1 . 体细胞核移植已经成功克隆了多种哺乳动物，但成功率很低。研究表明一定浓度的TSA（曲古抑菌素A）能提高克隆胚胎的囊胚发育率及克隆后代的存活率。为了优化TSA的处理方案，科研人员研究了TSA浓度及处理时间对猪核移植胚胎体外发育的影响，其基本操作过程如下，过程①中添加TSA。请据下图回答问题：

（1）在收集卵母细胞前对猪使用促性腺激素处理的目的是 _______________ ，收集的卵母细胞应培养到 _______________ 期进行去核，去核的同时并将 _______________ 去掉。
（2）过程①除加入激素、氨基酸、维生素等营养物质外，还需加入 _______________ 等天然成分，培养的气体中应控制5%左右的CO₂，其目的是 _______________ 。
（3）在进行过程②操作前应对代孕母猪进行 _______________ 处理，使生殖器官处于相同的生理状态。
（4）下表1表示实验一（不同浓度TSA处理重组细胞12h）的实验结果，下表2表示在实验一基础之上做的实验二（某浓度TSA处理重组细胞12h和24h）的实验结果，实验二所用TSA的浓度是 _______________ 表2数据表明 _______________ 有助于提高猪核移植胚胎的发育潜能。
表1 TSA浓度对猪核移植胚胎发育的影响

浓度（nmol·L-1）	重复次数	重组细胞数	卵裂胚胎数	囊胚数
0	4	115	96	15
20	4	124	100	29
40	4	121	103	43
60	4	123	105	26
80	4	120	106	20
100	4	120	104	34

表2 TSA处理时间对猪核移植胚胎发育的影响

时间（h）	重复次数	重组细胞数	卵裂胚胎数	囊胚数
0	3	140	104	19
12	3	141	101	23
24	3	137	106	20

2 . 雌性哺乳动物在早期胚胎发育过程中 1 条 X 染色体会发生整体范围内的沉默（“非逃逸”基因转录活性被抑制），X 染色体失活（XCI），仅有少数“逃逸”基因仍能正常表达。XCI能保证雌、雄间 X 染色体上基因表达水平的一致，也会造成体外受精胎儿性别比例的失衡。
(1)为制备体外受精（IVF）的胚胎，研究人员采用超数排卵方法采集小鼠______期卵母细胞，另一方面，将成年健康公鼠的精子在体外条件下进行______处理，将二者置于适当的培养液中完成体外受精。收集早期胚胎，移植到经过______处理的代孕母鼠中，获得的胚胎含有______（填“单”“双”或“三”）亲的遗传物质。
(2)研究人员对体外受精胎儿性别进行鉴定，表中数据显示正常胎儿性别比例（雄/雌）______自然生产（IVO）胎儿的性别比例。

组别	胚胎数	活仔率（%）	雄/雌
自然生产（IVO）	81	56.25	1.08
体外受精（IVF）	82	45.58	1.48

(3)为进一步揭示体外受精的胎儿性别比例失衡的原因，研究人员剖取第 7.5 天的小鼠胚胎进行胎儿发育情况统计，结果如图 1：

①结果显示 IVO 组形态异常的胎儿的雌、雄比率相当，而在 IVF 组中，__________________。
②研究人员收集不同组别的胚胎细胞，定量检测具代表性的“非逃逸”基因，结果显示这些基因的表达在 IVF 雌性胚胎中显著______（填“低于”“等于”或“高于”）IVO 雌性胚胎，说明 IVF雌性胚胎 XCI 不足。
③已有研究表明，XCI 高度依赖激活因子 RNF12，研究人员利用免疫荧光技术检测 RNF12 蛋白的表达量如图 2，结果为________________________。

(4)综上所述，XCI 造成体外受精的胎儿性别比例失衡的可能原因是________________________。

3 . 雌性哺乳动物在早期胚胎发育过程中1条X染色体会发生整体范围内的沉默（基因转录活性被抑制），仅有少数“逃逸”基因仍能正常表达，这一生理过程称作X染色体失活（XCI）。XCI能保证雌、雄间X染色体上基因表达水平的一致，也造成体外受精胎儿性别比例的失衡。
(1)为制备体外受精（IVF）的胚胎，研究人员采用超数排卵方法采集小鼠____________期卵母细胞，另一方面，将成年健康公鼠的精子在体外条件下进行__________处理，将二者置于适当的培养液中完成体外受精。收集早期胚胎，移植到经过__________处理的代孕母鼠中，获得的胚胎含有__________（单/双/三）亲的遗传物质。
(2)研究人员对体外受精胎儿性别进行鉴定，表中结果显示胎儿性别比例（雄/雌）__________（选填“高于”、“等于”或“低于”）自然生产（IVO）胎儿的性别比例。

组别	胚胎数	活仔率（%）	雄/雌
IVO	81	56.25	1.08
IVF	82	45.58	1.48

(3)为进一步揭示体外受精的胎儿性别比例失衡的原因，研究人员剖取第7.5天的小鼠胚胎进行胎儿发育情况统计，结果如图1。

①结果显示IVO组雌、雄胎儿形态异常比率相当，而在IVF组中，__________。
②研究人员收集不同组别的胚胎细胞，定量检测具代表性的“非逃逸”基因，结果显示这些基因的表达在IVF雌性胚胎中显著________（选填“高于”、“等于”或“低于”）IVO雌性胚胎，说明IVF雌性胚胎XCI不足。
③已有研究表明，XCI高度依赖激活因子RNF12，研究人员利用免疫荧光技术检测RNF12蛋白的表达量如图2。

结果显示_____________________________________。
(4)综上所述，XCI造成体外受精的胎儿性别比例失衡的可能原因是体外受精过程引发小鼠部分雌性胚胎_______________，引发________________，导致雌性发育异常及雄/雌比例升高。

4 . 绵羊虽是第一种体细胞克隆成功的哺乳动物，但该技术体系仍然存在效率低下的问题，体外培养体系对绵羊体外胚胎发育至关重要。已有研究表明，在胚胎培养液中添加维生素C可显著提高猪体细胞克隆胚胎囊胚率，但不知对绵羊克隆胚胎囊胚率是否有影响，某兽医研究所对此进行了研究。下图为实验过程中获得重组细胞的大致过程，回答下列问题：

（1）图示实验二属于___________________移植，收集的小尾寒羊卵母细胞应培养到_______________________________（时期）进行去核，去核实际操作是用微型吸管吸出_________________________。
（2）下表分别为实验一和实验二在胚胎培养液中加入维生素C后的相关实验结果：
实验一：不同浓度维生素C对绵羊孤雌胚胎发育的影响

维生素C浓度/（µmol•L-1）	重复次数	胚胎总数	卵裂率	桑椹胚率（桑椹胚数/卵裂数）	囊胚率（囊胚数/卵裂数）
0	3	120	82.80	26.47	15.73
50	3	141	82.37	28.60	20.92
100	3	99	83.89	21.70	14.34
200	3	80	85.56	22.61	12.29

实验二：维生素C对绵羊体细胞克隆胚胎发育的影响

维生素C浓度/（µmol•L-1）	重复次数	胚胎总数	卵裂率	桑椹胚率（桑椹胚数/卵裂数）	囊胚率（囊胚数/卵裂数）
x	3	70	83.93	28.89	14.96
0	3	76	87.05	22.53	9.47

①题图中“孤雌激活处理”的实质是_________________________，进而能发育成早期胚胎，以便进行实验一。
②据表中数据可知，进行实验一可以为实验二提供_________________________，实验二中“x”处数据应为_________________________。
③综合实验一和实验二结果可说明_________________________。

7 . 有资料显示男性不育的比例逐年增加。临床上确定男性不育的原因前需对其精液进行多项指标的检测，如下表所示。

精液量	pH	液化时间	每毫升精液精子数	精子畸形率死精率	精子活力（前向运动精子定量）
2~6mL	7.2～8.6	约30min6000万~2亿	≤30%	≤50	第1小时：≥60% 第2小时：≥50%

请回答下列问题：
(1)正常精细胞形成精子的过程中，细胞的很多结构退化消失，但保留了大量线粒体，因为线粒体可以合成精子运动所需的（       ）。

A．乙醇

B．ATP

C．胰岛素

D．淀粉

(2)表中统计精子畸形率和精子活力的意义是什么？______。
(3)受精时只有一个精子和卵子融合，那为什么男性的精液中精子数还要满足一定数量才可育？______。
(4)若某男性的精子数量少且成活率低，如何借助辅助生殖技术拥有自己的子女？______。

8 . 人溶菌酶能分解细菌的细胞壁，是抗生素的替代品。科学家培育出转入溶菌酶基因山羊，期望从其乳汁中提取人溶菌酶，过程如图所示，其中编号①～⑨表示过程。质粒S上的基因Leu能控制合成亮氨酸（山羊的必需氨基酸），基因GFP能控制合成绿色荧光蛋白。四种限制酶的识别序列及切割位点见下表。回答下列问题：

限制酶	BamHⅠ	BglⅡ	HindⅢ	XbaⅠ
识别序列和切割位点	G↓GATCC	A↓GATCT	A↓AGCTT	T↓CTAGA

   
(1)过程①通过PCR技术扩增目的基因，反应溶液中加入Mg²⁺的作用是____________________；扩增过程中，变性后温度下降到50℃的目的是____________________。
(2)过程②要选择合适的限制酶切割含目的基因的DNA片段，应选用的表中的两种限制酶是____________________。
(3)为成功筛选出含重组质粒T的成纤维细胞．质粒S中用作标记基因的是____________________。将成纤维细胞培养一段时间后观察，__________（填“保留”或“淘汰”）有绿色荧光的受体细胞。
(4)过程⑨通常将发育至____________________的早期胚胎移入受体。为了从转基因羊的乳汁中提取人溶菌酶，选用重组质粒T的受体细胞应是____________________。

9 . 不同动物受精卵发育及其进入子宫的时间有明显的差异。下表为几种动物受精卵发育及其进入子宫的时间表，请据表判断，下列叙述错误的是（       ）

动物种类	受精卵发育的时间/h					进入子宫时受精卵的发育天数和发育阶段
	2细胞	4细胞	8细胞	16细胞	桑葚胚	天	发育阶段
小鼠	24～38	38～50	50～60	60～70	68～80	3	桑葚胚
绵羊	36～38	42	48	67～72	96	3～4	16细胞
马	24	30～36	50～60	72	98～106	6	？

注：马为排卵后时间，其他动物为交配后时间。

A．表中“?”代表胚胎发育阶段至少处于囊胚阶段，表中马的胚胎在进入子宫时发育程度最高

B．将体外培养的小鼠胚胎移植到母体子宫时，应选择至少处于桑葚胚阶段的胚胎

C．动物的体内受精和胚胎发育的研究为胚胎工程提供了理论基础

D．受精卵早期分裂时，胚胎中细胞数目不断增加，胚胎的总体积不断增加