1 . 培育转基因生物时，首先要在体外对含有所需基因的DNA进行加工，其中包括将不同的DNA片段连接起来形成重组DNA。回答下列问题：
(1)图1中，HindⅢ、EcoRⅠ、BamHⅠ是3种不同的限制酶，且产生的黏性末端不同，GFP基因是绿色荧光蛋白基因。PCR扩增目的基因时，在两种引物的______（填“5′”或“3′”）端分别加上EcoRⅠ、BamHⅠ的识别与切割序列，该过程使用两种而不是一种限制酶的目的是______。

(2)图1获得的重组表达载体的标记基因是______。将筛选出的重组表达载体转染成纤维细胞，再利用该成纤维细胞进一步培育转基因动物。如何利用该成纤维细胞培育转基因动物，请简述实验思路：________。
(3)重叠延伸PCR技术采用具有互补末端的引物使PCR产物形成重叠链，通过重叠链的延伸将不同来源的片段重叠拼接在一起形成重组DNA，该技术成功的关键是重叠互补引物的设计。图2表示通过重叠延伸PCR技术拼接基因A和B的过程，步骤②得到的两种重叠产物中，目标产物是______，判断理由是______。其中步骤④加入的引物是______。与图1获得的重组表达载体相比，图中重叠延伸PCR技术形成重组DNA，不需要______酶。

2 . 阅读下列有关动物细胞核移植的资料，回答下列问题：
资料1：1958年，格登将非洲爪蟾蝌蚪肠细胞的细胞核，移到非洲爪蟾去核卵母细胞中，成功培育出性成熟个体。
资料2：2017年，某国批准了首例使用细胞核移植技术培育“三亲婴儿”的申请。全球第一位“三亲婴儿”有两个母亲和一个父亲，获得最初的受精卵的过程是将母亲的卵母细胞核植入健康女性捐赠者去核卵母细胞，再与父亲的精子结合。
资料3：2017年，我国科学家首次培育了体细胞克隆猴“中中”和“华华”。克隆“两姐妹”的体细胞来自一只流产的胎儿，“中中”和“华华”的诞生开启了灵长类动物体细胞克隆的新时代。
(1)下图是黑白美西螈核移植实验示意图，重组细胞能发育成黑美西螈依据的原理是_____；与之相比，资料1中非洲爪蟾的细胞核移植的难度明显高些，主要原因是_____。

(2)线粒体DNA缺陷与数十种人类遗传病有关，目前尚无针对线粒体遗传病的有效治疗方案；“三亲婴儿”技术是避免新生儿患上线粒体遗传病的一种解决方案。受精作用时，精子的头部入卵，尾部脱离，据此推测，线粒体遗传病的遗传特点是_____；根据资料2，简要分析“三亲婴儿”技术可避免母亲的线粒体遗传病基因传递给后代的原因：_____。
(3)资料3所述体细胞克隆猴“中中”和“华华”培育过程中，注入去核卵母细胞中的是用灭活的仙台病毒短暂处理的“流产胎儿”的_____，而不是体细胞核，用灭活的仙台病毒短暂处理的作用是_____；推测“流产胎儿”的性别是_____。

3 . 某科研团队用猪胎儿成纤维细胞构建重构胚，如图为部分实验过程。构建的克隆胚胎在激活后
分别采用0、20、40、60、80、100nM的曲古抑菌素A（TSA）处理12h，结果如表所示。回答下列问题：

   

TSA浓度（nM）	卵裂胚胎数（%）	囊胚数（%）
0	69	15
20	100	29
40	103	43
60	105	26
80	106	30
100	104	34

(1)图中细胞a是______________，过程②通常采用_____________法去除细胞核。成纤维细胞作为核供体比胚胎细胞核移植技术困难，原因是_____________。
(2)融合后的细胞在发育成囊胚期的过程中需要依次经历____________（填时期），囊胚期的_______将来会发育为胎儿的各种组织。
(3)TSA在胚胎发育过程中的作用是______________，推测当TSA浓度为________时促进胚胎发育效果较好，原因是_______________。

4 . 人的血清白蛋白在临床上需求量很大，为提高其产量，科学家通过转基因技术和克隆技术培育出能分泌血清白蛋白的奶牛，流程如下图所示，图中数字表示相关的实验操作步骤。据图回答下列问题：

   

(1)为获得人血清白蛋白基因，首先要从细胞中获取总RNA，通过__________获得cDNA，再进行PCR获得人血清白蛋白。PCR技术需要设计引物，引物的作用是___________。已知引物3'端和模板间发生错配时，不同碱基引发效率存在着很大的差异，当末位的碱基为A时，即使在错配的情况下，也能有引发链的合成，而当末位链为T时，引发链的合成效率大大降低，G、C错配的引发效率介于A、T之间。为保证PCR得到正确扩增产物，引物3'端最好选择___________碱基。
(2)同位酶是指识别相同的序列但切割位点不同的一类限制酶；同尾酶是指识别不同的序列但产生相同的黏性末端的一类限制酶。为成功构建血清白蛋白基因表达载体，且在一定程度上防止重组质粒再次被切割，则可使用__________（填“同位酶”或“同尾酶”）对DNA进行切割。人血清白蛋白cDNA中不含限制酶识别序列，为构建基因表达载体，需在PCR使用的引物的__________（填“3′”或“5′”）端上加入限制酶的识别序列。
(3)进行实验操作步骤①时，需选用___________（填“雄性”或“雌性”）的胚胎细胞。若用体细胞取代胚胎细胞，则经过步骤②后得到早期胚胎的成功率会__________，原因是___________。
(4)得到细胞B时，需将供体细胞A的细胞核注入去核的卵母细胞中，去掉卵母细胞核的原因是__________。
(5)进行实验操作步骤③时，需要定期更换培养液，目的是___________。实验操作步骤④涉及到的现代生物技术有___________（答出2点即可）。

5 . 在转基因体细胞核移植过程中，供体细胞对重构胚的正确重编程及以后的发育有着非常重要的影响。利用转hLF基因的山羊成纤维细胞进行核移植（过程如图所示），可以作为核移植奶山羊的生产。回答下列问题：

(1)转hLF基因的山羊成纤维细胞作为_____（填“供体”或“受体”）进行核移植，在进行核移植前需要进行细胞培养，通常会在培养基中加入血清，其作用是____，图中选用卵母细胞的原因是____（答一点）。
(2)过程①表示____，过程②的具体操作是____。
(3)获得的重构胚_____（填“能”或“不能”）直接移入受体山羊体内，原因是____。

6 . 樟木牛和阿沛甲咂牛原产于青藏高原，是世界珍稀地方黄牛品种。科研人员采集了樟木牛和阿沛甲咂牛的耳组织，建立了成纤维细胞系，利用体细胞核移植技术，制备了早期胚胎，将胚胎移植到代孕母牛中，经过足月的妊娠，获得了8头克隆牛，这是世界首例克隆西藏濒危牛。获得克隆牛的过程如图所示。回答下列问题：

(1)细胞①取自西藏濒危牛的耳组织细胞，这样取材的好处是________（答出1点）。
(2)卵母细胞采集后要在体外培养到__________期，通过_________法使细胞①与去核卵母细胞融合，形成重构胚，再用_________（答出具体的2种方法）等方法激活重构胚，使其发育成早期胚胎，其中细胞②的遗传物质来自________。
(3)胚胎移植技术的实质是_________。为一次获得多个具有同种遗传物质的个体，可对_________时期的胚胎进行_____________，该操作的注意事项是__________。

7 . 阿拉伯马原产于阿拉伯半岛，该马对世界上许多优良马种的形成起着重要作用。下列措施不可以加快阿拉伯马优良品质遗传的是（　　）

A．注射孕激素以超数排卵

B．将囊胚的内细胞团均等分割

C．使用去核卵母细胞促进体细胞核全能性的表达

D．将体外得到的早期胚胎移入受体子宫内

8 . 2023年9月20日，全球第二例转基因猪心脏成功移植到人体。该转基因猪是通过成纤维细胞克隆培养的，体内10多个基因经过了编辑。下列相关叙述错误的是（       ）

A．需利用基因编辑技术敲除猪成纤维细胞内引起人体免疫排斥有关的基因

B．将编辑后的猪成纤维细胞核移植到猪去核卵母细胞中并用电刺激促进融合

C．融合后的重组细胞需要在CO2培养箱中完成早期胚胎培养

D．挑选发育良好的原肠胚移植到同期发情的母猪体内继续发育直至分娩

9 . 一对夫妇都是O 型血，通过“试管婴儿”技术却生下一个A型血的孩子。经检测，作为独生子的丈夫被确诊为“异源嵌合体”(指身体中存在来自不同受精卵的细胞群)，该孩子的血型与“异源嵌合体”有关。下列叙述正确的是（       ）

A．“试管婴儿”的培育过程涉及细胞核移植、体外受精等技术

B．“试管婴儿”与“克隆动物”的原理相同，不会面临伦理问题

C．该丈夫可能是在胚胎期“吸收”了异卵双生兄弟的早期胚胎

D．可将2个囊胚的内细胞团与滋养层交换重组，构建“异源嵌合体”

10 . 体细胞与受精卵相比，细胞核中的DNA基本相同，但表观遗传修饰不同，因此基因表达也有所差异，于是体细胞细胞核转移人去核卵母细胞后，无法正常“指挥”生长发育过程。研究人员将组蛋白去甲基化酶的mRNA注入了图中M细胞，发现胚胎的发育率和妊娠率有所提高。下列相关叙述错误的是（       ）

   

A．过程a表示核移植，过程c可以通过电融合法获得重构胚M

B．猴B提供的卵母细胞不需要进行获能，但是需要培养到MⅡ期

C．图中克隆猴的大多性状与猴A相同，代孕猴不会将其遗传信息传递给克隆猴

D．胚胎发育率提高的原因是去甲基化酶的合成增加，胚胎发育相关基因的甲基化提高