1 . 血栓调节蛋白（TM）只能在血管内皮细胞中合成，具有调节凝血的功能。为了解决异种器官移植时引起凝血紊乱的问题，科研人员研究制备了猪血管内皮特异性表达人血栓调节蛋白（hTM）的转基因猪。下图1表示部分研究过程，请回答：

注：ori是复制原点，T为终止子，puro为嘌呤霉素抗性基因，pTM为猪血栓调节蛋白，相关限制酶识别
序列及切割位点如下表：

限制酶	XhoI	claI	EcoRV
识别序列及切割位点	C↓TCGAG	AT↓CGAT	GAT↓ATC

(1)步骤①将pTM启动子插入到质粒1中，其中pTM启动子的作用是：____。
(2)步骤②设计引物时，应该在引物____端加入claI和EcoRV两种限制酶的识别序列。
(3)步骤③将hTM编码区插入质粒2中，该过程中至少需要____种酶，分别是：____。
(4)步骤③获得的质粒3经XhoI、EcoRV酶切后电泳，结果如下图2，据结果可判断目的基因____（填“成功插入”或“未插入”）质粒。

(5)质粒3导入猪胎儿成纤维细胞常用的方法是____。将处理后的成纤维细胞接种至培养皿中培养48h后经____处理分散成单个细胞，再按每孔一个细胞接种至96孔板（如上图）中，加入_____筛选获得抗性细胞，再提取抗性细胞的DNA进行PCR鉴定，将呈阳性的细胞留存待用。
(6)取留存细胞的细胞核，显微注射到____中，再经过____等技术（至少两种）获得表达人血栓调节蛋白的转基因猪。

2 . 2018年《细胞》期刊报道，中国科学家率先成功地应用体细胞对非人灵长类动物进行克隆，获得两只克隆猴——“中中”和“华华”。克隆猴的成功培育标志着我国非人灵长类疾病动物模型的研究处于国际领先水平。请回答下列有关问题。

(1)成纤维细胞培养一般使用____________（填“固体”或“液体”）培养基，除了细胞所需要的营养物质外通常还需要添加____________等一些天然成分。动物细胞培养是置于含有95%空气和5%CO₂的混合气体的____________中进行培养。
(2)在培养过程中发现贴壁细胞有接触抑制现象，这时需要对细胞进行分瓶培养，请简要写出分瓶培养的操作过程：____________________________________。
(3)对卵母细胞供体通常要进行____________处理，可获得更多的卵母细胞。研究人员在将成纤维细胞注入去核的卵母细胞前，用灭活的仙台病毒进行了短暂的处理。在此过程中，灭活的仙台病毒所起的作用是________________________。
(4)科研人员发现对于灵长类动物的体细胞来说，单靠核移植本身并不足以使重构胚顺利发育成存活个体，还需要对供体细胞核进行表观遗传修饰才能开启细胞核的全能性。研究表明染色体组蛋白动态可逆地被修饰酶所改变，控制着基因的表达（如图所示）。

①据图分析，H3K9____________有利于细胞核全能性表达性基因恢复表达，从而显著提高重构胚的发育率。
A．乙酰化和甲基化                    B．乙酰化和去甲基化
C．去乙酰化和甲基化                    D．去乙酰化和去甲基化
②科研人员通过设计实验验证以上观点。请根据实验结果填写出表格中各组的实验处理方法。可供选择的注入重构胚的试剂：组蛋白去甲基化酶的mRNA、组蛋白甲基化酶的mRNA、组蛋白去乙酰化酶抑制剂、生理盐水
实验结果：分别检测各组的胚胎发育率，结果为：丙组>甲组=乙组>丁组

分组	注入重构胚的试剂
甲	组蛋白去乙酰化酶抑制剂
乙	____________
丙	____________
丁	生理盐水

3 . 我国全面放开二孩政策已正式实施。一些高龄产妇希望通过试管婴儿技术圆二胎梦。请回答以下相关问题:
（1）由于女性的自然周期产生的卵子太少，在取卵前通常需要注射促性腺激素，而不通过服用雌激素来直接促进更多的卵泡发育，原因是___________________________________。
（2）在体外受精前，医生借助超声波探测仪等工具用吸卵针从某女士卵巢中吸取卵母细胞；随后将取出的卵母细胞置于与____________中相似的环境，让它进一步发育成熟。受精过程中，精子顶体内含有的顶体酶能协助精子穿过____________，接触卵黄膜。
（3）胚胎的早期培养与动物细胞培养一样，都需要满足____________及相应的气体环境、营养等条件。
（4）对移植的胚胎进行性别鉴定时，要先从胚胎细胞中提取DNA，下列关于“DNA的粗提取与鉴定”实验的叙述，正确的有________________________。
A.DNA在2mol/LNaCl溶液中的溶解度大于在0.14mol/LNaCl溶液中的
B.实验中用冷却的酒精，可以进一步提取含杂质较少的DNA
C.DNA溶液加入二苯胺试剂沸水浴加热，冷却后变蓝
D.人血液中的红细胞可以作为提取DNA的材料
（5）若做试管婴儿的夫妇中，妻子患有线粒体疾病（线粒体DNA缺陷），丈夫正常，则子女患病情况为__________。若要获得健康的孩子，可通过特殊的设计试管婴儿技术即“三亲婴儿”（医生要去除女性捐赠者卵子中的细胞核，接着用母亲卵细胞中对应的遗传基因取而代之，最后再按照标准的试管婴儿技术进行培育）。“三亲婴儿”的获得过程，除运用胚胎工程的技术手段外，还要特别运用__________技术。

4 . 某科研团队利用某具有线粒体基因缺陷的女性卵子中的健康细胞核和捐赠者去掉细胞核的卵子，“拼装”一个新的卵子，再通过一系列现代生物技术，使这对夫妇最终培育出正常婴儿。请回答有关问题：
（1）为重新“拼装”卵子，需要通过显微操作进行________。
（2）精子与卵子在体外受精后，应将其移入________中继续培养，以检查受精状况和受精卵的发育能力。当胚胎发育到适宜的阶段，可将其取出向受体移植或________。
（3）培育这个“三父母婴儿”的过程中利用到的现代生物科技技术有__________(回答出两点即可)。
（4）在体外受精时，精子首先要进行________处理，卵细胞则要培养到________(时期)才能与精子结合。
（5）采用________技术，能得到“同卵双胞胎”，用这种方式诞生的双胞胎，其性别________。这种技术一般采用发育良好、形态正常的________。

5 . 2015年2月3日，英国议会下院通过一项历史性法案，允许以医学手段培育“三亲婴儿”。身患线粒体遗传疾病的女性将因此获得更多生育选择和机会。三亲婴儿的培育过程可选用如下技术路线。

（1）人体中，线粒体存在于除___________外的人体细胞中；可采用___________法从细胞中分离出线粒体。
（2）图中细胞M是处于___________(写出具体分裂时期）的卵母细胞，卵细胞完成受精的重要标志是在卵黄膜和透明带间隙中观察到________________。
（3）广义上的线粒体病的发病机制非常复杂，可呈现常染色体显性遗传、隐性遗传或伴性遗传，也可呈现母系遗传等特点。由此分析，引起线粒体病的基因突变可发生于_____________的DNA.
（4）临床上，当一位患者的基因变异不能被确定时，完整的生化检查（代谢产物分析、酶测定、肌肉活检）可以辅助诊断。其中，乳酸和丙酮酸水平在一定程度上反映了线粒体功能。进行最小运动量测试，患者运动后10分钟血乳酸和丙酮酸仍不能恢复正常，且乳酸：丙酮酸比值会_________(高于/低于）健康人。

6 . 2015 年2月3日，英国议会下院通过一项历史性法案，允许以医学手段培育“三亲婴 儿”．三亲婴儿的培育过程可选用如图技术路线：

（1）为了某些需要，需对胚胎的性别进行鉴定．目前最有效最准确的方法是 SRY-PCR 法，操作的基本程序是：从被测的囊胚中取出几个_________（填“滋养层”或“内细胞团”）细胞，提取 DNA 为模板，然后用位于 Y 染色体上的性别决定基因（即 SRY 基因）的一段核苷酸序列作_________，在_________催化作用下进行 PCR 扩增。
（2）三亲婴儿的培育技术_________ （填“能”或“不能”）避免母亲的线粒体遗传病基因传递给 后代，而_________（填“能”或“不能”）避免母亲的红绿色盲基因传递给后代。三亲婴儿的染色体_________（填比例）来自母亲提供的细胞核。
（3）由于女性的自然周期产生的卵子太少，医生在取卵前通常需要注射__________激素，促使一次有更多的卵泡发育；重组细胞需培养到 MⅡ中期的原因是该时期的卵母细胞才具备_________，重 组细胞体外培养所需的气体主要是O₂ 和CO₂，CO₂的主要作用是________。
（4）试管婴儿技术采用了_________、________等技术；
（5）受精的标志是_________。

7 . 某女性患有输卵管阻塞，该夫妇借助“管婴儿”技术，一次生殖过程中生出两个孩子，如图所示。请分析回答：

（1）过程X若想顺利进行，首先来自父方的精子要进行__________。
（2）若借助人工手段获得这样的两个胎儿，需要用到的技术手段是胚胎分割。在对囊胚阶段的胚胎进行分割时，要注意将________________________________________。此时，也可以取囊胚的__________细胞对胚胎进行性别鉴定。
（3）____________（生物技术）是甲、乙产生的最后一道工序。一般来说，该技术操作比较合适的时期是__________________。
（4）2015年2月3日，英国议会下院通过一项历史性法案，允许以医学手段培育“三亲婴儿”，三亲婴儿的培育过程可选用如下技术路线。

①由于女性自然周期产生的卵子太少，捐献者在取卵前通常需要注射__________激素，促使一次有更多的卵泡发育。
②三亲婴儿的染色体来自于________________________（填细胞名称），这种生殖方式属于_____________（有性/无性）生殖。
③三亲婴儿的培育技术__________（能/不能）避免母亲的线粒体遗传病基因传递给后代。

8 . 回答下列与生物技术工程有关的问题：
(1)抗体—药物偶联物(ADC)通过细胞素与能特异性识别肿瘤抗原的单克隆抗体结合，实现了对肿瘤细胞的选择性杀伤，ADC通常由抗体、接头和药物三部分组成，其作用机制如图，请回答下列问题

①ADC在治疗肿的作用是___________。
②细胞毒素药物对机体正常组织会有毒性，若抗体的选择性较差或正常组织存在与抗体对应的抗原，则会造成细胞毒素药物投递到________________，造成靶向毒性。
③接头不稳会造成________，在体内暴露，从而造成脱靶毒性。
(2)引物是一小段能与DNA母链的一段基序列补配对的短单链核酸，用于PCR的引物长度通常为20~30个核酸，在配对时引物是与母链的________(填“3′”或“5′”)端配对，在DNA聚合酶作用下将4种脱氧核苷酸添加到引物的_______(填“3′”或“5′”)端。
(3)高产奶牛的繁殖可以通过克隆，普通奶牛提供卵细胞，高产奶牛提供体细胞核若研究发现供体高产奶牛细胞中线粒体发达，故它的产奶量高，则获得的克隆小牛成年后________(填“具有”或“不具有”)这一优良性，分析的依据是______________。

9 . 2016年10月19日美国新希望生殖医学中心正式宣布，世界首个核移植“三父母”男婴已于2016年4月诞生。为中东一位线粒体携带有亚急性坏死脑病基因的母亲带来了希望。培养过程如下图，据图回答：

(1)获得重组卵母细胞A也会用到体细胞核移植技术，完成①过程需要用微型吸管吸出______________，完成④过程的B细胞需要选择_______________________（时期）的卵母细胞。
(2)卵母细胞的获取过程中，需要对女性进行超数排卵处理，超数排卵的方法是给女性注射______激素，超数排卵技术带来的危害之一是_________________________。
(3)细胞A的培养过程③所需气体主要有O₂和CO₂，CO₂的主要作用是___________________________。
(4)为了提高已有胚胎的利用率，可采用________________技术。若选用囊胚期的胚胎，操作过程中要特别注意的问题是_______________________________________。
(5)设计试管婴儿技术与解决不孕问题而进行的试管婴儿技术的主要区别是前者需要在植入前对胚胎进行______________________________。

10 . I.科学家用植物体细胞杂交方法，将番茄叶肉细胞的原生质体和马铃薯块茎细胞的原生质体融合，成功地培育出了“番茄一马铃薯”杂种植株，如图1所示，其中①-⑤表示过程，英文字母表示细胞、组织或植株。育种工作者还利用番茄进行了三组实验如图2。据图回答下列问题：

   

(1)过程②后，在显微镜下观察融合的活细胞中有供体的____存在，这一特征可作为初步筛选杂种细胞的标志。若杂种细胞培育成为“番茄—马铃薯”植株为六倍体，则此杂种植株是否可育？____（可育/不可育）。（已知番茄为二倍体、马铃薯为四倍体）
(2)如果形成c的a、b原生质体都来自番茄细胞，那么更简单地得到多倍体番茄植株的处理方法是____。
(3)细胞的全能性是指____。
II.请根据下列两个资料回答相关问题：资料1：用化学方法激活小鼠成熟的卵母细胞得到phESC（孤雌单倍体干细胞），然后通过基因编辑技术使phESC中的3个基因沉默，phESC的细胞核状态便可接近精子细胞核的状态，如图1。资料2：用化学方法激活小鼠的精子得到ahESC（孤雄单倍体干细胞），然后对ahESC中的8个基因进行编辑，ahESC的细胞核便具有卵细胞核的特点，如图2。

   

(4)体内受精时，在精子触及卵细胞膜的瞬间，____会迅速产生生理反应阻止后来的精子进入。
(5)用促性腺激素对雌性小鼠进行____处理可得到大量卵母细胞，这些卵母细胞转化为phESC的过程相当于植物组织培养中的____过程。
(6)ahESC与精子和去核卵母细胞融合后，得到的融合细胞的性染色体组成可能是____。
(7)据图分析只依赖雄性小鼠____（填“能”或“不能”）得到孤雄小鼠，请写出两个理由支持你的判断。理由1____。理由2____。