1 . 为了将某纳米抗体和绿色荧光蛋白基因融合表达，运用重组酶技术构建质粒，如图1所示。请回答下列问题：

   

(1)分别进行PCR扩增片段F1与片段F2时，配制的两个反应体系中不同的有______，扩增程序中最主要的不同是______。
(2)有关基因序列如图2．引物F2-F、F1-R应在下列选项中选用______。
   

A．ATGGTG------CAACCA

B．TGGTTG------CACCAT

C．GACGAG------CTGCAG

D．CTGCAG------CTCGTC’

(3)将PCR产物片段与线性质粒载体混合后，在重组酶作用下可形成环化质粒，直接用于转化细菌。这一过程与传统重组质粒构建过程相比，无需使用的酶主要有_______。
(4)转化后的大肠杆菌需采用含有抗生素的培养基筛选，下列叙述错误的有_______。

A．稀释涂布平板需控制每个平板30~300个菌落

B．抗性平板上未长出菌落的原因一般是培养基温度太高

C．抗性平板上常常会出现大量杂菌形成的菌落

D．抗性平板上长出的单菌落无需进一步划线纯化

(5)为了验证平板上菌落中的质粒是否符合设计，用不同菌落的质粒为模板，用引物F1-F和F2-R进行了PCR扩增，质粒P1~P4的扩增产物电泳结果如图3．根据图中结果判断，可以舍弃的质粒有______。

   

(6)对于PCR产物电泳结果符合预期的质粒，通常需进一步通过基因测序确认，原因是______。