1 . 世界首例免疫艾滋病的基因编辑婴儿，是由经CRISPR/Cas9基因编辑技术对CCR5基因进行修改的胚胎细胞孕育的。研究者的初衷是让志愿者生出能抗艾滋病病毒的婴儿。但婴儿诞生后，深圳市医学伦理专家委员会启动对该事件涉及伦理问题的调查。下列有关叙述错误的是（       ）

A．在普通培养液中加入适量的动物血清可以培养艾滋病病毒

B．修改的胚胎细胞孕育出婴儿说明胚胎细胞具有发育的全能性

C．胚胎是人生命的一个自然阶段，不能对其生命属性进行非道德篡改

D．经过基因编辑的个体，有可能影响基因选择性表达，而导致其他疾病的产生

4 . CRISPR-Cas9技术是一种应用广泛的基因编辑技术，通过人工设计的sgRNA（guideRNA）来识别目的基因组序列，并引导Cas9蛋白酶进行有效切割DNA双链，形成双链断裂，损伤后修复会造成基因敲除或敲入等，最终达到对基因组DNA进行修饰的目的。科学家利用CRISPR-Cas9技术将抑癌基因△Np63a定点插入小鼠胰腺癌细胞中，以研究其在胰腺癌细胞中的作用。图1为构建的Cas9—sgRNA质粒，将其导入胰腺癌细胞并表达（图2）；携带△Np63a基因的供体质粒与断裂DNA的高度同源序列（同源臂）发生互换，从而将△Np63a基因定点插入胰腺癌细胞基因组中（如图3所示）。请回答下列问题：

   

(1)Cas9蛋白可对特定的DNA序列切割，在功能上最接近于________酶；一次切割过程中会产生__________个游离的磷酸基团；将Cas9-sgRNA质粒和供体质粒导入胰腺癌细胞的方法是_________。
(2)若已知靶序列5'-GCATCG…GGTCCC-3'，根据该靶序列设计的sgRNA中的相应序列是5'-__________-3'。若要将靶序列从目标DNA上切除下来，则需要设计________种不同的sgRNA。
(3)CRISPR-Cas9系统有时存在结合出错而出现“脱靶”现象，分析其可能原因是_________。
(4)若要检测△Np63a基因是否已导入成功，可使用__________技术。被△Np63a基因成功转化的胰腺癌细胞体外培养时，在细胞水平上可能发生的变化有________。
(5)在上述基因编辑过程中，下列核酸序列中应已知碱基序列的有_____________。

A．sgRNA识别序列	B．同源臂1
C．同源臂2	D．CMV启动子

5 . CRISPR/Cas9基因编辑技术的原理是由一条单链向导RNA引导内切核酸酶Cas9到一个特定的基因位点进行切割。通过设计向导RNA中的识别序列，可人为选择DNA上的目标位点进行切割。如图是利用该技术对某生物B基因进行编辑的过程，下列叙述错误的是（       ）

   

A．B基因被编辑后因不能转录而无法表达出相关蛋白质

B．根据B基因被编辑后生物体的功能变化，可推测B基因的功能

C．基因定点编辑前需要设计与靶基因全部序列完全配对的sgRNA

D．图中sgRNA1的碱基序列和sgRNA2的碱基序列相同或互补

6 . 2022年1月7日，马兰里医学中心成功将猪心脏移植到一名57岁的心脏病患者身上，虽然这颗心脏仅仅存活了2个月，但仍然为异种器官移植的可行性提供了可观的数据。为了降低免疫排斥反应，研究者借助CRISPR/Cas9技术对移植的猪心脏进行了基因编辑。CRISPR/Cas9系统主要由向导RNA（sgRNA）和Cas9蛋白两部分组成，sgRNA可引导Cas9蛋白到特定基因位点进行切割、其机制如图所示。下列说法错误的是（       ）

   

A．sgRNA通过与目标DNA序列互补配对引导Cas9蛋白到位

B．有时sgRNA会因错误结合而出现“脱靶”现象，一般sgRNA序列越短，脱靶率越低

C．Cas9蛋白作用于磷酸二酯键

D．通过CRISPR/Cas9技术敲除猪心脏的某个抗原蛋白基因，至少需要设计两个序列不同的sgRNA

7 . 下图为借助CRISPR/Cas9基因编辑技术插入外源基因的过程图，其中PAM序列是一个短DNA序列，单链向导RNA可引导Cas9内切酶至特定的基因位点进行切割。下列叙述正确的是（       ）

A．Cas9内切酶能将核糖核苷酸之间的磷酸二酯键断开

B．细菌细胞中的限制酶也能起到类似Cas9内切酶的作用

C．Cas9内切酶定点切割与向导RNA和目标DNA结合有关

D．双链DNA的断裂修复过程需要DNA连接酶的催化

8 . CRISPR/Cas9基因编辑技术是将编码Cas9酶和sgRNA的基因作为目的基因，构建基因表达载体后导入受体细胞，可对细胞内某个基因定点切割，引发被切割部位的随机突变（图1）。科研人员在CRISPR/Cas9编辑系统基础上开发了CBE单碱基编辑系统，该系统由三个元件构成，其中“dCas9蛋白+脱氨酶”在sgRNA的引导下，对结合区域第4-8位点的碱基C脱氨反应变成U，最终实现C→T的不可逆编辑，不需要DNA链断裂（如图2）。请回答下列问题：

   

(1)图1中Cas9酶作用于DNA某特定部位的____键。CRISPR/Cas9编辑系统能特异性识别某段特定DNA序列的原理是依靠____与特定DNA序列进行____。
(2)CBE编辑系统将靶位点胞嘧啶脱氨基后，细胞复制____次，子代DNA中靶位点碱基对由C-G彻底替换成____，实现单碱基编辑。
(3)基因编辑可能造成非目标序列的碱基改变，称为脱靶。下图是我国科研工作者建立了一种脱靶检测技术。在小鼠受精卵分裂到2细胞时期，编辑其中1个细胞，并使用红色荧光蛋白将其标记。当小鼠胚胎发育到14.5天时，将整个小鼠胚胎消化成为单细胞，再利用细胞分选技术，进行全基因组测序，比较两组差异。

   

①小鼠受精卵可以从雌鼠____中采集或通过____技术获得。当小鼠胚胎发育到14.5天时，将整个小鼠胚胎先用____处理，分散成单细胞再进行分选。
②图中的标记基因的作用是____。
③在该实验中，没有编辑的那个细胞发育出的细胞的作用是____。经检测，如果两种细胞之间存在基因组碱基序列上的差异，这种差异就是____引起的。与用同一品系小鼠不同受精卵进行脱靶检测相比，上述脱靶检测技术更加精准，这是因为____。

9 . 单细胞生物并没有免疫系统，但是科学家发现细菌中存在消除入侵病毒的功能系统，并发明了基因编辑技术。该系统主要包含单链向导和蛋白两个部分，能特异性识别并结合特定的序列，从而引导蛋白到相应位置并剪切，最终实现对靶基因序列的编辑。下列叙述错误的是（       ）

A．蛋白通过切断磷酸二酯键对进行剪切

B．基因编辑技术本质上是对靶基因进行编辑引发染色体结构变异

C．识别序列与链存在的碱基互补配对方式为，，，

D．向导的序列越短，会导致脱靶率越高

10 . 哪项技术可以用于在细胞中特异性敲除某个基因（       ）

A．PCR（聚合酶链式反应）	B．RNA干扰
C．CRISPR-Cas9	D．Southern印迹