【推荐1】纤维素为白色、无气味的纤维状结构物质，不溶于水，也不溶于一般有机溶剂，而纤维素分解菌能够产生纤维素酶分解纤维素。下表为鉴别纤维素分解菌的培养基配方，下图为培养菌落的染色结果，根据以下设问，回答相关问题。                                                                                               

CMC—Na	酵母膏	KH2PO4	琼脂	土豆汁
5g~10g	1g	0.25g	15g	100ml

   

（1）由配方表可知，培养微生物通常需要________、_________、水、无机盐和生长因子五类成分。从土壤中分离纤维素分解菌，最好选择在富含__________的环境中采集土样。
（2）参考上图，在筛选纤维素分解菌的过程中，通常用__________染色法，这种方法可通过是否产生___________________来对纤维素分解菌进行初步筛选，因该染料并不和纤维素水解后的______________和葡萄糖发生颜色反应。
（3）某研究小组培养纤维素分解菌，接种时应通过__________法，才可得到上图所示结果。若已知2菌落中为淀粉分解菌，而1和3两种菌为纤维素分解菌或色素分解菌。请你设计一个简便的方法来鉴别1和3。________________________________。

【推荐2】α-淀粉酶的耐热性很强，在一定的条件下，温度提高到93~95℃仍能保持足够高的活性，因而被广泛地应用于食品加工中。自然界中耐高温的α淀粉酶主要由地衣芽孢杆菌产生。回答下列问题：
（1）从土壤中分离地衣芽孢杆菌时，常从面粉厂周围取土样，其原因主要是此处土样中__________。配制培养基时，灭菌与调节pH的先后顺序是______________________________。
（2）筛选地衣芽孢杆菌时可选用平板划线法或__________进行接种。对新配制的培养基灭菌时所用的设备是__________。实验前需要对超净工作台进行____________________处理。
（3）筛选地衣芽孢杆菌的培养基中，唯一的碳源物质是__________。通过向培养基表面滴加碘液，挑选出透明圈直径与菌落直径比值大的单菌落，以获得____________________的菌种进行扩大培养。

【推荐3】番茄红素是一种脂溶性非挥发色素，可以从番茄皮中提取，革兰氏阴性菌中也含有能自身合成番茄红素的一些菌种。大多数革兰氏阳性菌都对青霉素敏感，而革兰氏阴性菌则对青霉素不敏感但对链霉素敏感。
（1）从番茄皮中提取番茄红素常采用萃取的方法而不用蒸馏法，理由是___________；萃取常采用石油醚等有机溶剂为，考虑的主要原因是____________________________和____________________________。
（2）为获得能够产生番茄红素的革兰氏阴性菌，首先要配制加入___________（青霉素/链霉素）的培养基，划线接种所用的工具是______________________________________________。
（3）在接种之前要随机选取若干灭菌后的平板先培养一段时间，目的是________________________。
（4）平板划线法总是从上一次末端开始，理由是_________________________________。

【推荐1】某兴趣小组研究使用公筷对餐后菜品细菌数量的影响，实验选用凉拌黄瓜、盐水虾、干锅树菇3道菜，每道菜均分为3盘，一盘使用公筷，一盘不使用公筷，还有一盘不食用，实验者分别使用公筷和不使用公筷吃3道菜，同一实验者吃同一道菜的次数必须相同，实验流程如图所示。请据图回答：

(1)图示流程中，应使用________________对样品进行稀释，接种时所用的接种工具是________________。对培养基X进行灭菌时，通常使用________________法。
(2)图中存在“冷藏”操作，进行该操作的目的是________________________________。实验结束后，培养基应进行________________处理再丢弃。
(3)实验结果如表所示：

菜名	总菌数（cfu/kg）
	餐前	餐后
		公筷	非公筷	未食用
凉拌黄瓜	14000	16000	45000	14500
盐水虾	135	150	220	140
干锅茶树菇	30	45	530	40

结合生物学知识及常识分析，筷子上的微生物可能来自________________（答出两点）；与凉拌黄瓜组相比，盐水虾和干锅茶树菇两组的总菌数较少的主要原因是________________________________。基于上表和该兴趣小组的实验课题，可以得出的结论是________________。

【推荐2】接种疫苗是预防传染病的一项重要措施，乙肝疫苗的使用可有效阻止乙肝病毒的传播，降低乙型肝炎发病率。在乙肝病毒（HBV）的结构蛋白中，用来制备疫苗的主要是HBsAg蛋白（乙肝病毒表面抗原，一种病毒蛋白）。目前HBsAg基因已在生物体系中成功表达。如图表示用农杆菌转化法培育转基因番茄，生产乙肝疫苗的技术路线。请回答下列问题。

(1)利用PCR技术获取HBsAg基因片段时，需要用到我国台湾科学家钱嘉韵首先分离出的DNA聚合酶，其作用是______。在PCR反应过程中，复性时，图2中的引物______（填字母）与DNA单链相应互补序列结合。通常采用______来鉴定PCR的产物。
(2)图1中过程①需要用到的限制酶是______。这样形成的重组质粒中，标记基因是______。
(3)纯化培养过程②得到的含重组质粒的农杆菌时，须使用______（选填“液体”或“固体”）培养基，接种前该培养基需要采用______灭菌法灭菌。
(4)利用植物组织培养技术将转基因番茄细胞培育成试管苗的过程中，培养基中需要加入的植物激素是______，以诱导番茄细胞脱分化和再分化。
(5)现有健康、生理状态基本相同的未免疫小鼠若干，若要从分子水平检测转基因番茄作为口服乙肝疫苗是否有效，请写出实验思路并预期结果。

【推荐3】乳链菌肽（Nisin，由34个氨基酸组成）是由某些乳酸乳球菌产生的天然生物活性抗菌肽。Nisin能有效地杀死或抑制引起食品腐败的革兰氏阳性菌，对人体无毒，且易被人体消化道内的蛋白酶水解。研究发现：将含有杀菌物质的滤纸片放到滴有细菌培养液的固体培养基上，经过培养，杀菌物质杀死细菌后会在滤纸片周围形成抑菌圈。
(1)现从新鲜牛奶中获得多株产Nisin的菌株，欲筛选并扩大培养抑菌作用最强的菌株，研究人员将_____涂布于平板上，将大小相同的灭菌的滤纸片均匀地摆放在培养基表面，在其上分别滴加等量备选菌株培养液的上清液，对比观察选取_____即为抑菌作用最强的菌株。
(2)研究人员要通过发酵工程生产Nisin，扩大培养前需对抑菌作用最强的菌株进行纯培养，微生物的纯培养是指_____。
(3)人们一直都试图将Nisin当作一种抗生素用于医疗方面，由于_____和溶解度不高，以及在其它方面存在着一些缺陷，目前还不适于药用。据题推测Nisin在食品生产中的应用价值是_____。

【推荐2】反刍动物，如牛和羊，具有特殊的器官—瘤胃，在瘤胃中生活着多种能分解纤维素的微生物。某科研小组欲从牛瘤胃中分离出纤维素分解菌，实验流程如下：
①从屠宰场获取新鲜瘤胃液，短暂离心后过滤；
②将滤液接种到含羧甲基纤维素钠（一种凝固剂）和染色剂A的培养基上进行培养；
③将从步骤②获取的目标菌落接种到以滤纸条为唯一碳源的液体培养基中，摇床悬浮培养5天，观察滤纸的分解效果；
④取分解效果最好的几片滤纸，将上面的菌种接种到固体培养基上，观察菌落生长情况。回答：
(1)染色剂A为______，步骤②接种前需要用______法对培养基进行灭菌，步骤②培养的目的是______。
(2)步骤③中，应选择步骤②中______的菌落进行接种，原因是______。
(3)根据步骤④的实验结果，课题组得出牛瘤胃中有多种纤维素分解菌的结论，支持他们结论的实验结果应该是______________________。
(4)研究发现，玉米秸秆中的纤维素经充分水解后的产物可被酵母菌利用发酵生产酒精。培养酵母菌时，该水解产物为酵母菌的生长提供______。
(5)称取1.0g某样品转入99mL无菌水中，再经100倍稀释后获得低密度菌悬液。分别取0.1mL菌悬液涂布在多个固体培养基上，若经培养后平均长出了46个纤维素分解菌菌落，则每克样品中约含纤维素分解菌______个。

【推荐3】工业生产中可以一种霉菌来生产β-胡萝卜素，图1表示该霉菌的菌体生物量与发酵时间的关系，图2表示生产样品与标准样品的层析结果比较。

(1)胡萝卜素可以治疗缺乏维生素____引起的疾病，用于工业生产的霉菌本来不含合成β-胡萝卜素的相关基因，需要通过____________，才能获得用于生产β-胡萝卜素的菌种。
(2)在工业生产中，培养基为____________（按物理形态划分），接入菌种前，应对培养基进行_________。
(3)从图1可知，在第________h，菌体增长最快，菌体生物量达到最大值后开始下降，为保证生产效率，可以采取_______________________________________________的措施。
(4)样品层析所用的层析液最好选用____________，从图2可知，胡萝卜素的在层析液中的溶解度比杂质____。

【推荐1】凝乳酶是奶酪生产中的关键性酶，它能水解多肽链中苯丙氨酸和甲硫氨酸之间的肽键以促使牛奶凝结来生产奶酪；提取凝乳酶的传统方法是从未断奶小牛的胃黏膜里提取，此方法产量低且昂贵。如今科学家运用基因工程技术，将编码该酶的基因转移到了微生物细胞中，实现了牛凝乳酶的批量生产。图1和图2表示质粒和凝乳酶基因的结构示意图，如表为不同限制酶识别的碱基序列及切割位点。回答下列相关问题：

限制酶	PvitⅡ	KpnI	EcoRI	PstI	BamHI	Sau3AI
识别序列	CAG↓CTG	G↓GTACC	G↓AATTC	CTGC↓AG	G↓GATCC	↓GATC

(1)获取小牛胃黏膜的单细胞需要将剪碎的小牛胃黏膜用____处理；对获得的单细胞进行培养时需要定期更换培养液，目的是____。从培养的牛胃黏膜细胞中提取____，再逆转录形成DNA，再以此DNA为模板利用PCR技术获得凝乳酶基因。
(2)将图2中的凝乳酶基因与图1质粒构建基因表达载体时，最好选择____切割目的基因和质粒，并利用____（只写1种）连接酶进行连接。若将该基因表达载体导入受体细胞后，凝乳酶基因能稳定存在但不能表达，原因可能是____。
(3)若将凝乳酶基因导入酵母菌细胞，并利用发酵工程生产凝乳酶，进行该工程时，应先对含有凝乳酶基因的酵母菌进行____，再进行接种，发酵过程要严格控制____（写出1点）等发酵条件。

【推荐2】味精的主要成分是谷氨酸的钠盐，目前主要利用谷氨酸棒杆菌发酵生产谷氨酸。为了提高谷氨酸产量，科研人员不断优化培养条件，以获得最佳发酵工艺。回答下列问题：
(1)纯种菌株的获取：采集5cm深的土壤样品，与适量的无菌水充分混合形成土壤稀释液，采用___________法将菌液接种到细菌选择性培养基平板上，通过观察菌落形态，从平板上挑取生长较好的谷氨酸棒杆菌的________________，转入培养基临时保存。
(2)菌株的培养：将斜面培养基上保存的谷氨酸棒杆菌接种到______（物理状态）培养基中，32℃摇床培养，以达到活化菌株的目的。每隔一段时间利用______________，在显微镜下计算样品中谷氨酸棒杆菌的数量，了解菌株的生长周期，并通过初筛、复筛，确定谷氨酸棒杆菌菌株具有高产谷氨酸的能力。
(3)发酵条件的优化：在基础发酵培养基的基础上，科研人员利用不同碳源种类（葡萄糖、蔗糖）、无机氮源种类（尿素、硝酸钾）、初始pH（5.5、6.0、6.5、7.0、7.5、8.0、8.5）探究谷氨酸棒杆菌产生谷氨酸量的联合影响，实验结果如下图。
   
根据实验结果，选择__________组合获得的谷氨酸产量最高，这可作为最优发酵条件。此外，温度对发酵的影响是多方面的，原因是_______（写出2点）。
(4)谷氨酸棒杆菌的发酵：为了满足工业大规模发酵的需要，往往在接种发酵之前，对菌种进行____________。
(5)谷氨酸的获得：发酵结束后，需对发酵液的产物进行提取、分离、______，获得的谷氨酸需要进行质量检查，进一步加工合格后才能成为产品。

【推荐3】防御素是一类富含二硫键的阳离子型多肽，广泛分布于真菌、植物与动物中，是生物免疫系统中的重要调节分子。β﹣防御素是一种由H基因编码的抗菌肽，获得了β﹣防御素。回答下列问题：
(1)为获得β﹣防御素基因，研究者利用致病细菌的脂多糖（LPS）刺激结肠癌细胞株提高β﹣防御素的表达量，经过________后，作为模板进行PCR扩增。PCR产物常采用_______来鉴定，鉴定后进行测序。测序结果与______数据库中的公开数据进行比较，进而得到正确的β﹣防御素基因。
(2)本实验选用毕赤酵母表达载体pPIC9K（如图），扩增目的基因时设计的1对引物为P1（5′ATCGAATTCATGGGAAGTCATAAACACATTAGA3′）和P2（5′TATAGCGGCCGCCTATTTCTTTCTTCGGCAGCAT3′）。

①本实验中引物的作用是__________（答出2点即可）；
②部分限制酶识别序列及切点如下表，结合图中限制酶切点与引物，推测本实验酶切时________，采用双酶切法的优势是_________（答出2点即可）。

限制酶	识别序列及酶切位点
BglⅠ	5′…A↓GATCT…3′
EcoRⅠ	5′…G↓AATTC…3′
SnaBⅠ	5′…TAC↓GTA…3′
SacⅠ	5′…GAGAT↓C…3′
AurⅠ	5′…C↓CTAGC…3′
SalⅠ	5′…G↓TCGAC…3′
NotⅠ	5′…GC↓GGCCGC…3′

(3)毕赤酵母表达系统最大的优点是可对β﹣防御素______（答出2点即可），直接表达出具有生物活性的产品。
(4)毕赤酵母表达系统发酵结束后，采取适当的______措施来获得产品。