【推荐1】近几年新冠肺炎疫情不仅对人类的健康和生命安全造成威胁，还严重影响了人们正常的生产生活。新冠病毒（RNA病毒）检测主要有“核酸检测”“抗原检测”和“抗体检测”3种。请回答下列问题：
(1)研究人员研发了核酸检测试剂盒，通过PCR技术可对采集到的核酸序列进行扩增。新型冠状病毒核酸快速检测试剂盒的检测原理是：若送检样本中存在病毒，则以病毒RNA为模板，在_____________酶的作用下合成cDNA，反应体系中加入dATP、dTTP、dCTP和dGTP的作用是为扩增提供_____________，再加入互补的荧光探针、_____________酶和_____________后，CDNA开始扩增，当子链延伸至探针处，会水解探针释放出荧光基团产生荧光，荧光监测系统接收到荧光信号从而确诊。
(2)2022年3月15日国家卫健委发布了《新型冠状病毒诊疗方案试行第九版》将解除隔离及出院标准的CT值从40降到至35。CT40就是把病毒的核酸循环复制40次可检测到病毒存在，即为阳性。CT值从40降到至35，说明定义阳性的标准在_____________（降低、提高）
(3)抗原检测是检测唾液、鼻腔黏膜或咽喉黏膜中是否存在新冠病毒特有的__________________________（分子组成）的检查。
(4)我国采用新型冠状病毒化学发光检测试剂盒进行抗体检测，研究人员利用生产单克隆抗体的技术，生产出能与新冠病毒结合的特异性抗体。在单克隆抗体制备过程中，当杂交瘤细胞在体外条件下大规模培养时，应定期更换培养液，目的是_________________________。该试剂盒能快速准确地检测出病例是利用了单克隆抗体的_____________________等优点。

【推荐1】植物细胞壁中存在大量不能被猪消化的多聚糖类物质，如半纤维素多聚糖、果胶质（富含有半乳糖醛酸的多聚糖）等，研究人员通过基因工程、胚胎工程等技术培育出转多聚糖酶基因（manA）猪，主要流程如下图（neo为新霉素抗性基因）。请回答下列问题：

(1)利用PCR技术扩增manA时，需经过___________等阶段。设计PCR过程所需引物的主要依据是______________________。复性时温度的设定与引物长度、碱基组成有关，长度相同但___________碱基对含量多的引物需要设定更高的复性温度。
(2)通过①过程获得的重组质粒含有4.9kb（千碱基对），其中manA基因含有1.8kb。现将该重组质粒成功导入受体细胞后，却只有50%左右的细胞能正常表达目的基因产物，原因是_______________。
若用BamHⅠ和EcoRⅠ联合酶切割其中一种重组质粒，只能获得1.7kb和3.2kb两种DNA片段，若用上述联合酶切割同等长度的另一种重组质粒，则可获得___________kb长度两种的DNA片段。
(3)在进行④过程时，通常需要定期更换培养液，目的是______________________。
(4)⑤过程中要对受体母猪进行___________处理，与普通猪相比，该转基因猪的优势是______________________。

【推荐2】中国科学家成功将人肝再生增强因子(hALR)的基因导入羊的乳腺上皮细胞中，再利用核移植技术培育出了转基因克隆羊，其乳汁含有hALR。请回答下列问题：
（1）从人的肝细胞中获取所有mRNA，并以此为模板反转录产生多种______片段，与载体连接后储存在一个受体菌群中，该受体菌群体叫做人的__________文库，从该文库中获得hALR基因，这样获得的基因与人的肝细胞中的hALR基因相比________(填“有”或“没有”）区别。
（2）得到hALR基因后，若要较快地得到大量的hALR基因，一般采用PCR技术扩增。扩增过程包括：目的基因解链为单链、_________、在_______酶作用下延伸，如此重复循环。
（3）目的基因能否在受体细胞中稳定遗传的关键是转基因生物的DNA上是否____________。
（4）人的hALR基因能够在羊乳腺细胞表达出相同的hALR，说明所有生物____________。

【推荐3】本题包含Ⅰ和Ⅱ两部分
Ⅰ．用生物技术获得生物新品种的过程，据图回答：

（1）图中采用的目的基因获取方法是__________技术。   
（2）在培养转基因绵羊的过程中常用的受体细胞是_________，其中在动物细胞培养过程中，需让培养液中含有一定量的CO₂，其主要作用是_______________________。
（3）在抗虫棉的培育过程，其中④过程常用的方法是___________________。
Ⅱ．鱼抗冻蛋白基因转入番茄，使番茄的耐寒能力大大提高，可以在相对寒冷的环境中生长。质粒上有PstⅠ、SmaⅠ、HindⅢ、AluⅠ等四种限制酶切割位点，图是转基因抗冻番茄培育过程的示意图(amp^R为抗氨苄青霉素基因)，其中①～④是转基因抗冻番茄培育过程中的相关步骤，Ⅰ、Ⅱ表示相关结构或细胞。请据图作答：

（4）在构建基因表达载体时，可用一种或者多种限制酶进行切割。为了避免目的基因和载体在酶切后产生的末端发生任意连接，在此实例中，应该选用_________________限制酶，分别对_________________________进行切割。
（5）培养基中的氨苄青霉素会抑制番茄愈伤组织细胞的生长，要利用该培养基筛选已导入含鱼的抗冻蛋白基因的番茄细胞，应使基因表达载体Ⅰ中含有_______________作为标记基因。
（6）研究人员通常采用______________________技术，在分子水平检测目的基因是否翻译形成了相应的蛋白质。

【推荐1】表面展示技术是通过DNA重组技术，将某种蛋白与细胞表面的蛋白质组装成融合蛋白，从而将目的基因的表达产物展示在细胞表面。如下图是含有芽孢表面蛋白基因（cotB）与绿色荧光蛋白基因（gfp）的基因表达载体，Amp^r是氨苄青霉素抗性基因。回答下列问题。

(1)由图可知，基因表达载体中cotB基因与基因共用的结构是______________。
(2)将导入基因表达载体的芽孢杆菌培养在含______________的固体培养基上以获得含有_____________的受体细胞。
(3)将cotB基因与gfp基因重组的目的是_____________。
(4)表面展示技术还能应用在酿酒过程中，将酸性蛋白酶基因（pepA）整合到酿酒酵母的特定基因位点，以期在发酵的过程中将发酵液中的蛋白质水解成小分子肽和氨基酸，进而降低酒的浑浊度。
①可通过______________技术大量扩增pepA基因，该技术是利用__________的原理。
②从酵母细胞中获得质粒以构建基因表达载体，质粒应具备的条件之一是________，以便外源基因的插入。
③完成重组后，在对目的基因的检测与鉴定中，需在个体水平进行的鉴定是_________。

【推荐2】Bt基因是苏云金芽孢杆菌中的一种基因，能够指导合成一种毒性很强的β—内毒素蛋白质晶体。该晶体被鳞翅目幼虫吞食后，在其肠道碱性条件下水解产生具有毒性的短肽，从而使鳞翅目幼虫死亡。我国科学家将Bt基因导入棉花植株中，成功培育出抗虫棉。回答下列问题：
(1)欲在体外获得大量Bt基因，可将从苏云金芽孢杆菌中提取的Bt基因通过__________技术扩增，该技术的前提是______________________________。
(2)将获得的Bt基因与质粒拼接构成基因表达载体过程中，所需的酶有____________________；一个完整的基因表达载体包括目的基因、__________、复制原点、启动子和终止子等，其中启动子是__________识别和结合部位。
(3)将Bt基因表达载体导入棉花植株，常采用农杆菌转化法，这是因为农杆菌具有____________________的特点。欲从个体水平上检测抗虫棉是否培育成功，检测方法是____________________。
(4)从题干信息推断，β—内毒素蛋白质晶体对人没有毒性，原因是________________。

【推荐3】某园林花卉只有红色和白色两种花色。研究人员利用农杆菌转化法将外源基因D转入到该植物细胞中，最终获得了能开蓝花的植株。下图为Ti质粒和目的基因的部分结构模式图，以及限制酶1、酶2、酶3的酶切位点。请回答：

(1)基因D导入农杆菌之前需要用___________提前处理农杆菌，使其成为感受态细胞。Ti质粒中的抗生素抗性基因___________（填“能”或“不能”）用来筛选鉴定已经成功导入基因D的农杆菌，原因是_________________________________________________________。
(2)tms、tmr分别表示生长素基因和细胞分裂素基因，若两种基因随T-DNA转移到植物细胞中，可能会对愈伤组织的增殖和分化产生影响，若要保留tms、tmr，则需要选择限制酶___________对Ti质粒和基因D进行切割，若要剔除tms、tmr，则需要选择限制酶_________对Ti质粒和基因D进行切割。
(3)研究人员将开白花植株的叶肉细胞和开红花植株的叶肉细胞放入___________（填“高渗”或“低渗”溶液，用纤维素酶和果胶酶处理两种细胞获得了有活力的原生质体，经聚乙二醇诱导融合后，获得杂种细胞，再采用___________技术，成功培育出开粉色花的植株。

【推荐1】针对新冠病毒（SARS-CoV-2）的重组蛋白疫苗、核酸疫苗（包括 DNA 疫苗和RNA 疫苗）等疫苗都在研发当中。下图为其中一种疫苗的研发思路，图中①~⑦表示过程，虚线箭头表示 NcoⅠ、SphⅠ、NheI、BamHⅠ的酶切位点（四种酶的识别序列详见表），标记基因 SUC2 控制合成蔗糖酶，使 P 型酵母菌能利用培养基中的蔗糖生存。

限制酶	NcoⅠ	SphⅠ	NheI	BamHⅠ
识别序列和切割位点	C↓CATGG	GCATG↓C	G↓GATCC	G↓CTAGC

(1)图中①过程需要使用 _____酶先得到 cDNA，再使用PCR 技术扩增得到S 基因。
(2)为使③过程顺利进行，需使用限制酶 _____切割质粒B。
(3)图中表示筛选的过程是 _____（填编号），为达到利用标记基因筛选的目的，普通的P 型酵母菌应该满足的代谢特点是_____。
(4)重组疫苗注入志愿者体内后， S 蛋白基因指导合成的 S 蛋白作为_____，刺激机体产生能与之相结合的抗体，抗体的分泌量可作为检测疫苗对志愿者免疫效果的指标。参加临床试验的志愿者需要满足的条件之一是_____（填“有”或“无”）SARS-CoV-2 感染史，理由是_____。
(5)新型冠状病毒感染的常规检测方法是通过实时荧光 PCR 鉴定。实时荧光 PCR 扩增目的基因，需额外添加荧光标记探针（一小段单链 DNA，可与目的基因中部序列特异性结合）。当探针完整时，不产生荧光。在PCR 过程中，与目的基因结合的探针被TaqDNA 聚合酶水解，R 与 Q 分离后，R 发出的荧光可被检测到（如图甲），通过实时荧光 PCR 检测新型冠状病毒感染时，检测到的荧光强度变化如图乙。

①与指数增长期相比，线性增长期目的基因数量的增长率下降，原因有_____。
②Ct 值的含义：在PCR 扩增过程中，每个反应管内的荧光信号达到设定的荧光阈值时所经历的扩增循环数。因此，当样本中初始模板越多时，Ct 值就_____。
③某新型冠状病毒核酸检测说明书标明，Ct≤37 判定为阳性，Ct>40 或无Ct 值判定为阴性。图乙所示新型冠状病毒核酸检测结果应判定为_____。
④阴性结果也不能排除新型冠状病毒感染。可能产生假阴性的因素有_____。
a、取样太早，样本中病毒量少，达不到实时荧光PCR 检测阈值
b、样本被污染，RNA 酶将病毒 RNA 降解
c、病毒发生变异

【推荐2】干扰素是一种淋巴因子，可用于治疗病毒感染和癌症。科学家利用大肠杆菌生产人体干扰素的操作过程如下，请回答：

（1）大肠杆菌常被作为基因工程的受体细胞，因其具有_______特点。在人体淋巴细胞中获得干扰素mRNA后，经_______过程获得干扰素cDNA。如果用人体发育某个时期的mRNA获得多种cDNA片段，与载体连接后储存在一个受体菌群中，这个受体菌群体叫做_______。
（2）请举出在生物体外重复②③④过程进行DNA克隆和体内DNA复制的两点不同之处_______ 、_______。
（3）在利用甲、乙获得丙的过程中，常用两种限制酶同时切割甲和乙，避免发生_______，而获得更多的重组质粒。将重组质粒导入大肠杆菌之前，需用Ca²⁺处理，使细胞处于_______的生理状态，称为感受态。完成导入一段时间后，从大肠杆菌细胞中提取蛋白质，采用_______技术进行检测，若有杂交带出现则表明干扰素基因成功表达。