21. 人体细胞中的ICF45蛋白与细胞周期调控、肿瘤发生过程有关。为探究ICF45蛋白的相关作用机制,某研究人员进行了如下实验。回答下列问题。
(1)研究人员先通过基因工程技术构建了可表达ICF45蛋白的工程菌大肠杆菌,再通过培养大肠杆菌获得ICF45蛋白。在构建过程中,研究人员从子宫颈癌细胞系细胞中提取mRNA,然后以mRNA为模板,在
________酶的作用下合成cDNA。再依据一段
________的核苷酸序列设计引物,进行PCR扩增。PCR技术的一个循环包括的环节是
________。将含有目的基因的表达载体导入大肠杆菌前,一般先用
________处理大肠杆菌细胞,使细胞处于一种能吸收周围环境中DNA分子的生理状态。
(2)研究人员将获得的ICF45蛋白注射到若干只健康小鼠体内,一段适宜时间后从小鼠的脾脏中提取出小鼠B淋巴细胞,将其与
________细胞诱导融合。然后经特定的选择性培养基筛选,对筛选出的杂交瘤细胞进行克隆化培养和抗体检测,经多次筛选,最终选择出
________细胞在体外条件下进行大规模培养,这样就可以从培养液中获得大量的ICF45单克隆抗体。
(3)该研究人员利用获得的ICF45单克隆抗体,通过免疫共沉淀技术进一步筛选出与ICF45蛋白相互作用的蛋白质,实验结果如表。已知免疫共沉淀技术是在体外进行的研究蛋白质相互作用的一种技术。其原理是抗体A可与蛋白质A特异性结合,因此使用抗体A可将蛋白质A“沉淀”。如果蛋白质B与蛋白质A相互结合形成复合体,那么抗体A在将蛋白质A“沉淀”的同时,也会把蛋白质B“沉淀”下来。
| 各蛋白质提取结果 | ICF45单克隆抗体免疫共沉淀结果 |
ICF45 | 是 | + |
HSPA9 | 是 | + |
Annexin—A2 | 是 | + |
Myosin9 | 是 | + |
COMT | 是 | - |
注:“+”表示出现“沉淀”条带“-”表示未出现“沉淀”条带。
实验过程中,研究人员对健康人体细胞蛋白提取物中5种蛋白质进行检测,目的是
________。请结合实验原理及表中结果推测,
________最可能是与ICF45蛋白相互作用的蛋白质。