1 . 环境DNA（eDNA——环境中的总DNA）技术在鱼类生态学中应用的基本方法是：从目标水体环境（如池塘）中获得eDNA，对鱼类科、属、种等的特定核酸序列扩增、定量和测序。应用该技术理论上不易实现的是（     ）

A．外来物种入侵的监测	B．种群年龄结构的建立
C．两个种群密度的比较	D．两个物种生物量的比较

2 . 研究人员利用转基因技术改造乳酸杆菌，将其添加于饲料中，以提高家禽养殖效率。枯草芽孢杆菌能分泌一种可降解纤维素的酶，这种酶由W基因编码。为在乳酸杆菌中表达W基因，需使用图1中质粒为载体，图2为含W基因的DNA片段。
   
(1)采用_____________技术可以快速、大量获得W基因。利用该技术扩增目的基因时，需要____________等作为原料和直接能源物质。
(2)启动子是____________识别和结合的部位。很多启动子具有物种特异性，在图1质粒中插入W基因，其上游启动子应选择____________（填写字母）。
A．枯草芽孢杆菌启动子     B．乳酸杆菌启子   C．农杆菌启动子
(3)根据图1和图2，应使用限制酶____________切割图2中含W基因的DNA片段，导入质粒以获得能正确表达W基因的重组质粒。所得重组质粒转化乳酸杆菌后，使用含_____________的培养基筛选，以得到转入W基因的乳酸杆菌。
(4)目的基因导入受体细胞后，常用_________技术检测目的基因是否翻译出降解纤维素的酶。
(5)为确定导入重组质粒的乳酸杆菌是否具有分解纤维素的能力，研究人员用液体培养基分别培养下表所示菌种。取部分菌液上清液测定酶活力，实验方案及测定结果如下表所示。表中的X应为____________。

菌种	酶活性相对值
乳酸杆菌	未检出
X	未检出
导入了重组质粒的乳酸杆菌	0.96

3 . 微生物吸附是重金属废水的处理方法之一。金属硫蛋白（MT）是一类广泛存在于动植物中的金属结合蛋白，具有吸附重金属的作用。科研人员将枣树的MT基因导入大肠杆菌构建工程菌。请分析并回答下列问题。
   
(1)从枣树相关细胞中提取____，通过逆转录获得枣树的MTcDNA，然后根据枣树MTcDNA的核苷酸序列设计了相应的引物（图1甲），以通过PCR扩增MT基因。已知A位点和B位点分别是起始密码子和终止密码子对应的基因位置。选用的引物组合应为____，这些引物的长度一般包含15～23个碱基，过短会导致特异性差，过长则会导致____。若1个MTcDNA扩增n次，则总共消耗引物____个。
(2)本实验中，PCR所用的____酶扩增出的MT基因，其末端为平末端。由于载体E只有能产生黏性末端的酶切位点，需借助中间载体P将MT基因接入载体E。载体P和载体E的酶切位点及相应的酶切序列如图1乙所示。
①选用____酶将载体P切开，再用____酶将MT基因与载体P相连，构成重组载体P'。
②选用____酶的组合对载体P'和载体E进行酶切，将切下的MT基因和载体E用酶连接，将得到的混合物导入到用____离子处理的大肠杆菌，然后筛出MT工程菌。
(3)MT基因在工程菌的表达量如图2所示，结果仍无法说明已经成功构建能较强吸附废水中重金属的MT工程菌，以下叙述中能支持该观点的是____。
   
①尚未对MT工程菌合成的MT蛋白的活性进行测定
②尚未对MT工程菌吸附重金属的能力进行鉴定
③尚未在个体生物学水平进行抗原-抗体杂交
大肠杆菌MT工程菌
④尚未对MT基因进行碱基序列的测定和比较

4 . 玉米的祖先——野生玉米，名叫“大刍草”，经过9000多年人工驯化，被改造成现代玉米。我国中科院科学家经过长达10年不懈努力，从野生玉米“大刍草”中，成功找回玉米人工驯化过程中丢失的一个控制高蛋白含量的优良基因THP9，克隆出来并将此高蛋白基因转移到玉米细胞内，获得了转基因高蛋白玉米新品种。请回答相关问题：

EcoRI	BamHI	KpnI	MfeI	HindⅢ

(1)若科研人员获得了THP9基因对应核苷酸序列，则可利用DNA合成仪直接合成目的基因，该种获取目的基因的方法是___________。
①化学合成法②PCR法③基于大规模筛选的方法
(2)构建基因表达载体时，若科研人员需将THP9基因整合到质粒上，如图，已知图中THP9基因转录方向为从左往右，应使用限制酶______________切割如图中质粒，使用限制酶________________切割图中含THP9基因的DNA片段，以获得能正确表达THP9基因的重组质粒。
(3)限制酶来源于原核生物，不会切割本身的DNA分子是因为_____________________。
(4)TPH9基因转录的模板链是______，利用PCR技术对THP9基因进行扩增的原理是__________。
(5)为了检测转基因技术是否成功，科研工作者在个体水平上的检测方法是____________________。