2 . 大豆是我国重要的经济作物之一，土壤盐渍化已经成为影响大豆产量的主要非生物胁迫因素之一，野大豆是栽培大豆的近缘野生种，具有抗盐碱、抗病、抗虫、耐旱等较强的抗逆性和环境适应性，因此具有很高的研究价值。科学家从滨海盐渍土野大豆根瘤菌分离筛选根瘤菌DL3，对野大豆和大豆均具有促生作用，从而为发展盐土农业和实现大豆等作物在盐碱地的种植贡献力量。下图是主要流程，请回答：

①1g根瘤消毒②加入无菌水研磨成匀浆3mL③梯度稀释④涂布平板⑤纯化培养⑥耐盐根瘤菌株的复筛
酵母甘露醇琼脂（YMA）（g/L）：酵母提取物20.0，甘露醇5.0，K₂HPO₄5.0，MgO₄0.5，NaC10.186，CaCO₃1.2，琼脂20.0，pH值6.8~7.2。
阿须贝氏（Ashby）培养基（g/L）：KH₂PO₄0.2，MgO₄0.2，NaC10.2，CaCO₃5.0，甘露醇10.0、CaCO₃5.0、琼脂18.0、pH值6.8~7.0。
(1)按功能分Ashby培养基属于___________，该培养基中能为复筛的根瘤菌提供___________等营养物质。___________改良的Ashby培养基中NaCl浓度提高到7%
(2)过程④吸取上清液0.1mL涂布于YMA初筛培养基平板上，如果培养后平均长出了40个菌落，则该样本中每克根瘤约含根瘤菌_________个。用过程④这种方法测定的根瘤菌数量往往会比实际活菌数目要少，这是因为_______________。
(3)YMA培养基能够筛选根瘤菌的原理是____________。

4 . 黄粉虫又叫“面包虫”，对环境条件适应能力极强，可以肤皮等小麦加工副产品为食，干燥的黄粉虫不同发育时期的蛋白质含量如下表所示。

发育阶段	幼虫	蛹	成虫
蛋白质含量（干重）	40	57	60

(1)黄粉虫被誉为“蛋白质饲料库”，是进行家禽、鱼类、牛蛙等高蛋白类特种养殖不可多得的良种饲料，这是因为它具有________________等优点（至少答两点）。
(2)北京航空航天大学研究团队发现取自美国的黄粉虫肠道细菌能高效降解低密度泡沫塑料（主要成分为聚苯乙烯）。为从黄粉虫肠道内分离纯化能降解聚苯乙烯的细菌，研究者进行了如图所示实验。

①图示实验流程中X是____________，可为黄粉虫肠道细菌提供____________。
②富集培养黄粉虫肠道细菌时需要对培养基（培养物）进行一定的处理，这些处理应当包括____________（多选）。
A．将培养基调至弱酸性
B．给培养基中加入凝固剂（琼脂）
C．对培养基进行高压蒸汽灭菌
D．将培养物置于低氧环境中
E．将培养物置于恒温培养箱中
③为使菌液能均匀的涂布在培养基表面，进行涂布时应当____________，若实验操作准确，但在培养基表面却未发现单菌落，原因可能是_______________。

5 . 反硝化细菌是一类能将硝态氮（NO₃^-—N）通过一系列中间产物（NO₂^-、NO、N₂O）还原为气态氮（N₂）的细菌群，反硝化作用也是产碱过程。反硝化细菌对于解决水体富营养化和亚硝酸盐对水生动物的毒害，具有十分重要的意义。某课题小组通过采集活性污泥样品，并从中分离反硝化细菌，研究影响菌株反硝化作用的主要环境因素，为反硝化细菌在养殖废水处理应用中提供理论指导。反硝化细菌的分离和鉴定流程如下，回答下列问题：

(1)将采集的活性污泥样品1mL加入到装有9mL、pH7．2的磷酸盐缓冲液的l00mL烧杯中，取样接种到富集培养基中培养，富集培养基的成分有：KNO₃2g，FeSO₄0．2g，KH₂PO₄1．0g，MgSO₄0．5g，NaCl2g，CaCO₃5g，其中为反硝化细菌提供氮源的是_____，富集培养的目的是_____。
(2)将富集后的样品进行梯度稀释后，使用_____（填工具）将样液均匀涂布在BTB培养基（BTB培养基初始pH=6．8，BTB是酸碱指示剂，酸性条件下为黄色，中性条件下为绿色，碱性条件下为蓝色）上，每个稀释度下涂布3个培养基是为了_____，放在30℃环境中培养2~3天后，挑选周围显_____色的单菌落在固体培养基上划线分离，获得纯菌株。
(3)将液体培养基导入大试管中，将杜氏小试管倒立放入大试管中，试管中的气体排尽，接入纯菌株，30℃恒温培养5~7d，观察到小管内有气泡，检测到N₂0，即可鉴定纯菌株为目的菌。不能依据培养液中硝酸盐的浓度变低来鉴定目的菌，原因是_____。
(4)向几组等量的灭菌后的反硝化培养基中分别以1%、3%、5%、7%和10%的接种量接入菌株N1，在30℃，120r/min摇床震荡培养，24h后测量NO₃^-—N等指标，结果如右图所示：
①本研究的目的是_____。
②当投菌量达到_____时，反硝化效果最好，NO₃^-—N和总脱氮率均较高。当投菌量继续增加，NO₃^-—N和总脱氮率反而下降，推测可能的原因是_____（答1点）。

6 . 已知一种含N有机物X（仅含有N、H两种元素）不易降解，会造成环境污染。某生物兴趣小组同学提出：土壤中可能存在高效降解X的微生物。主要流程见下图，请回答下列问题：

(1)经步骤③最后一次稀释之后若在3个平板上分别接入0.1mL稀释液，经适当培养后，得到的结果是：39、38、37，则毫升菌液中的活菌数为_________个。运用这种方法统计的结果往往较实际值___________，原因是_________。
(2)步骤④采用下表所示成分配制的培养基筛选土壤中能高效降解X的细菌（目标菌M）：

KH2PO4	Na2HPO4	MgSO47H2O	蛋白胨	葡萄糖	尿素	琼脂	有机物X
1.4g	2.1g	0.2g	1.0g	10.0g	1.0g	15.0g	1.0g

回答下列问题：
从物理性质上看，该培养基为___________培养基，培养基灭菌的一般方法为___________，目标菌M的同化类型是__________。根据培养基的成分判断，该培养基__________（填“能”或“不能”）分离出土壤中分解有机物X的细菌。
(3)上述实验采用了两种接种方法，其中步骤⑤的接种方法是__________。
(4)将获得的3种待选微生物菌种甲、乙、丙分别接种在1L含20mg物质X的相同培养液中培养（培养液中其他营养物质充裕、条件适宜），观察从实验开始到微生物停止生长所用的时间，甲、乙、丙分别为32小时、45小时、16小时，则应选择微生物____________（填“甲”“乙”或“丙”）作为菌种进行后续培养。

7 . 下图是大肠杆菌控制乳糖代谢的相关DRA结构J调节基因编码的阻遏蛋白能与操纵基因结合，从而阻碍 RNA 聚合酶与启动子的结合，而该阻遏蛋白会与乳糖分子结合面失去活性。CAP 结合区能与被cAMP 激活后的 CAP 蛋白综合.从而促进/RNA 聚合酶与启动子的结合，但葡萄糖能显著抑制cAMP的合成。启动子、操纵基因、结构基因Z、结构基因 Y、结构基因 A 依次紧密相连。结构基因 Z、结构基因Y、结构基因 A 共用启动子，分别编码与乳糖分解有关的酶。下列叙述正确的是（       ）

   

A．若想大量获得结构基因 Y 的表达产物，可将大肠杆菌培养在以乳糖为唯一碳源的培养基中

B．若调节基因发生甲基化，可能会增强大肠杆菌对乳糖的利用能力

C．结构基因 Z、结构基因Y、结构基因 A 表达时分别转录形成三条 mRNA，有各自的起始密码子和终止密码子

D．在葡萄糖、乳糖均大量存在时，人为增加细胞内cAMP 含量也能促使结构基因Z正常表达

8 . 滤膜法常用于对水体中的微生物进行计数，其大致流程：先用滤膜过滤待测水样，水样中的微生物留在滤膜上，再将滤膜转移到培养基上培养并统计菌落数目，如图所示。回答下列问题：
   
(1)该实验中所用培养基属于____（按物理性质分类）培养基，此类培养基配制时除水和各种营养成分外，还需加入____。配制好的培养基通常用____法灭菌，如何检测该培养基灭菌是否彻底？____。
(2)滤膜法可用于检测饮用水中大肠杆菌是否超标，培养基中需加入____，统计呈____的菌落。
(3)检测人员用滤膜过滤5L水样后培养统计大肠杆菌菌落数（重复三次），结果如下表，该水样中的大肠杆菌密度为____个/100mL。对水样中的大肠杆菌计数，还可用稀释涂布平板法；与滤膜法相比，通常稀释涂布平板法适用于____的水样。

组别	1	2	3
菌落数	3	1	5

9 . 聚羟基丁酸酯（PHB）是某些细菌在碳源充足、氮源缺乏状态下产生的一类颗粒状、可作为细菌体内碳源和能量储备物的高分子化合物，能被苏丹染料染色，可溶于氯仿。PHB具有生物可降解性和生物相容性，用于可降解包装材料及医药行业。天然菌中的PHB产量较低，对天然菌进行诱变和筛选可得到高产PHB合成菌。请回答下列问题。
(1)PHB合成菌的分离培养基的成分有水、葡萄糖、牛肉膏、蛋白胨、NaCl和__________，其中能提供维生素的有__________，为使PHB合成菌细胞内积聚更多PHB，该培养基成分配比的特点是__________。
(2)将等浓度土壤稀释液接种在PHB分离培养基上后，甲组用紫外线照射，乙组不作处理。倒置培养一段时间后，发现甲组的菌落数少于乙组，原因是___________，倒置培养有利于__________。通过显微观察法初筛PHB合成菌的具体操作是在培养基中加入__________，然后在显微镜下观察，有较多橘黄色颗粒的细菌即为PHB合成菌。复筛时需要提取胞体内的PHB，将细胞破碎后用__________来萃取PHB，从而提取细胞内的PHB。
(3)对复筛得到的A~E五个菌株单独培养，检测PHB产量，结果如下图。A~E菌株中适于作工程菌的是菌株__________，依据是___________、___________。

   

(4)在发酵罐内发酵是发酵工程的中心环节。连续发酵生产PHB时，要随时检测培养液中PHB合成菌的数量、__________等，以了解发酵进程。还要及时添加必需的营养组分，要严格控制__________和溶解氧等发酵条件。

10 . 毕赤酵母以甲醇作为唯一碳源时需要大量表达醇氧化酶（AOX1），AOX1基因的长度为2200bp。科研人员将蜂毒肽（MEL）与石斑鱼c型溶菌酶（Ec-cLYZ）基因插入pPICZαA质粒上构建重组表达质粒，导入毕赤酵母以获得高效低毒的广谱抑菌融合蛋白，实验的主要流程如下，请回答：

注：重组质粒1是人工合成的包含MEL和Ec-cLYZ融合基因
(1)斜带石斑鱼c型溶菌酶属于免疫系统的_______。相对于原核表达系统，毕赤酵母表达系统翻译出的蛋白可以经过_______加工修饰，表达的蛋白具有天然生物学活性。
(2)为获得MEL和Ec-cLYZ融合基因，同时两端带有pPICZαA的同源序列，过程①PCR反应体系中加入的模板是_______，引物应该选择以下_______。
A.5’-GAAACTGAAGCTCCCGAATTCGGTATTGGTGGT-3’
B.5’-CATCATCATCATCCCCGTCGACTTGATGCTGCAAGC-3’
C.5’-GGGGATGATGATGATGGAATTCTTGATGCTGCAAGC-3’
D.5’-GGGAGCTTCAGTTTCGTCGACGGTATTGGTGGT-3’
(3)过程②将PCR产物片段与线性化的pPICZαA混合后，在重组酶的作用下可形成环化质粒，这一过程与传统构建重组质粒相比不需要_______酶。
(4)为了验证构建是否成功，利用限制性内切酶EcoRI和SalI对提取出的重组质粒2进行双酶切，利用琼脂糖凝胶电泳检测，结果显示分别得到大小约为_______（限制酶识别序列不计）的片段。过程③将重组质粒2导入大肠杆菌的目的是_______。
(5)过程⑤培养毕赤酵母时加入_______作为唯一碳源，目的是_______。
(6)目的基因与宿主基因组染色体的交换方式包括单交换和双交换。含有目的基因的载体插入宿主染色体的AOX1基因的上游或下游，不影响AOX1基因的正常表达，属于单交换；当发生基因取代时，含目的基因的载体与宿主染色体中AOX1基因区域发生交换，宿主AOX1基因编码区域被全部取代，属于双交换。以AOX1基因两端序列为依据设计引物，对三株重组酵母（编号1、2、3）进行菌液PCR、电泳后得到下图，根据结果推断目的基因与宿主基因组染色体发生单交换的酵母菌株有_______。