1 . 哪项技术可以用于在细胞中特异性敲除某个基因（       ）

A．PCR（聚合酶链式反应）	B．RNA干扰
C．CRISPR-Cas9	D．Southern印迹

2 . 农作物在盐碱胁迫下产生过量的H₂O₂会破坏细胞结构，导致减产或植株死亡。某农作物可通过AT1蛋白调节细胞膜上PIP2s蛋白的磷酸化水平，影响H₂O₂的跨膜转运，作用机理如图所示。回答下列问题：
   
(1)PIP2s蛋白也可作为水通道蛋白，其转运水分子的方式属于____。
(2)据图可知，AT1蛋白与Cβ蛋白（细胞生命活动的必需蛋白）结合后，PIP2s蛋白磷酸化水平______（填“升高”、“降低”或“不变”），进而______（填“促进”或“抑制”）H₂O₂外排，导致细胞抗氧化胁迫能力减弱，最终死亡。
(3)已知CRISPR/Cas9基因组编辑技术可以实现基因的敲入和敲除。为提高盐碱地农作物粮食产量，请综合上述信息，尝试利用基因工程技术提出一条培育耐盐碱农作物的方法并解释其原因______。
(4)另有研究发现，对盐碱地中生长的某农作物施用药物X，一段时间后测得细胞内多糖与可溶性糖的比例发生改变，试推测药物X能提高农作物的吸水能力从而耐盐碱的原因是___。

3 . 丙酮酸羧化酶（PEP）和乙酰辅酶A羧化酶（ACC）是控制油菜中蛋白质与油脂比例的关键酶。PEP反义基因是指反向连接在启动子之后的PEP基因，其转录的mRNA与PEP基因转录的mRNA互补，从而抑制PEP基因的表达，提高油菜籽中的油脂含量。图甲为某种质粒的结构，其中npt-II为新霉素抗性基因，gus基因控制合成的酶能使β-葡萄糖苷酸水解为蓝色物质，BamHI、SacI为限制酶，图乙为PEP基因的结构，图丙为丙酮酸的部分代谢过程。
   
回答下列问题：
(1)质粒中的T-DNA的作用是________________________。
(2)为方便将PEP反义基因与质粒连接，一般将限制酶的识别序列连接到引物上，由图甲、乙可知，与PEP基因下游结合的引物______（填“3′”或“5′”）端中应加上______（填“BamHI”或“SacI”）识别序列。
(3)在转化农杆菌时，将PEP反义基因表达载体导入处于______的生理状态的农杆菌中，培育一段时间后，涂布到含有______的平板上，最终在平板上长出白色和蓝色两种菌落，其中符合要求的是________________________。
(4)由图丙可知，还可通过______（答出1种即可）方法改造油菜的遗传物质来提高油脂含量。

4 . CRISPR/Cas9是一种高效的基因编辑技术，Cas9基因表达的Cas9蛋白像一把“分子剪刀”，在单链向导RNA（SgRNA）引导下，切割DNA双链以敲除目标基因或插入新的基因。CRISPR/Cas9基因编辑技术的工作原理如图所示，下列分析正确的是（       ）

A．构建重组质粒时，SgRNA编码序列需要插入到质粒的启动子上游

B．SgRNA和Cas9蛋白形成复合体后，其功能类似于DNA聚合酶

C．根据目标DNA设计相应的SgRNA，可实现对目标DNA的定点切割

D．CRISPR/Cas9识别目标DNA序列主要与Cas9蛋白的特异性相关

5 . 采用CRISPR/Cas9 基因编辑技术可将增强型绿色荧光蛋白（EGFP）基因定点插入到受精卵的Y染色体上，获得转基因雄性小鼠。该转基因小鼠与野生型雌性小鼠交配，通过观察荧光可确定早期胚胎的性别。下列操作错误的是（       ）

A．通过观察早期胚胎的荧光，能发出绿色荧光的即为雄性小鼠胚胎

B．分离能表达EGFP的胚胎干细胞，通过核移植等技术可获得大量的转基因小鼠

C．基因编辑处理的受精卵在体外培养和早期胚胎培养需要用不同成分的培养液

D．基因编辑处理的受精卵经体外培养至原肠胚，植入同期发情小鼠的子宫可获得表达 EGFP的小鼠

6 . 我国科学家攻坚克难，经过多年反复试验，成功培育出全球首例体细胞克隆猴（2n=54），技术流程如图所示。下列叙述正确的是（       ）

A．重构胚细胞中含有4个染色体组，108条染色体

B．克隆猴的遗传物质全部来自于胎猴的体细胞

C．组蛋白的甲基化和乙酰化都不利于细胞全能性的体现

D．对重构胚进行基因编辑可获得用于研究的突变型克隆猴

7 . CRISPR／Cas13d技术是一项新兴的RNA编辑技术，该技术以一条单链向导RNA（gRNA）引导Cas13d蛋白在一个特定的基因位点对RNA进行切割。研究人员设计出的若干个gRNA能分别定点切割新冠病毒RNA基因组的不同基因（如图所示），但不影响人体细胞的RNA。下列叙述正确的是（       ）

A．gRNA分子中，相邻碱基之间有1个核糖和1个磷酸基团

B．gRNA与病毒基因间的碱基配对方式有A—T、U—A、G—C三种

C．CRISPR／Cas13d可能借助gRNA与Cas13d的特异性实现对RNA的定点切割

D．新冠病毒不同RNA片段的差别在于脱氧核苷酸的数量和排列顺序

10 . CRISPR/Cas9基因编辑技术荣获2020年度诺贝尔化学奖，CRISPR/Cas9系统由Cas9蛋白和一条向导RNA构成。向导RNA中含20个碱基的识别序列，可以和目标DNA的靶位点结合，在向导RNA引导下，Cas9将DNA双链切断（如图1所示）。水稻是世界上最重要的粮食作物之一，供养了世界将近50%的人口。由子囊菌引起的稻瘟病，是水稻生产上最严重的病害之一，常常导致水稻产量严重损失。为研究水稻OsERF922基因与稻瘟病抗性的关系，我国科研工作者利用CRISPR/Cas9 技术获得了水稻OsERF922基因敲除植株。请回答下列问题：

(1)向导RNA 和Cas9 蛋白形成的复合物，在功能上接近于限制酶，但是它比限制酶更具备的优势是___________________________。
(2)利用CRISPR/Cas9 技术获得了水稻OsERF922基因敲除植株实验步骤如下：根据OsERF922基因序列，选择合适的___________________，设计向导RNA，然后利用PCR反应得到向导RNA对应的DNA片段，将该片段连接到 CRISPR/Cas9 载体上，得到CRISPR/Cas9 基因表达载体；CRISPR/Cas9 基因表达载体应该具备的能力是：__________________________________________________。将CRISPR/Cas9 基因表达载体导入____________________，并用它侵染水稻细胞；再将被侵染成功的水稻细胞通过__________________技术，最终获得OsERF922基因敲除水稻植株。
(3)前人研究表明，下调OsERF922基因的表达能提高植物与防御相关的一些基因（如植物抗毒素生物合成酶）的表达量，据此推测OsERF922基因敲除水稻植株对稻瘟病的抵抗力会_________________（“增强”或者“减弱”）。要证明此推测，请简要写出实验思路：________________。