1 . CRISPR/Cas9基因编辑技术的原理是由一条单链向导RNA引导内切核酸酶Cas9到一个特定的基因位点进行切割。通过设计向导RNA中的识别序列，可人为选择DNA上的目标位点进行切割。如图是利用该技术对某生物B基因进行编辑的过程，下列叙述错误的是（       ）

   

A．B基因被编辑后因不能转录而无法表达出相关蛋白质

B．根据B基因被编辑后生物体的功能变化，可推测B基因的功能

C．基因定点编辑前需要设计与靶基因全部序列完全配对的sgRNA

D．图中sgRNA1的碱基序列和sgRNA2的碱基序列相同或互补

2 . 单细胞生物并没有免疫系统，但是科学家发现细菌中存在消除入侵病毒的功能系统，并发明了基因编辑技术。该系统主要包含单链向导和蛋白两个部分，能特异性识别并结合特定的序列，从而引导蛋白到相应位置并剪切，最终实现对靶基因序列的编辑。下列叙述错误的是（       ）

A．蛋白通过切断磷酸二酯键对进行剪切

B．基因编辑技术本质上是对靶基因进行编辑引发染色体结构变异

C．识别序列与链存在的碱基互补配对方式为，，，

D．向导的序列越短，会导致脱靶率越高

3 . 为研究组蛋白去乙酰化酶8（HDAC8）基因的生物学功能，研究者以斑马鱼为研究对象，通过CRISPR/Cas9技术构建HDAC8基因缺失的突变模型（如图1所示）。

回答下列问题：
(1)据图1分析可知：CRISPR/Cas9基因编辑技术可实现靶向切除HDAC8基因的原理是Cas9蛋白—sgRNA复合体中sgRNA识别并与目标DNA中的靶点序列结合，其中sgRNA与靶点序列结合的碱基序列为____；Cas9蛋白作用于目标DNA的____（填化学键）使双链断裂，实现对HDAC8基因敲除。
(2)sgRNA是由体外转录形成的，其基因的上游具有____，该结构的作用是____。
(3)通过对野生型斑马鱼和实施HDAC8基因敲除的斑马鱼HDAC8进行检测，结果如图2所示（数字表示HDAC8氨基酸的数量）。研究人员认为HDAC8基因敲除成功，理由是____，功能丧失。出现图2结果的原因可能是HDAC8基因转录的mRNA中____提前出现。

(4)将敲除成功的纯合斑马鱼与野生型斑马鱼杂交，F₁自由交配得F₂。将F₂不同类型的斑马鱼标记后放归到有捕食性天敌的野外水域中，一段时间后发现突变纯合子数量明显减少，而其他类型的数量几乎没变。请结合图3解释突变纯合子数量变化的原因____。

4 . 研究人员利用最新基因编辑工具CRISPR/Cas9，成功敲除了比格犬的载脂蛋白E（APOE）基因，培育出动脉粥样硬化疾病模型犬“苹果”。利用“苹果”腹部皮肤体细胞作为样本，建立细胞系，取其细胞核注入比格犬去核卵母细胞中，形成早期胚胎后进行胚胎移植，得到了我国首只克隆犬“龙龙”。如图为克隆犬“龙龙”诞生的流程图，回答下列问题：

   

(1)CRISPR/Cas9系统是由Cas9蛋白和sgRNA构成的RNA-蛋白复合体，其中的_________负责识别并结合特定DNA序列，引导Cas9蛋白对目的基因进行编辑，在实践中发现该系统有时存在编辑对象出错而造成“脱靶”的现象，实验发现sgRNA的序列长短影响成功率，sgRNA序列越长脱靶率越_____________（填“高”或“低”）。
(2)取“苹果”的皮肤细胞，并进行体细胞建系。皮肤细胞在培养过程中，首先应保证其处于______________的环境，除了适宜的营养物质、温度等条件外，还需要一定的气体环境是____________。
(3)为了获得较多的卵母细胞，需要对供体实验比格犬注射_______________，获得的卵母细胞应在体外培养到_______________期。在对卵母细胞去核时，可采用的方法有________________________（至少答出两种）。
(4)克隆本质上是一种无性繁殖，该过程的最后一道工序是胚胎移植，其实质是________________。胚胎移植前，需对供、受体犬进行_____________处理，为供体胚胎移入受体提供相同的生理环境。重构胚通常需要发育到_____________阶段才能进行胚胎移植。