【推荐1】油菜是我国重要的经济作物，低温是影响油菜生长的重要环境因素，科研人员对NF24和17NS两个油菜品系的低温胁迫下的光合特性进行了研究。
(1)将NF24和17NS低温-4℃处理24小时，测定光合速率，结果如图1。
   
图1结果显示_____，24小时后处于同一水平，低温条件对_____光合速率的影响更显著。
(2)为进一步探究两个品种在基因表达上的差异，科研人员提取了叶片细胞中的_____，通过PCR扩增了相关的基因。测定基因相对表达量，结果如图2。铁氧还蛋白1可将电子传递给NADP⁺，形成NADPH；光系统修复蛋白可将受损伤的相关蛋白清除；叶绿素ab结合蛋白是叶绿素与蛋白质非共价结合形成的复合物；放氧增强蛋白参与氧气的释放。请推测17NS是怎样应对低温胁迫的：____________________。
   
(3)绿色植物中RuBP羧化酶(Rubisco)具有双重活性，当O₂/CO₂偏高时，光呼吸的过程会加强。光呼吸是在光的驱动下将碳水化合物氧化生成CO₂和水的一个生化过程，是一个高耗能的反应(如图3所示)。过氧物酶体为单层膜结构，有特定的功能，负责将光合作用的副产物C₂(乙醇酸)氧化为乙醛酸和过氧化氢。据图3中的信息，绿色植物在Rubisco催化下__________与C₅反应，形成的__________中的C原子最终进入线粒体放出CO₂，完成光呼吸的过程。参与此过程的细胞器有________。研究发现，光合产物1/3以上要消耗在光呼吸底物上。据上述信息推测,细胞中CO₂浓度倍增可以使光合产物的积累增加，原因是__________。
   

【推荐2】电影《妈妈》于2022年母亲节上映，85岁的母亲为照顾阿尔茨海默病的女儿倾尽所有，母爱的无私付出让人泪目。阿尔茨海默病（AD）是一种神经退行性疾病，又名老年痴呆症。近期发现，resistin（抵抗素，化学本质为蛋白质）的表达与AD发病及进展可能有一定关联。在人体内，脂肪细胞，骨骼肌细胞，脑内巨噬细胞均可分泌resistin。但是在小鼠中，脑内的巨噬细胞并不分泌resistin，给希望通过AD模型小鼠研究脑内巨噬细胞分泌rsistin在AD进展中的研究带来了障碍。因此本实验拟将resitin基因导入到小鼠单核巨噬细胞系RAW264.7细胞中，从而建立能够高表达resistin的单核巨噬细胞系统，为进一步探索resistin与AD之间的关系奠定基础。
(1)为大量获取resistin基因，可分离小鼠腹股沟部位脂肪组织提取的mRNA，经______后进行PCR扩增。PCR的原理是____________，反应体系需加入______种引物，引物的作用是使DNA聚合酶能从引物的______端开始连接脱氧核苷酸。
(2)下图1为所用质粒载体图谱示意图，图中限制酶的识别序列及切割位点见下表，为使resistin基因（该基因序列不含图1中限制酶的识别序列，图2中箭头表示resistin基因转录方向）与载体正确连接，在扩增的resistin基因的A端和B端应分别添加限制酶______的酶切位点，经过这两种酶酶切后的resistin基因和载体进行连接时，可选用______（“E.coliDNA连接酶”或“T₄DNA连接酶”）。

相关限制酶的识别序列及切割位点如下：

名称	识别序列及切割位点	名称	识别序列及切割位点
HindIII	A↓AGCTT TTCGA↑A	EcoRI	G↓AATTC CTTAA↑G
PvitII	CAG↓CTG GTC↑GAC	PstI	CTGC↓AG GA↑CGTC
KpnI	G↓GTACC CCATG↑G	BamHI	G↓GATCC CCTAG↑G

(3)为获得大量重组质粒，并鉴定重组质粒连接是否正确，可先将重组质粒导入经Ca²⁺处理的大肠杆菌中，Ca²⁺处理大肠杆菌的目的是________________________，再将完成转化的大肠杆菌接种在含______的培养基中培养。
(4)提取出鉴定连接正确的重组质粒导入到小鼠单核巨噬细胞系RAW264.7细胞后，可以应用______技术检测resistin基因是否表达出resistin。

【推荐3】对微生物或动植物的细胞进行基因改造，使它们能够生产药物，是目前基因工程取得实际应用成果非常多的领域。干扰素是一种具有干扰病毒复制作用的糖蛋白，在临床上被广泛用于治疗病毒感染性疾病。科学家用基因工程方法从大肠杆菌及酵母菌细胞内获得了干扰素。
(1)利用大肠杆菌来合成干扰素时，先用____________处理大肠杆菌细胞，使细胞处于感受态，然后再将目的基因的表达载体导入其中进行培养。用_____________等技术检测受体细胞的DNA是否插入了目的基因，或检测目的基因是否转录出mRNA。
(2)在培养过程中用_____________方法进行菌种的纯化、分离并计数，计数偏小的原因是_____________。
(3)与人体自身合成的干扰素相比，大肠杆菌合成的干扰素往往活性较低原因是_____________。动物的膀胱上皮细胞中可以高效表达干扰素蛋白，科学家设计膀胱生物反应器，将干扰素基因与膀胱上皮细胞中特异性表达的基因的____________等调控元件重组在一起。

【推荐1】已知SARS是由一种RNA病毒感染所引起的疾病。SARS病毒表面的S蛋白是主要的病毒抗原，在SARS病人康复后的血清中有抗S蛋白的特异性抗体。某研究小组为了研制预防SARS病毒的疫苗，开展了前期研究工作。其简要的操作流程如下，请回答下列问题：

（1）实验步骤①所代表的过程需要__________________酶催化。
（2）步骤②构建重组DNA分子A和重组DNA分子B必须使用限制性核酸内切酶和____________酶，后者的作用是将限制性核酸内切酶切割的______________和________________________________连接起来。
（3）如果省略步骤②而将大量扩增的S基因直接导入大肠杆菌，一般情况下，不能得到表达的S蛋白，其主要原因是S基因在大肠杆菌中不能_________________，也不能__________________。
（4）为了检验步骤④所表达的S蛋白是否与病毒S蛋白有相同的免疫反应特性，可用_______________与__________________进行抗原—抗体特异性反应实验，从而得出结论。
（5）步骤④和⑥的结果相比，原核细胞表达的S蛋白与真核细胞表达的S蛋白的氨基酸序列________（填“相同”或“不同”），根本原因是_____________________________________。

【推荐2】嗜热土壤芽孢杆菌产生的P-葡萄糖苷酶（BglB)是一种耐热纤维素酶，为使其大量生产，科学家打算利用转基因技术使大肠杆菌表达BglB酶，开展了以下试验：

注：图中限制酶的识别序列及切割形成的黏性末端均不相同
(1) 根据所学细胞学有关知识，利用大肠杆菌____________(能、不能）生产人的糖蛋白，你作出判断的理由是___________________________________。
(2) 大肠杆菌经常作为基因工程的受体细胞，其优点是____________________________。
(3) PCR扩增时，可以从___________的基因组文库中获取bglB基因作为模板。
(4) 如图为所选质粒的酶切图谱，bglB基因两端不含图中限制酶的识别序列，为使bglB基因能重组进该质粒并构建表达载体，扩增的bglB基因两端应当加上 _______________酶或___________酶的识别序列。
(5) 若某种限制酶切割形成的DNA片段如下，则可以选择____________进行连接，连接后可形成的DNA片段为____________________________________(写出两种）。
…AC GC… …GC GT…
…TG CG… …CG CA…

【推荐3】某质粒载体的结构如图所示。现有BamHⅠ、MboⅠ、PalⅠ三种限制酶，它们识别的碱基序列和酶切位点分别为G^↓GATCC、^↓GATC、GG^↓CC。已知目的基因的两端均有后两种限制酶的识别序列。

回答下列问题：
（1）从表达载体的组成上看，氨苄青霉素抗性基因和四环素抗性基因属于__________。通常该结构必须具备的特性有：表达产物对细胞无害表达产物及产物的功能便于检测、表达产物及产物的功能在受体细胞中本身___________（填“不存在”或“已存在”）。
（2）上述三种限制酶中，能切割产生平末端的酶是_______，能切割产生相同黏性末端的酶是__________。
（3）若将质粒和目的基因通过同种限制酶处理后进行连接，形成重组质粒，应选用的限制酶是___________________（填“MboⅠ”或“PalⅠ”）。不选用另一种酶的原因是____________。
（4）同一种生物的cDNA文库中含有的基因数目比基因组文库中的少，其原因是_______________。

【推荐1】基因治疗的途径之一是从患者体内获得某种细胞，在体外将目的基因导入后，经筛选和扩大培养再重新输回患者体内。回答下列问题：
（1）目的基因在______（设备）中扩增时，应加入的原料有______。
（2）目的基因转移进入受体细胞前应构建基因表达载体，其目的是______。
（3）为检测目的基因在受体细胞中是否转录，可用______作探针，与从受体细胞中提取的mRNA杂交，若显示出______，说明目的基因已转录。
（4）提外地培养患者细胞时，应按细胞所需营养物质的______配制培养基，并保证被培养的细胞处于______的环境，同时为细胞提供适宜的温度、pH和气体等条件；还要定期更换培养液，避免______。

【推荐2】基因驱动是指特定基因有偏向性地遗传给下一代的自然现象。CRISPR/Cas9基因编辑系统包含Cas9基因和sgRNA编码序列（gRNAs），科学家借助该系统研发出人工基因驱动系统，并在拟南芥和蚊子等生物中实现了外部引入的基因多代遗传。在作物快速育种、根除疟疾等方面具有广阔的前景。请回答下列问题：
(1)为研发拟南芥蓝光受体CRY1基因驱动系统，科学家首先构建了基因驱动元件，将基因驱动元件精确插入到一条染色体上的CRY1基因中，过程如图1所示。

   

①将基因驱动元件导入拟南芥细胞，在细胞中表达Cas9/sgRNA复合物，该复合物通过________识别和结合DNA特定序列，并引导Cas9酶切断DNA双链的__________，从而将基因驱动元件插入到CRY1基因中，该过程属于定点________________（基因突变/染色体变异）。
②为确定基因驱动元件是否插入CRY1基因，选择引物_______进行PCR-电泳，结果如图2。条带1的大小约为7800bp，条带2的大小约为3200bp。基因驱动元件成功插入的是条带________，基因驱动元件的大小约为____左右。
(2)当携带基因驱动元件的动物与野生型动物交配时，它们的后代从父母中各获得一份DNA 副本：自然版本和基因驱动版本。受精后，来自不同亲本的染色体排列在一起时，基因驱动DNA中的CRISPR被激活。它能识别对侧染色体上自然基因的拷贝，并在胚胎发育开始前引导Cas9酶切除自然拷贝。一旦自然基因受损，细胞的特殊修复机制就会启动，修复丢失的DNA，但它使用未断裂的染色体（携带基因驱动的染色体）作为模板。所以当修复完成后，两条染色体都携带一份基因驱动的拷贝。此过程被称为同源定向修复。
①用CRY1基因纯合突变体作为母本与野生型父本杂交，F₁中有多达8％的植株为纯合突变体。纯合突变体产生的原因是F₁中来自母本的基因驱动序列通过同源定向修复，使来自父本的_________________（部位）上也插入CRY1基因驱动元件。
②用基因驱动技术改造传播疟疾的按蚊X染色体上的A基因获得a基因，已知含a基因的精子不能成活。用改造后的纯合雌蚊突变体与野生型雄蚊交配获得子一代，子一代相互交配，子二代中的性别组成为_____，且子二代中含有a基因的比例_______（填“大于”“等于”或“小于”）1/2。若将基因驱动雌蚊释放到疟疾疫区，可通过_____________降低按蚊的种群密度。

【推荐3】I.某动物体内含有研究者感兴趣的目的基因，研究者欲将目的基因导入大肠杆菌中进行保存。现有质粒（如图甲）和含目的基因的DNA片段（如图乙）。Amp^R是氨苄青霉素抗性基因；LacZ基因编码产生的β-半乳糖苷酶可以分解X-gal产生蓝色物质，使菌落呈现蓝色，否则菌落为白色；XmaI、Nhel、EcoRI、BclI是4种限制酶，它们切割产生的黏性末端均不相同。

(1)获取质粒和含目的基因的DNA片段后，需要选________(限制酶)处理质粒和含目的基因的DNA片段。为了连接质粒和目的基因，需要在处理后的质粒和DNA片段的混合物中添加__________。
(2)在构建基因表达载体时，有的质粒含有目的基因，有的质粒为空质粒，将构建后得到的质粒与用Ca²⁺处理过的大肠杆菌混合，然后把大肠杆菌涂布到含______的培养基上培养，成功导入重组质粒的大肠杆菌菌落呈________(填“白色”或“蓝色”)，理由是__________。
II.科学家利用重叠延伸PCR技术进行定点突变，实现对β干扰素基因合理性改造，其过程如下图所示。

(3)科学家通过对β干扰素基因进行定点突变，使干扰素第17位的半胱氨酸改变成丝氨酸，提高了其储存的稳定性，该生物技术属于（       ）

A．基因工程	B．蛋白质工程
C．基因突变	D．细胞工程

(4)由产物1和产物2可得到杂交DNA甲，杂交DNA甲可经过②获得突变产物3，结合上图，请画出杂交DNA甲___________（要求：需要准确画出方向和突变位点）。

【推荐1】人体内的t-PA蛋白能高效降解血栓，是心梗和脑血栓的急救药。然而，为心梗患者注射大剂量的t-PA蛋白会诱发颅内出血。研究证实，将t-PA第84位的半胱氨酸换成丝氨酸，能显著降低出血副作用。据此，先对天然的t-PA基因进行序列改造，然后再采取传统的基因工程方法表达该改良基因，可制造出性能优异的t-PA改良蛋白。下图是通过两次 PCR 操作，运用大引物进行定点突变获取t-PA改良基因和利用质粒pCLYII 构建含 t-PA改良基因的重组质粒示意图。（注：一次PCR 操作可进行多次循环）

(1)科学家将t-PA第84位的半胱氨酸换成丝氨酸，生产出性能优良的t-PA突变蛋白属于_________工程。t-PA改良基因形成是t-PA基因发生了碱基的_________.
(2)已知t-PA蛋白第84 位是半胱氨酸，相应的基因模板链（图中 t-PA基因的上链） 上的碱基序列是ACA，丝氨酸的密码子是 UCU。获取t-PA突变改良基因过程中需要以下三种引物：

引物Ⅰ: （下划线? 为突变基因位点）

引物Ⅱ: （下划线字母为XmaⅠ酶切序列）

引物Ⅲ: （下划线字母BglⅡ为酶切序列）

在上述引物中，引物Ⅰ中突变基因位点是________碱基，第一次PCR 操作中使用的引物有___________._______。第二次PCR 操作中使用的引物有________，另外一种引物是大引物的___________________（填“①”或“②”） 链。
(3)PCR 操作中退火的目的是____________________。第二次 PCR过程中至少需要____次循环才能获得双链等长t-PA改良基因。
(4)研究人员将重组质粒导入到大肠杆菌常用的方法是______________，转化后的大肠杆菌需接种在含有_____________的培养基上进行筛选。对于该基因的检测，通常需进一步通过_____________鉴定，而不用PCR产物凝胶电泳的结果，原因是___________________________________________________。

【推荐2】二苯乙烯苷是我国传统药材何首乌特有的药效成分，具有抗氧化、清除自由基等功效。合成二苯乙烯苷的关键酶是芪合酶（STS），为获得大量的STS，研究人员利用质粒（如图2）将STS基因（如图1）转化到大肠杆菌细胞内进行表达。回答下列问题：

(1)采用_________技术可以快速、大量获得目的基因，据图1分析，利用该技术扩增STS基因时，应选择的引物是________。
(2)为使STS基因与质粒正确连接，需在所选引物的_______（填“3”或“5’”）端分别增加相应限制酶的酶切位点，同时选用__________两种限制酶切割质粒。
(3)启动子是_______识别和结合的部位。很多启动子具有物种特异性，在图2质粒中插入STS基因，其上游启动子应选择_______（填写字母）。
A．何首乌启动子             B．大肠杆菌启动子             C．农杆菌启动子
(4)可将转化后的大肠杆菌接种到含________的培养基上进行筛选。能在该培养基上生长的大肠杆菌是否一定含有STS基因?请判断并说明理由：________。
(5)科研人员利用相关技术替换了STS某个位点的氨基酸，提高了STS的抗氧化能力，该技术属于_________。

【推荐3】禽流感病毒的遗传物质容易发生变异，在高致病性禽流感爆发的地区，家禽养殖业蒙受巨大的经济损失，同时也威胁到人类的健康。如何减轻禽流感的传播和流行。回答下列问题:
（1）在鸡的多个品种中都存在Mx蛋白，但只有少数品种的Mx蛋白具有抗病毒的活性。研究人员利用____________作探针，从某个品种的鸡体内成功提取出正常Mx蛋白的mRNA，通过逆转录法获取cDNA，再利用某种病毒将cDNA携带进入Mx蛋白缺陷的另一个品种鸡的____________中，并将其培育成成体。检测发现，在上述获得的鸡体内cDNA成功表达了，从分子水平上进行这项检测，通常采用____________方法。该育种方法解决了传统育种方法存在的____________缺陷。
（2）让转基因鸡的雌雄个体之间随机交配，所产生的子一代、子二代均按照孟德尔的分离定律遗传，这说明Mx基因已经整合到转基因鸡的____________。
（3）对Mx蛋白进行改造，就要通过蛋白质工程，天然蛋白质合成的过程是按照____________法则进行的。