21. CRISPR相关基因位于细菌中。当外源DNA入侵细菌时,细菌将其作为新的“间隔序列”整合到自己的基因组中,从而使CRISPR相关基因能“记住”攻击过自己的外源基因,当再次遇到该外源基因时能对其进行识别、定位和剪切,以达到保护自身的目的。相关作用过程如图所示,其中crRNA为CRISPR相关基因的转录产物,其与Cas酶结合就能起到基因剪辑的作用。回答下列问题:
(1)在细菌获取新的间隔序列后,CRISPR相关基因通过转录形成crRNA链,与Cas酶形成crRNA-Cas复合物,当再次遇到相同外源DNA时,crRNA所起的作用是
__________,其作用原理是
__________,Cas酶起到
__________的作用。
(2)视网膜上包括视杆细胞和视锥细胞。引起色素性视网膜炎的基因突变,首先会导致视杆细胞死亡,继而引起视锥细胞死亡,最终导致视网膜退化,眼睛失明。某实验室利用上述基因编辑技术和视网膜退化小鼠模型为实验材料开展相关实验,使模型小鼠的视杆细胞身份基因丧失功能,诱导视杆细胞获得视锥细胞特征,使之能够不受有害致病突变的影响。
①从DNA分子中获取模型小鼠的视杆细胞身份基因,需要使用的酶是
__________,然后使用
__________酶将视杆细胞身份基因与cAs基因、CRISPR相关基因构建为重组载体。②可使用
__________法将重组载体导入模型小鼠的受精卵中,然后使受精卵发育为小鼠。
③检测到小鼠的视网膜未退化,视觉得到改善,说明导入的重组CRISPR相关基因
__________,使视杆细胞不被引起色素性视网膜炎的基因突变所影响,不发生死亡。