53. 多聚半乳糖醛酸酶(PG)能降解果胶使细胞壁破损。番茄果实成熟
中,PG合成显著增加,能使果实变红变软,但不利于保鲜。利用基因工程的方法减少
PG基因的表达,可延长果实保质期。科学家将PG基因反向接到Ti质粒上,导入到
番茄细胞中,得到转基因番茄。请据图回答:
(1)
提取目的基因:①若已获取PG的mRNA,
可通过
获取PG基因。
②在该基因上游加结构A可确保基因的反向
转录,结构A上应具有
的结合
位点。得到的目的基因两侧需人工合成
BamHI黏性末端。
已知
BamHI的识别序列如图甲所示,请在图乙相应位置上,画出目的基因两侧的黏性末端。
③重组质粒转化到大肠杆菌中的目的是
。
(2)用含目的基因的农杆菌感染番茄原生质体后,可用含有
的培养基进行筛选,与此同时,为能更好地达到培养目的,除营养物质外还需在培养基中加入
。培养24~48h后取样,在质量分数为25%的蔗糖溶液中,观察细胞是否发生
现象,鉴别细胞壁是否再生。
(3)由于导入的目的基因能转录反义RNA,且能与
互补结合,抑制PG基因的正常表达。若转基因番茄的保质期比非转基因番茄
,则可确定转基因番茄成功。
(4)获得的转基因番茄产生的种子不一定保留目的基因,科研人员常采用
技术,使子代保持转基因的优良性状。