【推荐2】我国科学家发现拟南芥中的光敏蛋白（PhyA）能在红光（660nm）照射下与其伴侣蛋白（FHY1）形成二聚体，并在远红光（730nm）照射下解离。根据这一特点，研究人员构建了基于PhyA-FHY1的转录激活系统，将PhyA与某些基因的启动子结合蛋白融合表达（产生融合蛋白A），将FHY1和另一种转录激活蛋白融合表达（产生融合蛋白B）。在红光（660nm）刺激下，融合蛋白A和融合蛋白B可结合形成复合体并促进RNA聚合酶与DNA结合，从而启动特定基因的表达。请根据题干信息及所学内容回答下列问题：
(1)融合蛋白是指由两个或多个不同蛋白质连接而成的单一多肽链。要实现融合蛋白在细胞内表达的前提是使用工具酶____________和___________将两种蛋白质的基因拼接在一起。
(2)使用____________反应可将融合后的目的基因进行扩增，该反应需在一定的缓冲液中进行，需提供目的基因、__________、__________和耐高温的DNA聚合酶。缓冲液中添加Mg²⁺的原因是__________。扩增完成后常用___________来鉴定反应的产物。
(3)研究人员将PhyA-FHY1的转录激活系统与小鼠胰岛素基因相关联后，培育出小鼠工程化细胞。将这些细胞移植至小鼠皮下后即可分别通过___________方式开启和关闭细胞内胰岛素基因的表达，并通过_______________来控制其胰岛素生成量。

【推荐1】半乳糖醇可作为新型甜味剂应用于糖果、面包等食品工业。酿酒酵母长期用于食品加工业，具有很强的食品安全性与大规模发酵能力。为构建酿酒酵母工程菌株生产半乳糖醇，回答下列问题：
(1)目的基因的获取与重组质粒的构建。从______中检索获得来自不同生物的多种木糖还原酶基因序列。为将木糖还原酶基因(如图甲)定向连接至pRS313质粒(如图乙)内，需在引物1、2的 A___(填“5'”或“3'”) 端分别引入限制酶_______(填字母) 的识别位点，由相应生物提供模板，经PCR 扩增得到木糖还原酶基因。对目的基因和pRS313质粒进行双酶切处理，经DNA连接酶连接得到重组质粒。

注：氨苄青霉素作用于细菌的细胞壁，抑制细菌细胞壁的合成。
(2)重组质粒的扩增。将重组质粒导入______(填“酿酒酵母”或“大肠杆菌”)中，采用_____法将菌液接种至含有氨苄青霉素的LB平板。挑取单菌落进行DNA 测序，测序验证正确后，利用质粒提取试剂盒提取重组质粒。
(3)将重组质粒导入酿酒酵母。利用醋酸锂-Tris-EDTA 缓冲液-PEG共同处理酿酒酵母，用醋酸锂处理的目的是_____; EDTA的作用是抑制DNA 酶的活性,防止______; PEG的作用是减少醋酸锂对细胞膜结构的过度损伤，同时使质粒与细胞膜接触更紧密，促进转化。
(4)转基因酵母功能的鉴定。取各重组菌株制成等浓度的菌液，等量接种到含等量D-半乳糖的培养基中，发酵12h后立即离心并分离沉淀和上清液，目的是______。测定上清液中半乳糖醇的含量，比较各重组菌株单位时间内半乳糖醇的产量，结果表明导入黑曲霉木糖还原酶基因anxr的pRS313-anxr工程菌株是优势菌株。这属于对______(填“基因”、“基因表达产物”或“个体性状”)的检测，检测时需以______菌株作为阴性对照。
(5)pRS313-anxr工程菌株中D-半乳糖的代谢途径如图丙，为进一步提高D-半乳糖转化为半乳糖醇的效率，研究者对工程菌中的半乳糖激酶基因进行_____，通过 DNA 测序筛选成功改造的菌株。据图分析，除木糖还原酶和半乳糖激酶外，限制半乳糖醇产量的因素还有_______________(写出2 点即可)。

【推荐2】脂肪酶在食品工业中有着广泛的应用，食品生产常需要在高温条件下进行，天然脂肪酶难以满足生产需求。科学家对已知氨基酸序列的脂肪酶进行改造，获得了耐高温的脂肪酶，提高了食品工业的生产效率。回答下列问题。
(1)根据耐高温脂肪酶的结构特点，推测其氨基酸序列，然后重新设计新脂肪酶的基因序列，获得耐高温的脂肪酶的技术称为___。一般来说，新的脂肪酶基因脱氧核苷酸序列会有多种可能，其原因是__。
(2)在设计出耐高温的脂肪酶基因后，对其进行PCR扩增的过程包括_____、复性和延伸。延伸过程中由于DNA聚合酶的特性，子链延伸的方向为________。
(3)利用质粒将改造后的耐高温脂肪酶基因导入大肠杆菌，构建基因工程菌甲，若要检测工程菌甲中的耐高温脂肪酶基因是否成功表达，则需利用到___杂交技术，若出现杂交带，则说明基因能在工程菌内正常表达。
(4)利用工程菌甲生产耐高温脂肪酶的过程中，传代多次后，生产条件未变，但某子代菌株不再产生耐高温脂肪酶。分析可能的原因是___(答出两点即可)。