2 . CRISPR/Cas9系统主要由向导RNA（SgRNA）和Cas9蛋白两部分组成，SgRNA可引导Cas9蛋白到特定基因位点进行切割，其机制如图所示。下列说法正确的是（　　）

   

A．Cas9蛋白相当于限制酶，切割特定基因位点的脱氧核糖和碱基之间的化学键

B．向导RNA可以在逆转录酶的催化下合成，合成的原料包括四种核糖核苷酸

C．CRISPR/Cas9基因编辑技术有时会因SgRNA错误结合而出现“脱靶”现象，一般SgRNA序列越长，脱靶率越低

D．对不同目标DNA进行编辑时，使用Cas9蛋白和相同的sgRNA进行基因编辑

3 . CD3D严重联合免疫缺陷（SCID）是由CD3D基因突变引起的，该突变阻止了T细胞生长发育所需的CD3D蛋白的合成。科研人员对第3代CRISPR/Cas9基因编辑系统进行改造，获得一种超精确的腺嘌呤碱基编辑系统（ABE），该系统主要由向导sgRNA、Cas9切口酶和腺嘌呤脱氨酶组成，作用机制如图1。利用该系统在CD3δ-SCID患者的造血干细胞中可以更正约71.2％的致病突变。

(1)研究发现、Cas9切口酶只能对DNA的单链剪切，腺嘌呤脱氨酶催化腺嘌呤核苷酸转变成次黄嘌呤核苷酸，次黄嘌呤核苷酸可以和胞嘧啶核苷酸碱基互补配对，据此推测，至少通过________________次DNA复制可以完成修复。
(2)sgRNA是人工合成的一段能与靶基因互补配对的特殊序列，由23个连续碱基组成。研究发现，sgRNA会识别与之匹配的其它区域，导致sgRNA脱靶，试分析其原因是___________________，对此，你的解决措施是_________________________。
(3)为了对改造后的CD3D基因进行研究，把CD3D基因和His标签基因（His标签由6个组氨酸组成）连接起来构建融合基因，并构建重组基因表达载体，图2为载体、CD3D基因的结构、不同限制酶的识别序列及切割位点，欲将标签基因连接在CD3D基因编码区的末端，已知组氨酸的密码子为CAU，终止密码子为UAG。

①写出His的基因编码链的碱基序列5'____________________3'。
②为构建融合基因并将其插入载体，科研人员设计了一对与CD3D基因编码区两端序列互补配对的引物，设计时需在引物________________________（填“A”或“B”）的5'端增加相应的限制酶识别序列和His基因的编码序列，请写出该引物开头的12个碱基序列：5'__________________3'。

5 . 采用CRISPR/Cas9 基因编辑技术可将增强型绿色荧光蛋白（EGFP）基因定点插入到受精卵的Y染色体上，获得转基因雄性小鼠。该转基因小鼠与野生型雌性小鼠交配，通过观察荧光可确定早期胚胎的性别。下列操作错误的是（　　）

A．基因编辑处理的受精卵在体外培养时，不同发育阶段的胚胎需用不同成分的培养液

B．基因编辑处理的受精卵经体外培养至2细胞期，须将其植入同期发情小鼠的子宫，才可获得表达 EGFP的小鼠

C．分离能表达EGFP的胚胎干细胞，通过核移植等技术可获得大量的转基因小鼠

D．通过观察早期胚胎的荧光，能表达 EGFP 的即为雄性小鼠胚胎