12. 人乳铁蛋白(hLF)广泛分布于乳汁等外分泌液,初乳中含量较高,对细菌、真菌和病毒等都有抑制作用。研究人员开展人乳铁蛋白基因乳腺特异性表达载体构建及转染研究,主要流程如图,图中AseI、NheI、SalI、BamHI代表相关限制酶切点,neo
r为新霉素抗性基因,BLC基因为β-乳球蛋白基因,GFP基因为绿色荧光蛋白基因。请回答:
(1)过程①的基本原理是先以人乳腺细胞总RNA为模板,通过逆转录合成cDNA(互补DNA),再通过PCR技术扩增相应的DNA片段—hLF基因。但是过程①中,不能从人肌肉细胞中提取RNA用于RT-PCR,这是因为
_____,在RT—PCR过程中,加入的引物需在
_____端添加
_____两种限制酶的识别序列,以便于hLF基因插入pEB质粒中。
(2)过程③中pEBL质粒经脂质体介导进入山羊乳腺上皮细胞依据的原理是
_____。
(3)将转染后的山羊乳腺上皮细胞先置于含新霉素的培养液中培养,能够存活的细胞应该是导入了
_____的细胞,再利用荧光显微镜观察山羊乳腺上皮细胞是否有
_____以筛选出转染成功的细胞。
(4)科研过程中,可以用PCR技术检测受体细胞中的染色体DNA上是否插入了hLF基因或检测
_____,还可以用
_____技术,检测hLF基因是否翻译出人乳铁蛋白。