胰蛋白酶抑制剂能干扰昆虫的代谢，引起昆虫死亡，但对人体无害。科学家将马铃薯胰蛋白酶抑制剂基因（Pin－Ⅱ）通过农杆菌导入杨树细胞，培育成了抗虫杨树。
注：左图表示含目的基因的DNA分子，下图表示质粒，图中Ampr表示氨苄青霉素抗性基因，Neor表示新霉素抗性基因，复制原点是质粒DNA复制的起点。箭头表示识别序列完全不同的4种限制酶的酶切位点。
回答下列问题：
(1)要获得大量的目的基因，通常采用PCR扩增技术，在PCR扩增仪中已加入了一定的缓冲溶液、含目的基因的DNA分子、Mg2＋，还需要加入的物质有_________ 。通过PCR技术扩增Pin－Ⅱ基因片段，反应过程一般由95℃热变性、55～60℃引物和模板配对、72℃延伸三个步骤，经过多次循环完成。延伸阶段选用72℃而非95℃综合考虑了两个因素，这两个因素是________ 和________ 。
(2)图中的质粒在基因工程操作中通常用作载体，能在受体细胞内稳定存在，除含有Ampr，Neor和多个限制酶切位点外，质粒还具有的主要特点是________ 。
(3)依据图中信息，写出高效构建含Pin－Ⅱ基因片段的重组质粒的简要操作方法：_________ 。
(4)用转基因杨树叶片喂养某种杨树害虫，发现害虫死亡率显著增加，与非转基因的杨树细胞相比较，此转基因杨树的叶片细胞中，可以检测到的物质有_____ 、____ 、____ 。（写3项）
注：左图表示含目的基因的DNA分子，下图表示质粒，图中Ampr表示氨苄青霉素抗性基因，Neor表示新霉素抗性基因，复制原点是质粒DNA复制的起点。箭头表示识别序列完全不同的4种限制酶的酶切位点。
回答下列问题：
(1)要获得大量的目的基因，通常采用PCR扩增技术，在PCR扩增仪中已加入了一定的缓冲溶液、含目的基因的DNA分子、Mg2＋，还需要加入的物质有
(2)图中的质粒在基因工程操作中通常用作载体，能在受体细胞内稳定存在，除含有Ampr，Neor和多个限制酶切位点外，质粒还具有的主要特点是
(3)依据图中信息，写出高效构建含Pin－Ⅱ基因片段的重组质粒的简要操作方法：
(4)用转基因杨树叶片喂养某种杨树害虫，发现害虫死亡率显著增加，与非转基因的杨树细胞相比较，此转基因杨树的叶片细胞中，可以检测到的物质有
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更新时间：2023-04-16 21:33:48
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【推荐1】血清白蛋白是血液的重要组成成分，具有运输物质、抗凝血等生理功能。临床上人血清白蛋白主要作为血浆容量扩充剂广泛应用于出血性休克、烧伤、癌症和白蛋白过少症的治疗。研究人员利用农杆菌转化法将人血清白蛋白基因导入水稻胚乳细胞中，成功培育出能产生人血清白蛋白的转基因水稻。请回答下列问题：
(1)在构建基因表达载体时，常用同种限制酶对含人血清白蛋白基因的DNA片段和Ti质粒进行酶切，目的是________________ 。限制酶能使DNA分子特定部位的______________________ 键断裂。在该过程中，还要注意将人血清白蛋白基因插入启动子和终止子之间，启动子的作用是__________________________________________ 。
(2)利用PCR技术扩增人血清白蛋白基因时、需控制温度条件，当温度上升到______________ 时，可使目的基因DNA变性，双链解开。
(3)要检测转基因水稍的细胞中人血清白蛋白基因是否翻译出人血清白蛋白，方法是_______________ 。与利用乳腺生物反应器生产人血清白蛋白相比，利用转基因植物生产药用蛋白的优势在于____________ （答出两点）。
(1)在构建基因表达载体时，常用同种限制酶对含人血清白蛋白基因的DNA片段和Ti质粒进行酶切，目的是
(2)利用PCR技术扩增人血清白蛋白基因时、需控制温度条件，当温度上升到
(3)要检测转基因水稍的细胞中人血清白蛋白基因是否翻译出人血清白蛋白，方法是
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真题
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【推荐2】PCR技术可用于临床的病原菌检测。为检测病人是否感染了某种病原菌，医生进行了相关操作：①分析PCR扩增结果；②从病人组织样本中提取DNA；③利用PCR扩增DNA片段；④采集病人组织样本。回答下列问题：
（1）若要得到正确的检测结果，正确的操作顺序应该是_________ （用数字序号表示）。
（2）操作③中使用的酶是_________ 。PCR 反应中的每次循环可分为变性、复性、________ 三步，其中复性的结果是_______ 。
（3）为了做出正确的诊断，PCR反应所用的引物应该能与_______ 特异性结合。
（4）PCR（多聚酶链式反应）技术是指_______ 。该技术目前被广泛地应用于疾病诊断等方面。
（1）若要得到正确的检测结果，正确的操作顺序应该是
（2）操作③中使用的酶是
（3）为了做出正确的诊断，PCR反应所用的引物应该能与
（4）PCR（多聚酶链式反应）技术是指
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【推荐3】随着研究的不断深入，PCR方法被不断改进，PCR需要模板DNA、引物、脱氧核糖核苷酸和DNA聚合酶、ATP等条件，其简要过程如图所示。请分析回答下列有关问题：
（1）PCR技术能把某一 DNA片段进行扩增，依据的原理是______ 。PCR与体内DNA复制的不同之处主要表现在环境温度的不同，在PCR中先用94℃高温处理的目的是______________________________ 。
（2）若将1个DNA分子拷贝10次，则需要在缓冲液中至少加入____________ 个引物。
（3）DNA子链复制的方向是__________ ，这是由于______________________________ 。
（4）PCR技术不仅为遗传病的诊断带来了便利，而且改进了检测细菌和病毒的方法。若要检测一个人是否感染了乙肝病毒（DNA病毒），你认为可以用PCR扩增血液中的___________ 。
（1）PCR技术能把某一 DNA片段进行扩增，依据的原理是
（2）若将1个DNA分子拷贝10次，则需要在缓冲液中至少加入
（3）DNA子链复制的方向是
（4）PCR技术不仅为遗传病的诊断带来了便利，而且改进了检测细菌和病毒的方法。若要检测一个人是否感染了乙肝病毒（DNA病毒），你认为可以用PCR扩增血液中的
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解题方法
【推荐1】斑马鱼的酶D由17号染色体上的D基因编码。具有纯合突变基因（dd）的斑马鱼胚胎会发出红色荧光。利用转基因技术将绿色荧光蛋白基因（G）整合到斑马鱼17号染色体上，带有G基因的胚胎能够发出绿色荧光。未整合G基因的染色体的对应位点表示为g。图1和图2所示分别为实验所用的质粒上相关酶切位点以及含绿色荧光蛋白基因（G）的外源DNA片段上具有的相关酶切位点。请据图回答下列问题：
(1)在上述转基因实验中，将G基因与质粒重组，需要的两类酶是___ 。
(2)用图1中质粒和图2外源DNA构建重组质粒时，不能使用___ 切割以免破坏目的基因，若要防止质粒和含目的基因的外源DNA片段自身环化，则应选择下列方法___ 为好。
①只使用EcoRI处理
②使用BamHI和 SamⅠ同时处理
③使用BamHI和HindⅢ同时处理
④使用SamI和HindⅢ同时处理
(3)现用转基因个体N和个体M进行如下杂交实验得到的子代胚胎表现型如图3所示。
①根据上述杂交实验推测亲代M的基因型是___ ，子代中只发绿色荧光的胚胎基因型是___ 。
②杂交后，出现红绿荧光（既有红色又有绿色荧光）胚胎的原因是亲代___ （填“M”或“N”）的初级精（卵）母细胞在减数分裂过程中，同源染色体上的非姐妹染色单体发生了互换，导致染色体上的基因重组。
(1)在上述转基因实验中，将G基因与质粒重组，需要的两类酶是
(2)用图1中质粒和图2外源DNA构建重组质粒时，不能使用
①只使用EcoRI处理
②使用BamHI和 SamⅠ同时处理
③使用BamHI和HindⅢ同时处理
④使用SamI和HindⅢ同时处理
(3)现用转基因个体N和个体M进行如下杂交实验得到的子代胚胎表现型如图3所示。
①根据上述杂交实验推测亲代M的基因型是
②杂交后，出现红绿荧光（既有红色又有绿色荧光）胚胎的原因是亲代
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【推荐2】下图为DNA分子的切割和连接过程。
(1)EcolⅠ是一种__________ 酶,其识别序列是__________ ,切割位点是_______ 与__________ 之间的__________ 键。切割结果产生的DNA片段末端形式为____________ 。
(2)不同来源的DNA片段结合,在这里需要的酶应是__________ 连接酶,此酶的作用是在__________ 与__________ 之间形成__________ 键,而起“缝合”作用的。还有一种连接平末端的连接酶是__________ 。
(1)EcolⅠ是一种
(2)不同来源的DNA片段结合,在这里需要的酶应是
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【推荐3】土壤农杆菌是一种能引起双子叶植物产生冠瘿瘤的土壤细菌，它带有一个大的质粒叫Ti质粒（含冠瘿瘤基因），它携带细菌DNA向宿主植物基因组转化所需信息的重要片段，只有T—DNA片段才转入植物细胞的基因组。其结构及转化过程如图所示，回答相关问题
（1）若用Ti质粒作为抗旱基因的载体，为了使某种植物具有抗旱性状而又不引起植物产生冠瘿瘤，需对Ti质粒进行修饰，即___________ ，将抗旱基因转移至Ti质粒的____________ 中，且要保证复制起始位点和____________ 不被破坏。然后在一定条件下将外植体在含有___________ 的土壤农杆菌的稀释培养基上培养，使得抗旱基因转入植物细胞并整合到植物基因组中。
（2）将上述外植体置于一个含有某种抗生素的合适培养基中进行筛选，发生转化的外植体通过__________ 形成愈伤组织，再通过____________ 产生不定芽和体细胞胚再长出整个植物。
（3）基因转化是否成功应对转基因植物进行鉴定，如果培育成的植株能适应干旱环境，还应进行_________ 水平鉴定，以确定该变异能否遗传给后代。为获得纯合的转基因植株，还需要对转基因植株进行________ 。
（1）若用Ti质粒作为抗旱基因的载体，为了使某种植物具有抗旱性状而又不引起植物产生冠瘿瘤，需对Ti质粒进行修饰，即
（2）将上述外植体置于一个含有某种抗生素的合适培养基中进行筛选，发生转化的外植体通过
（3）基因转化是否成功应对转基因植物进行鉴定，如果培育成的植株能适应干旱环境，还应进行
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【推荐1】【生物——选修3：现代生物科技专题】
普通番茄细胞中含有多聚半乳糖醛酸酶基因，控制细胞产生多聚半乳糖醛酸酶，该酶能破坏细胞壁，使番茄软化，不耐贮藏。科学家将抗多聚半乳糖醛酸酶基因导入番茄细胞，培育出了抗软化、保鲜时间长的转基因番茄。如图为操作流程图，据图回答问题。
（1）实验中的目的基因是_______ 。培育抗软化番茄，应先将该基因进行扩增。过程是：目的基因受热解链，_____ 与相应单链结合，在________ 的作用下沿相反方向延伸。该过程在______ 仪中完成。
（2）构建基因表达载体时必需的工具酶有______________ 。
（3）图中步骤①→②使用的生物技术是_______ 。
（4）根据图中，转基因番茄细胞中的信息传递过程，分析转基因番茄抗软化的原因：由于mRNA1和mRNA2结合，阻碍了______________ 过程，最终使得番茄获得抗软化的性状。
（5）若为避免该外源基因通过花粉传播进入其他植物，应将目的基因导入_________ （填“细胞核”或“细胞质”）。
普通番茄细胞中含有多聚半乳糖醛酸酶基因，控制细胞产生多聚半乳糖醛酸酶，该酶能破坏细胞壁，使番茄软化，不耐贮藏。科学家将抗多聚半乳糖醛酸酶基因导入番茄细胞，培育出了抗软化、保鲜时间长的转基因番茄。如图为操作流程图，据图回答问题。
（1）实验中的目的基因是
（2）构建基因表达载体时必需的工具酶有
（3）图中步骤①→②使用的生物技术是
（4）根据图中，转基因番茄细胞中的信息传递过程，分析转基因番茄抗软化的原因：由于mRNA1和mRNA2结合，阻碍了
（5）若为避免该外源基因通过花粉传播进入其他植物，应将目的基因导入
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解题方法
【推荐2】癌症患者进行化疗或放疗之后，体内白细胞数量大幅度降低，可以注射粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF）增加白细胞的数量。在自然条件下，此细胞因子的含量很低，很难获得。某科研团队将人的GM-CSF基因导入大肠杆菌，大量生产重组GM-CSF，满足了临床需求。请回答下列问题：
(1)怎样获得人的GM-CSF基因？____________
(2)构建GM-CSF表达载体需要
①同一种限制性内切核酸酶②具有某些标记基因的质粒③RNA聚合酶④人GM-CSF基因 ⑤DNA连接酶 ⑥启动子⑦终止子
(1)怎样获得人的GM-CSF基因？
(2)构建GM-CSF表达载体需要
①同一种限制性内切核酸酶②具有某些标记基因的质粒③RNA聚合酶④人GM-CSF基因 ⑤DNA连接酶 ⑥启动子⑦终止子
| A．①②③④⑤⑥⑦ | B．①②④⑤⑥⑦ | C．②④⑥⑦ | D．①②④⑤ |
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【推荐3】科研人员采用转基因体细胞克隆技术获得转基因绵羊，以便通过乳腺生物反应器生产人凝血因子IX医用蛋白，其技术路线如下图。请据图回答：___ ，C代表___ 。由过程①获得的A为___ ，其组成成分一般包括___ 。
(2)在B之前，D的操作是___ ，目的是___ 。受体应选用___ 期的卵母细胞。
(3)进行C时，应该选择身体健康的代孕母羊，并进行___ 处理。由于代孕母羊对移入子宫的重组胚胎基本上不发生___ ，这为重组胚胎在代孕母羊体内的存活提供了可能。
(4)采用绵羊胎儿成纤维细胞进行转基因体细胞克隆，理论上可获得无数只转基因绵羊，其原因是___ 。
(5)由重组细胞到转基因绵羊的培育成功，体现了___ 。
(2)在B之前，D的操作是
(3)进行C时，应该选择身体健康的代孕母羊，并进行
(4)采用绵羊胎儿成纤维细胞进行转基因体细胞克隆，理论上可获得无数只转基因绵羊，其原因是
(5)由重组细胞到转基因绵羊的培育成功，体现了
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【推荐1】某种观赏价值极高的菊花较容易发生虫害，科研人员通过转基因技术将抗虫基因（有遗传效应的双链DNA片段）导入该花卉的体细胞中，进而培育出了抗虫植株。请回答下列问题：
（1）载体是基因工程所用到的工具之一，该工具能与抗虫基因拼接，从化学本质上来说是由于___________ 。
（2）限制酶和DNA连接酶是构建___________ 时用到的两种工具酶。切割含目的基因的DNA和质粒时，常使用同种限制酶切割，目的是___________ 。在培育“抗虫植株”的基因工程操作步骤中，为了鉴别和筛选出含有目的基因的受体细胞，需用到___________ 基因。
（3）培育“抗虫植株”的过程中，将目的基因导入受体细胞常用农杆菌转化法。当植物体受到损伤时，伤口处的细胞会分泌大量的___________ ，吸引农杆菌移向这些细胞。将目的基因插入Ti质粒的_________ 上，通过农杆菌的转化作用，可将目的基因插入植物细胞的染色体DNA上，这样做的目的是___________ 。
（4）若要在个体水平上鉴定目的基因是否在“虫植株”体内表达，请设计实验进行鉴定（写出实验思路即可）：___________ 。
（1）载体是基因工程所用到的工具之一，该工具能与抗虫基因拼接，从化学本质上来说是由于
（2）限制酶和DNA连接酶是构建
（3）培育“抗虫植株”的过程中，将目的基因导入受体细胞常用农杆菌转化法。当植物体受到损伤时，伤口处的细胞会分泌大量的
（4）若要在个体水平上鉴定目的基因是否在“虫植株”体内表达，请设计实验进行鉴定（写出实验思路即可）：
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【推荐2】甜蛋白是一种高甜度的特殊蛋白质。为了改善黄瓜的口感，研究人员利用农杆菌转化法将一种甜蛋白基因成功导入黄瓜细胞，得到了转基因植株。下图1、图2分别为甜蛋白基因编码链（仅示部分碱基）和Ti质粒的示意图，其中①~⑤表示不同位点。回答下列问题：
(1)获取甜蛋白基因时，通常是在细胞内提取mRNA，一般先通过__________ 得到DNA，再经__________ 获取大量甜蛋白基因，酶切后再连接到Ti质粒上。下表为不同限制酶的作用位点，在构建甜蛋白基因表达载体时，应选用的限制酶是__________ 。
(2)研究人员利用农杆菌转化法将一种甜蛋白基因成功导入黄瓜细胞，依据农杆菌的侵染特点，甜蛋白基因应插入到Ti质粒的___________ 上，经过转化作用，进入黄瓜细胞，并将其插入到__________ ，从而使其稳定表达。对载体Ti质粒进行改造时，需要插入多个限制酶单一切点，应选择在图2中的位点__________ （填序号）处插入。
(3)转入甜蛋白基因后的黄瓜细胞，转化后应在培养基中添加__________ （填“潮霉素”或“卡那霉素”），筛选转化成功的愈伤组织。若要获得产甜蛋白能力更强的基因，可以对甜蛋白基因进行改造，最终得到更多的甜蛋白，该过程可以通过蛋白质工程完成，基本思路为__________ （用文字和箭头表示）。
(1)获取甜蛋白基因时，通常是在细胞内提取mRNA，一般先通过
限制酶 | BamHI | PstI | XhoI | XbaI |
识别序列和切割位点 | 5'G↓GATCC3' | 5'C↓TGCAG3' | 5'C↓TCGAG3' | 5'T↓CTAGA3' |
(3)转入甜蛋白基因后的黄瓜细胞，转化后应在培养基中添加
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【推荐3】继哺乳动物乳腺生物反应器研究成功后，膀胱生物反应器的研究也取得了一定进展。最近，科学家培育出一种转基因小鼠，其膀胱上皮细胞可以合成人的生长激素并分泌到尿液中。请回答下列问题：
（1）将人的生长激素基因导入小鼠受体细胞，常用方法是__________________ 。
（2）进行基因转移时，通常要将外源基因转入__________________ 中，原因是__________________ 。
（3）通常采用_________ 技术检测外源基因是否插入了小鼠的基因组。
（4）在研制膀胱生物反应器时，应使外源基因在小鼠的__________________ 细胞中特异表达。
（5）若使外源基因在乳腺细胞中表达，在构建基因表达载体时，必须加入__________________ 。启动子的作用是_____________________________________________ 。
（1）将人的生长激素基因导入小鼠受体细胞，常用方法是
（2）进行基因转移时，通常要将外源基因转入
（3）通常采用
（4）在研制膀胱生物反应器时，应使外源基因在小鼠的
（5）若使外源基因在乳腺细胞中表达，在构建基因表达载体时，必须加入
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