【推荐2】霉菌中的黑曲霉广泛分布于空气、土壤中，可产生柠檬酸和蛋白酶、淀粉酶等多种酶，是重要的发酵菌种。回答下列问题：

(1)黑曲霉菌的分离。选择合适地点采集10g土壤样品，转入90mL______中制成悬液，经等比（梯度）稀释后，采用______法进行分离。培养一定时间后，通过观察平板中______初步确定黑曲霉菌菌落。实验结果表明，土壤悬液稀释100倍后，经平板培养平均长有72个黑曲霉单菌落，则该样品中，每克土壤约含有黑曲霉菌______个。该方法统计的结果往往比实际数值______。
(2)黑曲霉菌的培养。用______将最终分离得到的黑曲霉菌转移到添加蔗糖的豆芽汁培养基进行培养，其中蔗糖为黑曲霉菌的生长提供______。在将培养基进行灭菌前，还需将pH调至______。
(3)黑曲霉菌的应用。高品质食品的生产需要优质黑曲霉菌种，在野生型菌种基础上，通过______（答出两种）等方法可获得优质菌种。啤酒的工业化生产中先利用黑曲霉菌对富含淀粉的原料进行糖化处理，才能进一步进行酒精发酵，该处理的原理是______。
(4)黑曲霉菌的危害。针对黑曲霉菌导致的谷物腐烂问题，研究人员筛选出若干株对黑曲霉菌有抑制作用的菌株，将各菌株分别加到黑曲霉菌生长良好的培养基上，通过测定______比较不同菌株对黑曲霉菌的抑制能力。如图所示的结果表明，抑制作用最强的菌株编号为______。

【推荐1】夏季来临，蚊虫日渐猖獗，很多驱蚊产品中都添加了柠檬草精油。柠檬草又叫香茅，禾本科多年生草本植物。柠檬草精油具有抗沮丧、抗菌、驱虫、消除肌肉疼痛等功效，含有柠檬醛、月桂烯等易挥发、难溶于水的有机成分，柠檬草茎叶中含有丰富的柠檬草精油，是良好的提取原料。
(1)柠檬草精油适合用萃取法进行提取，其理由是柠檬草精油的成分具有_____的性质。
(2)利用萃取法提取柠檬草精油的流程为（①→⑤为相关操作环节）：
柠檬草茎叶→①粉碎→②干燥→③_____→④_____→⑤浓缩→柠檬草精油。其中粉碎和干燥，目的是_____。第⑤步“浓缩”的目的是_____，需要用到_____装置。
(3)萃取剂的沸点应_____（填“低于”、“高于”或“等于”）柠檬草精油的沸点，否则会使精油蒸发而得不到产物。
(4)萃取过程采用水浴加热，不直接使用明火加热，因为_____。
(5)为检测从不同产地的柠檬草所提取的柠檬草精油的抑菌效果，以大肠杆菌为实验材料。在培养大肠杆菌的固体培养基上，贴上用柠檬草精油浸透的圆形滤纸片，经培养后，在滤纸片的周围形成大小不同的抑菌圈。下表为牛肉膏蛋白胨固体培养基配方，图为检测结果。

牛肉膏蛋白胨固体培养基配方
牛肉膏	5．0g
蛋白胨	10．0g
NaCl	5．0g
琼脂	20．0g

制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的步骤是：计算→_____→_____→灭菌→倒平板。蛋白胨能为大肠杆菌的生长提供_____，琼脂的作用是_____，对培养基进行灭菌应采用的方法是_____。图中，在培养基上接种大肠杆菌的方法是_____。若滤纸片的直径为a，抑菌圈的直径为b，则a/b的值越_____，柠檬草精油的抑菌效果越好。

【推荐2】叶用莴苣（如生菜）是大众喜爱蔬菜，夏季高温极易引起先期抽苔造成减产，泛素连接酶（LsE3）是研究人员在莴苣高温抽苔植株中筛选得到的。LsE3基因受温度调控，影响莴苣抽苔，但是LsE3基因作用机制尚不清楚。研究人员用无缝克隆技术构建莴苣LsE3基因的表达载体用于研究其分子机理。无缝克隆技术是构建表达载体的一种技术如图2。

   

(1)目的基因获取，在_____条件下，提取先期抽苔莴苣细胞中_____，经_____获得cDNA，再以cDNA为模板，利用PCR技术扩增LsE3基因。PCR扩增除了图1标出的物质以外，还需加入_____（至少写两种）。LsE3基因两端序列如图1所示，PCR中需要两种引物F（左侧）、R（右侧）选用_____（选项中为引物部分序列，方向为5'→3'）。
A. GATTAG------TGTTGGB. CCAACA------CTAATCC. TAGGTG------AGACCT D. AGGTCT------CACCTA
(2)表达载体构建，近年来新一代无缝克隆技术发展迅猛，基于T4 DNA聚合酶和T5核酸外切酶成为目前研究的热点。早在1990年，Aslanidis等便提出基于T4 DNA聚合酶( LIC)技术（如图2）。 T4 DNA 聚合酶在反应体系中没有添加dNTP情况下具有 3'→5'外切酶活性；在反应体系中添加dNTP情况下具有5'→3'聚合酶活性；在反应体系中仅添加某种特定的dNTP原料（如dATP），T4 DNA聚合酶也具有 3'→5'外切酶活性，且外切到dATP时，外切酶活性和聚合酶活性同时发挥作用，从而竞争性终止反应，产生指定长度的单链黏性末端。请结合图1和图2回答下列问题：
①LIC技术构建表达载体，图1中利用PCR扩增LsE3基因，反应液中加入T4 DNA聚合酶和_____处理。用EcoRⅤ酶（GAT↓ATC）切割图1所示质粒获得_____末端，后加T4 DNA聚合酶和_____处理质粒。处理后将两者混合、退火并导入细胞内完成重组克隆。
②LIC技术依赖特定同源序列，2007年Li等建立了不依赖特定序列的克隆( SLIC) 技术，后经过多次改进，Qi等建立了RQ-SLIC技术，用EcoRⅤ酶切割质粒后与LsE3基因混合，加入T4 DNA聚合酶处理适当时间，将混合物加热到72℃，目的是_____，缓慢降温（退火）后移入细胞内转化修复形成完整重组质粒，细胞内转化修复过程中用到_____酶。
(3)导入受体细胞，取叶用莴苣幼芽经_____（过程）形成愈伤组织备用，用_____处理农杆菌后导入重组质粒，再感染叶用莴苣愈伤组织，将感染后的愈伤组织置于加入_____植物组织培养基中培养，筛选出成功导入质粒的植物细胞。