1 . 海洋塑料垃圾每年会造成数十万海洋动物死亡，其中聚乙烯（PE，分子式为（C₂H₄）_n）塑料因缺乏有效的降解途径而危害巨大。2021年，中科院海洋所首次发现了能有效降解PE塑料的海洋微生物菌群。通过对该微生物菌群的组成种类和纯度进行定量分析，发现其中有5类细菌菌群为优势种群，研究人员通过微生物培养技术成功获得了上述5类细菌的纯培养菌株，将其中具有较强降解PE塑料能力的3类菌株按一定比例复配后，成功获得了一个能稳定共存且具有显著降解PE塑料能力的菌群，该菌群只需两周时间就可以将PE塑料降解为碎片。经过反复的毒理实验证实该菌群对环境无害，且在降解PE塑料的培养物中发现了能够产生有效抑制多种病原菌的活性物质。
(1)为筛选能有效降解PE塑料的海洋微生物菌群，在设计培养基配方时，碳源的设计上应满足的条件是_____________。
(2)研究人员发现了能有效降解PE塑料海洋微生物菌群中的5类优势菌群后，采用了_________法将单个细菌分散在固体培养基上，并根据菌落的____________（至少写出2种特点）等进行初步区分，从中获得了能稳定降解PE塑料的菌种A₁、A₂和A₃。如需计算一定体积的样品中某菌种的数量，可以利用______在显微镜下观察、计数，其统计结果与实际活菌数相比______（填“偏大”或“偏小”），原因是_____________。
(3)研究人员将经过稀释的含A₁、A₂和A₃三种菌种的菌液进行接种，通过培养基中的分解圈来筛选分解能力强的菌种，培养一段时间后测得透明圈的直径（D）与菌圈的直径（d）如图所示。如需进一步选择单一菌种进行扩大培养，应选用______菌种，理由是_______________。

   

2 . 研究发现，感染毛霉能诱导脐橙产生具有抗病活性的红色物质（CPRE）。为探究CPRE能否替代化学杀菌剂保护采收后的脐橙，科研人员进行了研究：
(1)据下表配方配制培养基，溶解后分装到锥形瓶中，用_________法灭菌后冷却至50℃左右。分别加入浓度为25、50、100、200μg/mL的CPRE无菌溶液，摇匀备用。以无菌水作为对照。本培养基的氮源来自于_________。

马铃薯培养基配方
成分	马铃薯	葡萄糖	琼脂	蒸馏水
含量	200g	20g	15-20g	定容至1000mL

(2)将含不同浓度CPRE的培养基分别涂于载玻片上凝固后，接种20μL指状青霉孢子悬浮液，在适宜条件下培养一段时间后，用显微镜观察孢子萌发情况。各组萌发率的计算公式为：视野内萌发孢子数/视野内孢子总数×100%；根据萌发率计算实验组的萌发抑制率，计算公式为__________________。
统计结果表明CPRE能抑制指状青霉孢子萌发，且随浓度的增加抑制效果增强。
(3)进一步研究发现，CPRE可抑制指状青霉的生长，且一定范围内随CPRE浓度的增加抑制效果增强。为了探究CPRE抑制指状青霉的机理，研究者进行了如下检测。
①检测不同浓度CPRE处理，菌丝几丁质（真菌细胞壁的主要成分）含量和胞外AKP酶活性，结果如下图。图1和图2的结果表明，CPRE改变了细胞壁的结构和功能，判断依据是_________。

注：AKP酶（碱性磷酸酶）由细胞合成后分泌到细胞壁与细胞膜的间隙。
②再取对照组和实验组的指状青霉菌丝，用碘化丙啶进行染色（与DNA结合产生红色荧光的染料，碘化丙啶不能通过活细胞膜，但却能穿过破损的细胞膜而对核染色）。结果出现_________，证明CPRE破坏了细胞膜的完整性。
(4)请结合以上研究分析说明CPRE抵御指状青霉感染的作用机制：__________________。

3 . 纤维素被纤维素分解菌分解后可以用来生产乙醇。实验室中常用刚果红培养基鉴别纤维素分解菌，其原理是在含纤维素的培养基中添加刚果红，刚果红会与纤维素形成红色复合物，若纤维素被分解，则不能形成该复合物，培养基中就会出现以这些菌落为中心的透明圈。下列相关叙述正确的是（       ）

A．刚果红培养基中除了纤维素、刚果红，还必须添加足量碳源物质

B．实验中需要将富集培养后的待测菌液直接涂布在刚果红培养基中

C．应选择菌落直径与周围透明圈直径比值大的菌落进行纯化培养

D．在刚果红培养基上长出的有透明圈的菌落需要进一步确定其产纤维素酶的能力

4 . 某化工厂的污水池中有一种有害的难以降解的有机化合物X，研究人员用化合物X、磷酸盐、镁盐以及微量元素等配制培养基，成功筛选得到能高效降解X的细菌（目的菌），实验的主要步骤如图所示（含化合物X的培养基不透明）。回答问题：

(1)培养基中加入化合物X作为唯一碳源的目的是____________。实验过程中进行振荡培养的作用是____________。
(2)实验过程中获得纯净“目的菌”的关键是____________。实验人员应该挑取图2乙中____________菌落重复图1所示实验过程，将固体培养基得到的目的菌重复多次上述图1过程的目的是____________。
(3)图2甲所示接种方法是平板划线法，1是起始区，在图中____________（填图中序号）区域更易获得单菌落；运用该方法接种得到单菌落需要注意的事项有：____________（答两点）。
(4)实验人员将一段人工合成的转入大肠杆菌，使大肠杆菌产生能降解化合物X的酶（酶Y），为了比较酶Y与天然酶（酶W）降解X能力的差异，利用含有一定浓度化合物X的固体培养基进行实验，请写出简要实验思路：________________________。

5 . 测定水样是否符合饮用水卫生标准，常用滤膜法测定大肠杆菌的数目。流程如图所示：用滤膜过滤待测水样→水样中的细菌留在滤膜上→将滤膜转移到伊红美蓝的培养基（EMB培养基）上培养→统计菌落数目（EMB培养基可用于鉴定大肠杆菌，大肠杆菌菌落在该培养基上呈现黑色）。据图回答问题：

(1)过滤待测水样用到的滤杯、滤膜和滤瓶首先需要进行消毒灭菌处理，保证实验不受其它微生物干扰。与过滤有关的操作都要在________旁进行。
(2)将完成过滤之后的滤膜紧贴在EMB培养基上，这属于微生物培养中的________操作。从培养基的功能角度分析，EMB培养基属于________培养基。为检测该培养基灭菌是否彻底，对于该培养基应采用的检测方法是_________________。
(3)某生物兴趣小组同学尝试按照上述方法，在无菌操作下将10mL待测水样加入到90mL无菌水中，稀释后的100mL菌液通过滤膜法测得EMB培养基上的菌落数平均为124，黑色菌落数平均为31，则推测1L待测水样中的大肠杆菌数目为________个。
(4)该同学进一步思考，利用滤膜法也可能用于测定待测水样中其他微生物的数目。他取了两份水样，一份待测水样来自变酸的果酒，从中检测到两种微生物，在不借助显微镜的情况下，可以通过观察________来区分。另一份来自某公园的观赏湖，若要通过测量其中蓝细菌的数目来研究水华，培养基配方中则必需添加________（在水、无机盐、碳源、氮源中选择）。

6 . 研究人员发现堆肥中的固氮菌可有效减少堆肥过程中的氮损失，他们欲筛选出嗜热固氮菌。下列有关叙述不正确的是（       ）

A．筛选实验中所用样品最好从处于高温期的堆肥中选取

B．可用稀释涂布平板法对目的菌种进行计数

C．筛选实验中需将样品适当稀释后涂布在含氮培养基上

D．筛选所得目的菌需接种到堆肥中用以检测其保氮效果

8 . 中国有着悠久的发酵历史，利用发酵原理生产的产品深受大家的喜爱，请结合下面的发酵技术，回答问题：
Ⅰ．甜瓣子是豆瓣酱的重要成分之一。用蚕豆瓣和米曲霉制成豆瓣曲，再向曲中加入一定量的盐水制成酱醅，经发酵即可获得甜瓣子。某研究团队对发酵阶段传统工艺（盐度15%，温度37℃，发酵30天）进行改良，提升了甜瓣子风味。两种工艺的结果比较如图所示。

(1)蚕豆瓣能为米曲霉的生长提供________（填“碳源”“氮源”或“碳源和氮源”），将蚕豆瓣和米曲霉混合，相当于微生物培养中的________。盐水的作用有调味；抑制其他微生物的生长的作用，若所加盐水浓度过高，则会使细胞________，影响微生物的生长，抑制发酵过程。
(2)新工艺建立了分段发酵模式，即前期盐度6%、温度12℃，中期盐度6%、温度37℃，后期盐度15%、温度37℃。前期较低温度可保持较__________（填“低”或“高”）的霉菌总数，中后期温度升高则增强了________的活性从而增加了氨基酸态氮的含量。传统工艺发酵过程中，9天后增加的细菌最可能是________（填“耐酸菌”“耐碱菌”或“耐盐菌”）。据图分析，工艺改良后，甜瓣子风味得以提升与最终的________有关。
Ⅱ．青梅原产于中国，主要分布于广西、贵州等省份，以青梅为原料制成的青梅果醋，是一种很受城市白领喜欢的产品。
①菌种筛选及发酵生产涉及以下三种培养基：

培养基A	葡萄糖、酵母粉、无水碳酸钙、琼脂、3%乙醇
培养基B	葡萄糖、酵母粉、3%乙醇
培养基C	葡萄糖、酵母粉、6%乙醇

(3)为了提高出汁率，通常在青梅压榨之前加入一定浓度的_______，去除细胞壁。加入装有培养基B的摇瓶中培养一段时间，用稀释涂布平板法接种于培养基______（填“A”或“B”或“C”）上，选取透明圈较大且生长良好的单菌落10株。将上述初筛的10株醋酸菌接种于培养基______（填“A”或“B”或“C”）中，并检测总酸含量和乙醇转化率。

9 . 下列有关实验的操作中，正确的有几项（       ）
①接种操作要在酒精灯火焰附近进行
②不耐高温的牛奶可使用巴氏消毒法，其优点是能够杀死全部微生物，保留牛奶风味
③在微生物接种的实验中，用95%酒精对实验者的双手和超净工作台进行消毒
④培养基要进行湿热灭菌
⑤加入培养基中的指示剂和染料不需要灭菌
⑥为了防止污染，接种环经火焰灭菌后应趁热快速挑取菌落

A．0项

B．1项

C．2项

D．3项