乙进行处理得到了多只孤雄小鼠，利用这些孤雄小鼠作为实验材料进行用于医学研究的优点是____________。

6 . 克隆是英文clone或clonirg的音译，而英文clone又起源于希腊文Klone，原意是指以幼苗或嫩枝插条，以无性繁殖或营养繁殖的方式培育植物。现代生物技术中，克隆有不同层次的含义：
(1)分子层次的克隆，如DNA的复制又叫DNA分子克隆，在体外进行DNA分子克隆的PCR技术，使用的原料是________________，第一步需要将反应体系加热到_______℃，以使模板解链。
(2)细胞层次的克隆，如动物细胞培养。动物细胞培养首先需要____________的环境，还需要加入足够的营养物质，由于人们对细胞所需营养物质还没完全搞清楚，特别要注意加_________，此外还需要合适的温度、pH和气体环境。培养箱中，CO₂的主要作用是_____________________________。
(3)个体层次的克隆，主要指各种无性繁殖技术，比如植物的组织培养、动物细胞核移植。动物体细胞核移植过程中，要用物理或化学方法________受体细胞，使其完成细胞分裂和发育的进程，然后经过胚胎工程中的_________________和胚胎移植技术，可以得到克隆动物。胚胎工程中_____________技术，也可以看作是克隆的过程。